HOME> 試薬> 細胞培養> 細胞培養一般試薬> 細胞分散用試薬> 組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutase/Accutase LZ

組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutase/Accutase LZ

掲載日情報:2017/09/01 現在Webページ番号:2334

接着細胞の剥離や,組織から初代培養細胞を分離,分散させるのに適した調製済み試薬です。ヒトES細胞,ヒト間葉系幹細胞(human mesenchymal stem cell),ヒト神経幹細胞(human neural stem cell)などにおける使用実績があります。
溶液状でReady-to-useのAccutaseと,凍結乾燥粉末状のAccutase LZがあります。

Accutaseのサンプルをご用意しています。サンプルをご希望の方は当社テクニカルサポート(下記参照)までお問い合わせ下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

     
組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutaseの外観組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutase LZの外観
Accutase(溶液) Accutase LZ(凍結乾燥粉末)


組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutaseの使用例

特長

  • プロテアーゼ活性とコラゲナーゼ活性が最大限に効果を発揮するように組み合わせてあります。
  • 穏やかかつ迅速に作用するので,高い細胞生存率を示します。
  • 哺乳動物細胞や微生物由来の物質は含んでいません。
  • AccutaseはDulbecco’s PBS(0.5 mM EDTA・4Na,フェノールレッド含有)で調製済みのReady-to-useフォーマットです。
  • Accutase LZは凍結乾燥品で,省スペースで保管できます。蒸留水を加えて溶解し,ろ過滅菌を行って調製します。1バイアルで500 mlのAccutaseが調製できます。調製方法は下記をご覧下さい。
  • 反応停止や中和操作は不要です。
  • Accutaseを用いて剥離,分散させた細胞は,様々なアプリケーションに使用できます。
品名 Accutase Accumax
(関連製品)
製品外観 組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutaseの外観2 組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accumaxの外観
酵素活性 標準 強め
反応停止,中和操作 不要
動物・微生物由来成分 不含
フェノールレッド 含有 不含

アプリケーション例

  • バイオリアクターによる細胞の大量培養
  • 細胞の継代
  • フローサイトメトリー
  • 細胞表面マーカーの解析
  • 血清飢餓による細胞周期同調
  • がん遺伝子導入による形質転換
  • ウイルス増殖試験
  • 神経冠細胞移動アッセイ
  • 細胞増殖アッセイ
  • 細胞の接触走性アッセイ
  • 腫瘍細胞の遊走アッセイ

使用実績のある細胞

線維芽細胞 ケラチノサイト 血管内皮細胞
血管平滑筋細胞 肝細胞 肝前駆細胞
ヒトES細胞
(human embryonic stem cell)
ヒト間葉系幹細胞
(human mesenchymal stem cell)
ヒト神経幹細胞
(human neural stem cell)
ニワトリ初代培養神経細胞 骨髄幹細胞 マクロファージ
マウス精巣胚細胞 293 3T3
A375 BHK CHO
COS D54 HeLa
HT1080 L929 M24
NT2 MG63 U251
Sf9 Vero

組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutaseによる細胞の剥離

Accutaseによる細胞の剥離
培養用ディッシュを用いてDMEM(10% FBS含有)培地で培養したヒト線維肉腫MG63細胞を,Accutaseを用いて剥離した。Accutase処理時間を変えて細胞を回収して計数を行い,細胞生存性を測定した。Accutaseでの処理により,迅速に細胞剥離が起こり(処理後5分),単一細胞に分散し,その後の細胞生存性も高いことがわかる。Accutaseは穏やかに作用するため,45分間処理した細胞でも,97±3%と高い生存性を有していた。

組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液 Accutaseにより剥離したhES細胞の凍結後の生存性

Accutaseにより剥離したhES細胞の凍結後の生存性
ヒトES細胞を培養後,Accutaseまたはコラゲナーゼで剥離し,凍結保存した。液体窒素中で2か月間保存後に播種し,1日後に全細胞数と生存細胞数を計数した。Accutaseで剥離処理を行った細胞(緑色)の方が,コラゲナーゼで剥離を行った細胞(青色)よりも,凍結保存後の生存細胞数が多いことがわかる。

