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血球計算盤を使用した細胞数の計測 細胞数の測定方法 [ 参考資料 ]

掲載日情報:2015/10/07 現在Webページ番号:3075

血球計算盤を使用した細胞数の測定方法をご紹介します。細胞数の計測は、細胞培養の一連の操作で、細胞を分散・継代するステップで重要となります。細胞数の計測法の一つとして、血球計算盤を使用し、生存率の測定に Trypan blue などの色素を用いる方法があります。

細胞数の測定

操作例

  1. 血球計算盤およびカバーガラスの表面を70%イソプロパノールで洗浄し、余分なイソプロパノールをふき取り風乾する。
  2. Reagent grade water でカバーガラスの側面をぬらし、血球計算盤に貼りつける。
  3. 細胞懸濁液をパスツールピペット等でよく撹拌後、すぐに血球計算盤に流し込み、溝の上まで満たす。
    懸濁液の血球計算盤への流し込みは、多すぎても少なすぎてもいけない。
  4. 1.〜3. の操作を別の血球計算盤を使用して行う(2回測定用)。
  5. 顕微鏡に血球計算盤を置き、グリッドラインに焦点を合わせる(10×対物レンズ)。
  6. カウンターを用いて1 mm2 エリア(下図参照)の、細胞数を計測する。
    誤差が生じやすいので、正確に数えるためには少なくとも100〜500細胞を計測する。

計算法 :

 C=N×104

 C=1ml 当たりの細胞数
 N=計測した細胞数の平均
 104=1 mm2 に対する容量の変換値

 全体の数=C×V

 V=細胞を懸濁した液体の容量

細胞数の測定

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細胞生存率の測定

細胞のおよその生存数を調べる際、色素による簡単な測定法が広く用いられています。この方法で指示薬として使用する色素は、損傷を受けた細胞膜を透過しますが、生細胞の細胞膜は透過しません。したがって、染色された細胞は死細胞であると推測されます。Trypan blue 以外にも、Erythrosin, Nigrosin 等の色素が使用されます。

細胞生存率測定用のキットもあります。

操作例
<Trypan blue を用いた場合>
  1. 細胞懸濁液に Trypan blue を 1 滴垂らし、1〜2分間放置する。
  2. 血球計算盤を準備し、“細胞数の測定”の操作例 1.〜5. を行う。
  3. 1mm2 エリアの全体の細胞数と、染色された(暗色)細胞数を測定する。
 

生存率(%)= (計側した全体の細胞数−染色された細胞数)/計測した全体の細胞数 ×100

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細胞数計測関連製品

ディスポーザブルの簡易型細胞計算盤
Disposable Hemocytometer

微細金型加工技術を応用した、高精度なディスポーザブル細胞計算盤です。1枚の計算盤で4種類の試料を計測できるため、コストパフォーマンスに優れた製品です。
Disposable Hemocytometerの詳細はこちら。
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ディスポーザブルの簡易型細胞計算盤「Disposable Hemocytometer」

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Accumaxの詳細はこちら。

培養細胞の分離/分散溶液「Accumax」

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組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液
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組織・培養細胞の剥離/分離/分散溶液「Accutase/Accutase LZ」

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組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
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