細胞の研究に有用な細胞計測や細胞剥離用製品など 細胞培養汎用品特集

末梢血由来のものを除く初代細胞は、足場依存性の接着細胞であり、in vitroで適切に増殖するためには表面が必要です。ほとんどの場合、初代培養細胞はコーティングされていない平らなプラスチック容器内で培養されますが、表面積を大幅に増やすことができるマイクロキャリアを使用する場合もあります。適切な増殖因子とサイトカインを添加した基本培地より構成される完全細胞培地が必要となります。初代培養の確立の際には、宿主組織由来の汚染を避けるため、増殖培地への抗生物質の添加が有用である場合があります。しかし、アンフォテリシンBなどの試薬は、時間の経過とともに細胞に毒性を示す可能性があるので、抗生物質の長期使用はお勧めできません。
　⇒　フナコシのオススメ製品はこちら　「培養」の培養液の製造受託サービスをチェック！
　⇒　フナコシのオススメ製品はこちら　「培養機材」の各種培養プレート／ディッシュ／フラスコをチェック！

維持期は、細胞が培養皿の表面に接着したときから始まります。接着は通常、培養開始から約24時間後に起こります。DMSOは初代培養細胞に有害で、融解後の生存率の低下を起こす可能性があるため、凍結保存された接着細胞の培養を開始する場合は、細胞が接着したら使用済み培地を除去することが重要です。細胞が所望の細胞コンフルーエンスのパーセンテージに達し、活発に増殖している場合は、継代培養を行う時期です。コンフルエンス後の細胞は分化し、継代後の増殖が遅くなる可能性があるため、100％コンフルエンスに達する前に初代培養細胞の継代培養をを行うのがベストです。
　⇒　フナコシのオススメ製品はこちら　「血清」のウシ胎児血清（FBS）をチェック！

細胞コンフルエンスとは、培養容器内に付着した細胞が培養容器をどのくらい覆っているかという割合のことです。例えば、100％細胞コンフルエンスとは、細胞で表面積が100％覆われていることを意味し、一方、50％細胞コンフルエンスとは、表面の約半分が覆われていることを意味します。細胞の種類によって継代培養に必要となるコンフルエンスエンドポイントが異なるため、細胞培養において追跡・評価するための重要なパラメータとなります。

細胞数の推定や生存率の決定には、一般にトリパンブルーやエリスロシンBなどの色素排除法とともに血球計算板が使用されます。一般的な血球計算盤は、かなり厚いスライドガラスで、両側に2つのカウンティング・チャンバー（血球計算盤とカバースリップの隙間）があります。各カウンティング・チャンバーの表面は鏡面で、9個の計数用の正方形からなる3×3 mmのグリッドが付いています。チャンバーの側面は隆起しており、チャンバー床面から正確に0.1 mmの高さにカバースリップを保持することができます。9つの計数用の正方形の容量は、それぞれ0.0001 mlです。また、細胞数の計数には自動セルカウンターを使用することもできます。
　⇒　フナコシのオススメ製品はこちら　「細胞計測」のDisposable Hemocytometerをチェック！

足場依存性細胞は単層で増殖し、指数関数的な増殖の維持には一定間隔での継代培養を行う必要があります。単層の継代培養では、細胞間および細胞内と細胞表面の結合の破壊を伴います。ほとんどの接着性初代培養細胞は、トリプシン／EDTAなどの低濃度のタンパク質分解酵素を用いて、タンパク質の接着結合を消化する必要があります。細胞を解離し、単一細胞懸濁液に分散後、細胞数を計数します。適切な細胞濃度に希釈してから新鮮な培養容器に移すと、そこで細胞は再び接着し、分裂します。
　⇒　フナコシのオススメ製品はこちら　「細胞剥離」の細胞の剥離／分離／分散溶液　Accutaseをチェック！

細胞を凍結保存および回復する際には、それぞれの過程において細胞損傷や細胞死を最小限に抑えるための特別な注意が必要です。ヒト細胞を凍結保存する際は、DMSOやグリセロールなどの凍結保護剤を使用するのが最適です。ほとんどの初代培養細胞は、完全増殖培地 80％にFBS 10％およびDMSO 10％を添加した混合液中で凍結保存を行えます。凍結は、細胞内での氷の結晶の形成を最小限に抑えるため、-1℃/minの速度でゆっくりと行います。凍結後の培養細胞は、液体窒素気相中、または-130℃以下で保存されます。
凍結保存された細胞の融解は、37℃の水槽に凍結した細胞を約1～2分間浸すことで短時間で完了します。初代培養細胞は凍結保存からの回復中にダメージを受けやすいので、解凍において遠心分離は使用しないで下さい。解凍後、直接細胞を播種し、最初の24時間は培養細胞を接着させ、その後に培地を交換することにより残留のDMSOを除去するのが最善の方法です。
　⇒　フナコシのオススメ製品はこちら　 「凍結保存液・保管」のDMSOフリー凍結保存液クライオスカーレス（CryoScarless^®）をチェック！