目次に戻る

操作方法概略

操作はすべて滅菌条件下で行って下さい。

  1. 接着性細胞を培養している容器から,培地を吸引除去する。
  2. 細胞全体を覆う量のAccutaseを添加する。
  3. 約5~10分間静置する。
  4. 顕微鏡下で細胞を観察し,細胞の形態が球状となって軽く浮遊していることを確認したら,容器の縁を何回かタッピングする(または穏やかに数回ピペッティングを行う)。
  5. 細胞数を計数し,継代する。酵素阻害物質の添加や洗浄は不要。

■詳細プロトコル(英語)

目次に戻る

Accutase LZの調製方法概略

  1. 400 mlの室温または冷蔵蒸留水を用意し,500 mlメスシリンダーに入れる。
  2. Accutase LZのバイアルのふたを外し,冷蔵蒸留水40 mlを加える。ふたを閉めて1~2分間ボルテックスまたは転倒撹拌を行い,溶解させる。
  3. ピペットを用いてバイアル中のAccutase溶液をメスシリンダーに移す。
  4. 空になったバイアルに25 mlの冷蔵蒸留水を加え,すすいだ後,同様に溶液をメスシリンダーに移す。これをもう一度繰り返す。
  5. メスシリンダーに冷蔵蒸留水を加え,500 mlまでメスアップする。
  6. パラフィルムなどでメスシリンダーに封をして,転倒撹拌を複数回行い混合する。
  7. 0.22μm のフィルターを用いてろ過滅菌を行う。セルロースメンブレンなど,タンパク質付着性の低いフィルターを用いる。
  8. 調製したAccutase溶液は,冷蔵(2~8℃)で約2か月保存可能。

目次に戻る

Accutase / Accumax 使用文献リスト

目次に戻る

FAQ

FAQ (クリックで開閉します)

Q-1. What are the target cell lines that Accutase was designed for?
どの細胞株にAccutaseを使用できますか?
A-1. Accutase can be used whenever gentle and efficient dissociation of any adherent cell line is needed. Accutase is a direct replacement for trypsin. Add enough Accutase to just cover your cells. Do not add less and then aspirate up and down, this defeats the advantages of Accutase. Wait for the cells to detach on their own.
Accutaseは穏やかに効率よく剥離させたい接着細胞株にご使用いただける,トリプシン代替品です。細胞全体が浸る十分量のAccutaseを加え,細胞が自然に剥がれるまでお待ちください。

Q-2. Can I use Accutase to dissociate non-adherent clumpy cells?
非接着細胞塊の分離にAccutaseを使用できますか?
A-2. Yes. Accutase can be used to dissociate spheres of neural progenitors (neurospheres). However, if the clumps do not dissociate completely, then consider using Accumax which contains the Accutase enzymes, but at a higher concentration.
はい。神経前駆細胞塊や神経幹細胞塊(neurosphere)といった非接着細胞塊の分離にもAccutaseをご使用いただけます。細胞塊が完全に分離しないようでしたら,Accutaseに含まれる酵素を高濃度に調製したAccumaxのご使用をご検討ください。

Q-3. The frozen bottle of Accutase shows uneven color distribution and upon thawing it has layered color distribution. Is this normal?
凍結したAccutaseは層状になったりして色が一様ではないようですが,正常ですか?
A-3. Yes. During the defrosting procedure or shipping, uneven color can be observed. However, this will not compromise the activity or performance of Accutase. Just be sure to mix the defrosted Accutase by inverting the bottle to get even color before use.
凍結した状態や解凍中でも色むらがみられることがありますが,Accutaseの品質に問題はございません。Accutaseを解凍されましたらご使用前にボトルを反転させて混合してください。

