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ADCC Bioassay Effector Cell V variant (High Affinity) and F variant (Low Affinity)
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ADCC Bioassay Effector Cell V variant (High Affinity) and F variant (Low Affinity)
ADCC活性をルシフェリンの発光量で測定できる遺伝子改変細胞 ADCC Bioassay Effector Cell V variant (High Affinity) and F variant (Low Affinity)
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：65365
エフェクター細胞の代わりに、FcγRIIIaの高親和性バリアント（V158）あるいは低親和性バリアント（F158）を恒常的に発現する遺伝子改変Jurkat T細胞です。エフェクター細胞として用いることで、ADCC活性を測定できます。
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ADCCとは
ADCC（Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity、抗体依存性細胞傷害活性）とは、エフェクター細胞が関与する免疫防御機構です。がん細胞などの「標的細胞」の抗原に対して、特異的な抗体が結合します。次に、その抗体のFc部分に対し、FcγRレセプター（FcγRIIIa）を持つエフェクター細胞（NK細胞、マクロファージ、好中球など）が結合します。その結果エフェクター細胞が活性化し、最終的にグランザイムなどが放出されて標的細胞を破壊（傷害）します。
追加しました。
ADCC活性測定概略
- エフェクター細胞の代わりに、遺伝子改変した Jurkat T細胞（#60540, #60541）を使用する。
- FcγIIIaレセプターからのシグナルが、NFAT (Nuclear Factor of Activated T cells) 応答配列の下流に組み込まれたホタルルシフェラーゼ遺伝子を活性化する。
- 生じたルシフェラーゼの多寡を、ルシフェリンを含むOne Step Luciferase Assay System（#60690）を用い、ルミノメーターで測定する。
追加しました。
応用例
■細胞培養の例
- 液体窒素中に保存した遺伝子改変Jurkat T細胞を、バイアルごと速やかに37℃の温水浴で融解し、中身をG418などの抗生物質を含まない10%FBS添加 RPMI1640培地を入れたチューブに移す。
- 細胞を遠心して回収し、温めた上記培地で再懸濁する。
- 細胞をT25フラスコに移し、5% CO2 、37℃の条件下で培養する。遺伝子改変Jurkat T細胞は、通常のJurkat T細胞よりも若干生育が遅い傾向がある。
- 24時間後、抗生物質を含まない10%FBS添加 RPMI1640培地を3～4 ml加える。
- 抗生物質入りのRPMI培地に交換し、2×106 cells/ mlに達しないうちに最初の継代を行う。継代比率は 1:10～1:20 とし、隔週で行う。
■ADCCアッセイ（ヒトCD20に対するキメラ抗体Rituximabの例）
用意するもの
- 細胞：継代培養した遺伝子改変Jurkat T細胞、WIL2-S細胞（ヒトBリンパ芽球細胞で、標的細胞として使用）
- 抗体：Rituximab（Anti-CD20, #71209）、非特異的コントロール抗体（ネガティブコントロール）
- 抗体を含まないアッセイ用培地
- ONE-Step Luciferase reagent (#60690)
- Rituximab、非特異的コントロール抗体、またはアッセイ用培地に、それぞれ遺伝子改変Jurkat T細胞（FcγRIIIa (F158)）を加え、さらに標的細胞を添加（あるいは非添加）し、5時間以内の刺激を与えます。
- ONE-Step Luciferase reagentを加え、Fcγレセプター由来のシグナルによるNFATレポーター遺伝子の活性化（ルシフェラーゼの増加）をルミノメーターで計測します。
非特異的抗体に標的細胞を添加した群、あるいはRituximabのみではほとんど発光は見られないが、Rituximabに標的細胞を加えた群では強い発光が観察され、また発光強度は Rituximabの添加量に応じていた。
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細胞株のご購入にあたって
BPS Bioscience社の細胞株のご購入の際には、☞ BPS Bioscience License Disclosureをご確認いただくようお願いいたします。
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価格
ADCCバイオアッセイ用細胞
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[在庫・価格 ：2024年04月24日 08時35分現在]
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ADCC Cell Line, Low Affinity |
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ADCC Cell Line, High Affinity |
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[在庫・価格 ：2024年04月24日 08時35分現在]
ADCC Cell Line, Low Affinity
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- 価格：ご照会ください
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- 法規制等：
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※ライセンス同意書の提出が必要。 ※輸入諸費用(60,000円)を別途いただく製品です。 ※受注発注品。※別途ご購入いただきたい製品の商品コード：60190,60690,60184,79796 |
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