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ヒト多能性幹細胞を褐色脂肪細胞に分化させるキット PSdif-BA Brown Adipocyte Differentiation Kit

掲載日情報:2014/02/26 現在Webページ番号:7761

ヒトES細胞やiPS細胞などの多能性幹細胞を、褐色脂肪細胞に分化させることができる培地のセットです。

特長

  • 褐色脂肪細胞への分化に必要な各種因子を含む3種類の培地を用いて、段階的に培養することにより、ヒトES / iPS細胞を褐色脂肪細胞に分化させます。
  • ポリペプチドから成る分化誘導因子およびモジュレータを含む、無血清培地です。
  • わずか10日間で分化させることが可能です。
  • 均一に分化させるよう、単層の細胞への処理に最適化されています。
  • 複数の細胞株に処理しても、再現性を示します。
  • 肥満、糖尿病やメタボリックシンドロームなどの研究に最適です。
  • 6ウェルプレートを用いた培養で、Starter Kit(#PB-STR)は3ウェル分(~5×106 starting cells)、Regular Kit(#PB-REG)は15ウェル分(~2.5×107 starting cells)の培養が可能です。

本キットは、StemRD社の無血清・フィーダーフリー培地「PSGro」(#PSGro-500:下記参照)で培養したES / iPS細胞用に最適化されています。「PSGro」の詳細についてはこちらをご覧下さい。

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キット内容

キット内容 用 途 容 量
Starter Kit
(#PB-STR)
Regular Kit
(#PB-REG)
PSGro Plus ES / iPS細胞の培養 30 ml 130 ml
PSdif-BA A 中胚葉の誘導 10 ml 50 ml
PSdif-BA B 造血前駆細胞の誘導 10 ml 50 ml
PSdif-BA C 褐色脂肪前駆細胞の誘導 10 ml 50 ml
BAGro 褐色脂肪細胞の成熟、維持 55 ml 250 ml

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操作方法概略

PSGro Plus培地での培養

  1. PSGro培地で培養中のヒトES / iPS細胞から、PSGro培地を除去し、PBSで洗浄する。
  2. Accutase(Innovative Cell Technologies社、#AT104)を添加して、37℃で3~5分インキュベートし、細胞を剥離・分散させる。
  3. 細胞にPSGro Plus培地を添加し、ピペッティングにより懸濁させた後、コニカルチューブに移して室温で200×g 5分間遠心する。
  4. 遠心後の上清を除去し、再度PSGro Plus培地を添加し、細胞を懸濁させる。この際、ThiazovivinまたはY-27632などのROCK阻害物質を添加することにより、細胞の生存率を向上させることができる。
  5. 細胞をMatrigel(BD社製)をコーティングしたプレートに播種する。
  6. PSGro Plus培地(ROCK阻害物質を含まない)を毎日交換し、80%コンフルエントになるまで培養する。

褐色脂肪細胞への分化誘導を行う際、最適な細胞密度は、40~60%コンフルエントです。

PSGro BA培地による分化誘導

  1. PSGro plus培地を除去してPBSで洗浄した後、PSdif-BA A培地で2日間培養する。
  2. PSdif-BA A培地を除去して、PSdif-BA B培地で2日間培養する(培地交換は行わない)。
  3. PSdif-BA B培地を除去して、PSdif-BA C培地で2日間培養する(培地交換は行わない)。
  4. PSdif-BA C培地を除去して、BAGro培地で2、3日間培養する(その後、2、3日間おきに培地交換を行う)。

培地はすべて室温に戻してから使用して下さい。

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使用例

PSdif-BA Brown Adipocyte Differentiation Kitで培養した細胞のPCR結果
PSdif-BA A培地、PSdif-BA B培地、PSdif-BA C培地を用いて順番に培養した細胞を用いて、PCRを行った。
A→B→Cと異なる培地で培養させてゆくと、脂肪細胞への分化を示すUCP1遺伝子、PRDM16遺伝子の発現が亢進する。

PSdif-BA Brown Adipocyte Differentiation Kitで分化誘導した褐色脂肪細胞

[在庫・価格 :2024年06月19日 20時55分現在]

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組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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