Q-4. The Accutase or Accumax arrived partially thawed. Can I still use it?
一部解けてAccutase, Accumaxが納品されました。そのまま使用できますか?
A-4. Yes. As long as the product contains an "ice-cube" or is cool to the touch it can be placed in the refrigerator for later use. It also can be refrozen for long term storage (more than a month before use).
氷が残っている状態や冷たい状態で届いたようでしたら大丈夫です。冷蔵庫・冷凍庫に入れて保存していただけます。

Q-5. I did not read the insert thoroughly and thawed it at 37 °C. Can I still use it?
説明書を読まずに37℃で解凍してしまいました。そのまま使用できますか?
A-5. If it was exposed to 37 °C just until complete thawing was achieved without raising its temperature to 37C, it still can be used. However, it could result in decreased enzyme activity and it may take more time to get full dissociation. If you observe this, consider starting with a new bottle. If a bottle of Accutase or Accumax is kept at 37 °C for more than one hour, it will loose its activity.
37℃の湯せんで解凍し 製品自体の温度が37℃まで上がっていないようでしたら,そのままご使用いただけます。しかし,酵素活性が落ちて細胞剥離・分離に時間がかかってしまう場合がありますので,そのような場合は新しいものに替えていただくことをおすすめします。なお,AccutaseやAccumaxは37℃で1時間以上おいてしまうと活性が失われてしまいます。

Q-6. Do I need to aliquot and refreeze Accutase or Accumax after I defrost a bottle?
解凍したAccutaseやAccumaxは分注して冷凍保存しないといけないのですか?
A-6. No. Once thawed, it is stable for at least 2 months in the refrigerator if replaced promptly after use in the refrigerator.
いいえ,一度解凍されましたら冷蔵保存で約2ヵ月保存していただけます。

Q-7. Do I need to wash my cells before adding Accutase?
Accutaseを加える前に細胞を洗浄する必要はありますか?
A-7. No, pour off the media and add enought Accutase to cover your cells and wait for them to "ball up".
いいえ,培地を除去しましたら細胞が覆われるくらいの十分量のAccutaseを加えていただき,細胞が剥がれてくるのをお待ちください。

Q-8. Do I need to stop the dissociation action of Accutase with serum?
Accutaseの使用後,血清による反応停止や中和操作は必要ですか?
A-8. Usually not. Accutase is gentle enough that only dilution of the reagent with DPBS or media is required to stop the dissociation activity. In the unusual cases where inactivation is required, the standard trypsin inhibitors will work, such as soybean trypsin inhibitor.
通常は不要です。PBSや培地でAccutaseの濃度を薄めるだけで細胞分離作用は停止します。酵素の不活性化が必要となる場合には,ダイズトリプシン阻害因子などのトリプシン阻害物質をご使用いただけます。

Q-9. Do I need to wash Accutase out after using?
使用後Accutaseを洗い流す必要はありますか?
A-. No, this is one of the advantages of using Accutase.
不要です。使用後Accutaseを洗い流す必要がないことはAccutaseの特長の1つです。

Q-10. Do I need to dilute Accutase before use?
Accutaseは使用前に希釈する必要はありますか?
A-.10 No. Accutase is supplied as a convenient, ready to use reagent. No dilution required prior to use.
いいえ,Accutaseは便利な希釈調製済試薬ですので,希釈せずにそのままご使用いただけます。

Q-11. How long should I leave the Accutase on my cells?
細胞をAccutaseに浸して,どれくらい待てばいいですか?
A-11. Detachment times for Accutase are similar to trypsin. This time should be determined empirically. Look under the micrscope and watch them turn from spidery to little balls. In general, cells can be left in Accutase without damage for a much longer time than trypsin.
Accutaseの細胞剥離にはトリプシンと同じくらいの時間を要しますが,所要時間は実験的に(経験則で)検討されることをおすすめいたします。通常,トリプシンよりかなり長い間Accutaseに浸していても,細胞はダメージを受けません。

