血球計算盤を使用した細胞数の計測 細胞数の測定方法 [ 参考資料 ]
掲載日情報：2015/10/07 現在Webページ番号：3075
血球計算盤を使用した細胞数の測定方法をご紹介します。細胞数の計測は、細胞培養の一連の操作で、細胞を分散・継代するステップで重要となります。細胞数の計測法の一つとして、血球計算盤を使用し、生存率の測定に Trypan blue などの色素を用いる方法があります。
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細胞数の測定
操作例
- 血球計算盤およびカバーガラスの表面を70％イソプロパノールで洗浄し、余分なイソプロパノールをふき取り風乾する。
- Reagent grade water でカバーガラスの側面をぬらし、血球計算盤に貼りつける。
- 細胞懸濁液をパスツールピペット等でよく撹拌後、すぐに血球計算盤に流し込み、溝の上まで満たす。
※懸濁液の血球計算盤への流し込みは、多すぎても少なすぎてもいけない。 - 1.〜3. の操作を別の血球計算盤を使用して行う（2回測定用）。
- 顕微鏡に血球計算盤を置き、グリッドラインに焦点を合わせる（10×対物レンズ）。
- カウンターを用いて1 mm2 エリア（下図参照）の、細胞数を計測する。
※誤差が生じやすいので、正確に数えるためには少なくとも100〜500細胞を計測する。
計算法 ：
C＝N×104
C＝1ml 当たりの細胞数
N＝計測した細胞数の平均
104＝1 mm2 に対する容量の変換値
全体の数＝C×V
V＝細胞を懸濁した液体の容量
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細胞生存率の測定
細胞のおよその生存数を調べる際、色素による簡単な測定法が広く用いられています。この方法で指示薬として使用する色素は、損傷を受けた細胞膜を透過しますが、生細胞の細胞膜は透過しません。したがって、染色された細胞は死細胞であると推測されます。Trypan blue 以外にも、Erythrosin, Nigrosin 等の色素が使用されます。
※細胞生存率測定用のキットもあります。
＜Trypan blue を用いた場合＞
- 細胞懸濁液に Trypan blue を 1 滴垂らし、1〜2分間放置する。
- 血球計算盤を準備し、“細胞数の測定”の操作例 1.〜5. を行う。
- 1mm2 エリアの全体の細胞数と、染色された（暗色）細胞数を測定する。
生存率（％）＝ (計側した全体の細胞数−染色された細胞数)/計測した全体の細胞数 ×100
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ディスポーザブルの簡易型細胞計算盤
Disposable Hemocytometer
微細金型加工技術を応用した、高精度なディスポーザブル細胞計算盤です。1枚の計算盤で4種類の試料を計測できるため、コストパフォーマンスに優れた製品です。
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Disposable hemocytometer (4-chambers) |
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Disposable hemocytometer (4-chambers) |
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Disposable hemocytometer (4-chambers) |
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[在庫・価格 ：2024年04月19日 20時55分現在]
Disposable hemocytometer (4-chambers)
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- 法規制等：
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ディスポーザブル細胞計算盤。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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- 納期：ご照会下さい ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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ディスポーザブル細胞計算盤。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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- 納期：ご照会下さい ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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ディスポーザブル細胞計算盤。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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[在庫・価格 ：2024年04月19日 20時55分現在]
Accumax
文献数： 265
- 商品コード：AM105
- メーカー：ICT
- 包装：100ml
- 価格：¥15,000
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- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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培養細胞分散溶液。細胞塊を穏和な条件下で数分間で分散させ,単一浮遊細胞が容易に得られる。調製済み溶液。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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培養細胞分散溶液。細胞塊を穏和な条件下で数分間で分散させ,単一浮遊細胞が容易に得られる。調製済み溶液。 |
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AccutaseLZ-Lyophilized Accutase (500ml) |
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[在庫・価格 ：2024年04月19日 20時55分現在]
Accutase
文献数： 280
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- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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