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細胞ベースでPD-1活性化/阻害物質スクリーニング、生物活性/リガンド相互作用の解析を行うキット TCR Activator / PD-L1 Mammalian Expression Kit

掲載日情報:2016/08/03 現在Webページ番号:64638

TCR(T細胞レセプター)活性化因子を発現するベクターおよびTCR(T細胞レセプター)活性化因子、およびヒトPD-L1(#60610)またはPD-L2(#60620)発現ベクターのセットです。これらのベクターを導入したHEK293細胞を標的細胞、PD-1/NFAT Reporter/Jurkat T cell(#60535)をエフェクター細胞として共培養することにより、 PD-1の活性化/阻害物質のスクリーニングおよび生物活性やリガンドとの相互作用の解析を行うことができます。

CD27 CHO-K1 Stable Cell Lineの使用例

TCR Activator / PD-L1(#60610), PD-L2 (#60620)Mammalian Expression Kitのアッセイ原理

本アッセイシステムは、標的細胞としてPD-L1(またはPD-L2)および遺伝子改変したT細胞レセプター(TCR)活性化因子を過剰発現するHEK293細胞(右)、エフェクター細胞として別売品のPD-1 / NFAT Reporter/Jurkat T細胞(#60535)(左)を使用します。これらの二つの細胞を共培養することにより、標的細胞上に発現するTCR活性化因子によりエフェクター細胞上のTCR複合体を活性化し、最終的にNFATルシフェラーゼレポーターを発現します。しかし、PD1およびPD-L1(またはPD-L2)の結合によってTCRの活性化が阻害されると、NFAT応答性ルシフェラーゼ活性も抑制されます。この阻害は、抗PD1または抗 PD-L1(抗PD-L2)中和抗体により回復します。中和抗体がPD 1:PD1-L1(またはPD-L2)の相互作用を妨害し、T細胞の活性化が促進されることにより、NFAT応答性ルシフェラーゼレポーターは再活性化されます。

免疫療法(immunotherapy)研究用製品の種類


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PD-1とリガンドとの結合による免疫応答の下方調節

活性化T細胞上で発現するProgrammed Cell Death Protein 1(PD-1)と、そのリガンドのPD-L1またはPD-L2との結合は、免疫応答を下方調節します。PD-1リガンドは多くのがん細胞に見られ、PD-1:PD-L1/PD-L2の相互作用によってT細胞の活性化が抑制され、免疫監視からがん細胞の回避を可能にしています。また、PD-1:PD-L1/PD-L2経路は自己免疫応答の調節にも関与し、多くのがん、多発性硬化症、関節炎、狼瘡およびⅠ型糖尿病の治療標的として注目されています。


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特長

  • キットはTCR活性化因子とヒトPD-L1(#60610)またはPD-L2(#60620)を過剰発現させるベクターとTCR活性化因子のみを過剰発現させるベクターより構成されています。それぞれのベクターをHEK293細胞に導入した細胞を標的細胞として用います。
  • エフェクター細胞としてPD-1/NFAT Reporter/Jurkat T cell(#60535)との共培養により、NFATルシフェラーゼレポーターの発現が促進(Component B導入細胞)または抑制(Component A導入細胞)されます。
  • 別売りの抗PD-1中和抗体または抗PD-L1中和抗体により、PD-1とPD-L1/PD-L2の結合が抑制され、TCRの再活性化(ルシフェラーゼの発現促進)が起きます。これらの中和抗体のかわりに、PD-1の活性化または阻害候補物質を使用することにより、スクリーニングや評価を行うことができます。
  • 別売りのOne-Step Luciferase Assay System(#60690)の使用により、レポーターのルシフェラーゼ活性を簡便、迅速かつ高感度で測定することができます。
  • 適用:PD-1の活性化物質または阻害物質のスクリーニング、PD-1の生物活性やリガンドとの相互作用の評価

