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ヒト多能性幹細胞を心筋細胞に分化させるキット PSdif-Cardio Cardiomyocyte Differentiation Kit

掲載日情報:2017/08/15 現在Webページ番号:7324

ヒトES細胞やiPS細胞などの多能性幹細胞を、心筋細胞に分化させることができる培地のセットです。

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PSdif-Cardio を用いて分化させた心筋細胞の拍動(動画)

PSdif-Cardioを用いて分化させた心筋細胞が拍動する様子の動画です。



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特長

  • 心筋細胞への分化に必要な各種因子を含む3種類の培地を用いて、段階的に培養することにより、ヒトES / iPS細胞を心筋細胞に分化させます。
  • ES / iPS細胞培養用の培地PSGro Plusと、分化させた心筋細胞の維持用培地CardioGroも含まれています。
  • 培地はすべて無血清培地です。
  • 前培養に約3日間、分化誘導に約6日間を有します。分化誘導開始後7~10日間ほどで拍動が観察できます。
  • 6ウェルプレートを用いた培養で、Starter Kit(#PC-STR)は3ウェル分(~1×107 starting cells)、Regular Kit(#PC-REG)は15ウェル分(~5×107 starting cells)の培養が可能です。

本キットは、StemRD社の無血清・フィーダーフリー培地「PSGro」(#PSGro-500:下記参照)で培養したES / iPS細胞用に最適化されています。「PSGro」の詳細についてはフナコシホームページをご覧下さい。

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キット内容

キット内容 用 途 容 量
Starter Kit
(#PC-STR)
Regular Kit
(#PC-REG)
PSGro Plus 未分化なES / iPS細胞の培養 30 ml 130 ml
PSdif-Cardio A 内胚葉系中胚葉の誘導 10 ml 50 ml
PSdif-Cardio B 心臓中胚葉の誘導 10 ml 50 ml
PSdif-Cardio C 心臓前駆細胞の誘導 10 ml 50 ml
CardioGro 心筋細胞の成熟、維持 50 ml 250 ml

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操作方法概略

PSGro(#PSGro-500)でヒトES / iPS細胞を培養し、分化した細胞はあらかじめ除去して下さい。

PSGro Plus培地での培養

1. PSGro培地で培養中のヒトES / iPS細胞を、播種し直す。PSGro Plus培地に懸濁した細胞をMatrigel(BD社製)をコーティングしたプレートに播種する。この際、ThiazovivinまたはY-27632などのROCK阻害物質を添加することにより、細胞の生存率を向上させることができる。

2. PSGro Plus培地(ROCK阻害物質を含まない)を毎日交換し、80%コンフルエント*1になるまで培養する。

*1心筋細胞への分化誘導を行う際、最適な細胞密度は95~100%コンフルエントです。誘導開始前日に80%コンフルエントであれば、誘導開始日には適した細胞密度に達すると考えられます。

PSdif-Cardio培地による分化誘導

培地はすべて室温に戻してから使用して下さい。

1. PSGro Plus培地を吸引除去し、PBSで洗浄後、PSdif-Cardio A培地を3 ml添加して1日間培養する。

2. PSdif-Cardio A培地を吸引除去し、PBSで洗浄後、PSdif-Cardio B培地を3 ml添加して2日間培養する(培地交換は行わない)。

3. PSdif-Cardio B培地を吸引除去し、PBSで洗浄後、PSdif-Cardio C培地を3 ml添加して3日間培養する(培地交換は行わない)。

4. PSdif-Cardio C培地を吸引除去し、PBSで洗浄後、CardioGro培地を3 ml添加して培養を続ける。2~3日おきに培地交換を行う。

5. CardioGro培地で培養開始後1~4日で、拍動している細胞集団が確認できる。その後数日間は細胞の成長が見られるが、細胞集団が培養ディッシュから剥離してしまうこともある。分化した心筋細胞は数週間に渡って維持できる。

PSdif-Cardio培地で培養中、分化誘導された結果として、ある一定量の細胞の剥離が見られます。培養開始時の細胞密度が低すぎると、大幅な細胞の剥離が起こります。半分以上の細胞が剥離してしまった場合、分化誘導は失敗したと考え、細胞密度を上げて再度培養して下さい。

[在庫・価格 :2024年06月19日 20時55分現在]

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Psdif-Cardio Cardiomyocyte Differentiation Starter Kit
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Psdif-Cardio Cardiomyocyte Differentiation Starter Kit

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PSGro Human iPSC/ESC Growth Medium Set (Basal Medium 450ml and 10× Supplement 50ml)
変更先製品
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  • 商品コード:PGro-500
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■組織および培養細胞分離/分散溶液
接着細胞の剥離や、組織から初代培養細胞を分離、分散させるのに適した調製済み溶液です。

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組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
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Accutase

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説明文 組織および培養細胞分離分散溶液。接着細胞の剥離や,組織からの初代培養用細胞を分離,分散させるのに用いる。調製済み溶液。
別包装品 別包装品あり
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■阻害物質

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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