Q-12. What is Accutase made from?
Accutaseは何から作られているのですか?
A-.12 Accutase contains no mammalian or bacterial components. It is a natural enzyme mixture with proteolytic and collagenolytic enzyme activity. This means it mimics the action of trypsin and collagenase at the same time. However, because it is more efficient than mammalian trypsin & collagenase, it is formulated at a much lower concentration making it less toxic, gentler just as effective.
Accutaseはタンパク質分解およびコラーゲン分解作用を持った天然の酵素の混合物であり,哺乳類動物やバクテリア由来のものを含んでおりません。トリプシンとコラゲナーゼと同じ働きをしますが,それらよりずっと低毒性です。

Q-13. What is the difference between Accutase and Accumax?
AccutaseとAccumaxの違いはなんですか?
A-.13 Accumax contains the same proteolytic and collagenolytic enzymes as Accutase, but is formulated at a higher concentration and does not contain phenol red.
AccumaxにはAccutaseと同じく,タンパク質分解酵素とコラーゲン分解酵素を含んでいますが,高濃度であり,また,フェノールレッド不含です。

Q-14. Do I need to worry about over-dissociating my cells with Accutase?
Accutaseの処理過多による細胞の影響はありますか?
A-.14 No. However, although Accutase is gentle on cells, the optimal time for dissociation should be determined for your specific cell type and application.
いいえ,ありません。ただし,Accutaseは細胞に対して穏やかに作用しますが,ご使用される細胞や実験用途に応じたAccutase処理時間を最適化されることをおすすめいたします。


目次に戻る

使用動画

Semper Lenis "Always Gentle" reattachment of neuronal stem cells passaged with Accutase.



目次に戻る

価格

[在庫・価格 :2019年10月23日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Accutase
- 280
説明文
組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年2月15日号 p.19
ニュース2018年3月1日号 p.3

製品記事 PSdif-BA Brown Adipocyte Differentiation Kit
StemXVivo Endoderm / Ectoderm / Mesoderm Kit
PSdif-Cardio Cardiomyocyte Differentiation Kit
細胞数の測定 [ 参考資料 ]
関連記事
Accutase
- 264
説明文
組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年2月15日号 p.19
ニュース2018年3月1日号 p.3

製品記事 細胞数の測定 [ 参考資料 ]
関連記事
AccutazeLZ-Lyophilized Accutase (500ml)
10日程度  0
説明文
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ

製品記事 細胞数の測定 [ 参考資料 ]
関連記事

[在庫・価格 :2019年10月23日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

Accutase

文献数:280

  • 商品コード:AT104
  • メーカー:ICT
  • 包装:100ml
  • 価格:¥3,800
  • 在庫:3個以上
  • 納期:-
  • 法規制等:

説明文 組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年2月15日号 p.19
ニュース2018年3月1日号 p.3

製品記事 PSdif-BA Brown Adipocyte Differentiation Kit
StemXVivo Endoderm / Ectoderm / Mesoderm Kit
PSdif-Cardio Cardiomyocyte Differentiation Kit
細胞数の測定 [ 参考資料 ]
関連記事

Accutase

文献数:264

  • 商品コード:AT104-500
  • メーカー:ICT
  • 包装:500ml
  • 価格:¥12,000
  • 在庫:3個以上
  • 納期:-
  • 法規制等:

説明文 組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年2月15日号 p.19
ニュース2018年3月1日号 p.3

製品記事 細胞数の測定 [ 参考資料 ]
関連記事

AccutazeLZ-Lyophilized Accutase (500ml)

文献数:0

  • 商品コード:AT106-500
  • メーカー:ICT
  • 包装:1vial
  • 価格:¥17,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:10日程度 
  • 法規制等:

説明文
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ

製品記事 細胞数の測定 [ 参考資料 ]
関連記事


目次に戻る

関連製品:細胞計算盤

微細金型加工技術を応用した,高精度なディスポーザブル細胞計算盤です。1枚の計算盤で4種類の試料を計測できるため(1試料当たり60円以下),コストパフォーマンスに優れた製品です。

1試料当たり60円以下のディスポーザブル細胞計算盤 Disposable Hemocytometer Thermoprobeバナー

目次に戻る

お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。