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キット内容

品名 TCR Activator /
PD-L1
TCR Activator /
PD-L2
概要
商品コード 60610 60620
Component A TCR activator + Human PD-L1 ヒトPD-L1またはPD-L2の恒常発現ベクター
TCR activator + Human PD-L2
Component B TCR activator TCR活性化因子の恒常発現ベクター

キットには、HEK293細胞などの標的細胞、エフェクター細胞のPD-1/NFAT Reporter Jurkat T cells (#60535)、トランスフェクション試薬*、細胞培養培地、抗PD-1中和抗体(#71120)または抗PD-L1中和抗体(#71213)、One-Step Luciferase Assay System(#60690)は含まれていません。別途ご用意下さい。
測定には、別途マイクロプレート用ルミノメーターが必要です。

* HEK293細胞に実績のあるトランスフェクション試薬の使用をお勧めします。詳しくはリンク先のWeb記事をご参照いただくか、当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。

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使用例

■ 使用例1. 抗PD-1中和抗体(#71120)を用いたルシフェラーゼレポーターアッセイ

HEK293細胞にhuman PD-L1+TCR活性化因子ベクター(#60610)の一過性導入を行った。翌日、NFAT Reporter Jurkat cells(#60635)またはコントロールNFATレポーター細胞を30分間抗PD-1中和抗体とプレインキュベートし、HEK293細胞と共培養した。16時間後、細胞にOne-Step Luciferase Assay System(#60690)を加えてNFAT活性の測定を行った。

TCR Activator / PD-L1使用例1

NFAT Reporter Jurkat cells(#60635)とPD-L1+TCR活性化因子を過剰発現するHEK293細胞との共培養後、抗PD-1中和抗体を添加した場合のルシフェラーゼ活性測定結果

TCR Activator / PD-L1使用例2

コントロールNFAT Reporter Jurkat cellsとPD-L1+TCR活性化因子を過剰発現するHEK293細胞との共培養後、抗PD-1中和抗体を添加した場合のルシフェラーゼ活性測定結果

TCR Activator / PD-L1使用例3

PD-1/NFAT Reporter-Jurkat cellsにおける抗PD-1中和抗体の用量応答曲線

■ 使用例2. 抗PD-L1中和抗体(#71213)を用いたルシフェラーゼレポーターアッセイ

HEK293細胞にhuman PD-L1+TCR活性化因子ベクター(#60610, Component A)の一過性導入を行った。翌日、NFAT Reporter Jurkat cells(#60535)またはコントロールNFATレポーター細胞を30分間抗PD-L1中和抗体とプレインキュベートし、HEK293細胞と共培養した。16時間後、細胞にOne-Step Luciferase Assay System(#60690)を加えてNFAT活性の測定を行った。

抗PD-L1中和抗体

■ 使用例3. PD-L2と抗PD-L1中和抗体(#71213)を用いたルシフェラーゼレポーターアッセイ

HEK293細胞にhuman PD-L2+TCR活性化因子ベクター(#60620)の一過性導入を行った。翌日、NFAT Reporter Jurkat cells(#60535)またはコントロールNFATレポーター細胞を30分間抗PD-1中和抗体とプレインキュベートし、HEK293細胞と共培養した。16時間後、細胞にOne-Step Luciferase Assay System(#60690)を加えてNFAT活性の測定を行った。

PD-L2と抗PD-L1中和抗体

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価格

[在庫・価格 :2024年04月20日 00時00分現在]

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詳細 商品名
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納期 文献数
TCR Activator / PD-L1 Mammalian Expression Kit (500reactions)
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説明文
TCR(T細胞レセプター)活性化因子を発現するベクターおよびTCR(T細胞レセプター)活性化物質とヒトPD-L1を発現するベクターのセット。
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
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TCR Activator / PD-L1 Mammalian Expression Kit (500reactions)

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説明文 TCR(T細胞レセプター)活性化因子を発現するベクターおよびTCR(T細胞レセプター)活性化物質とヒトPD-L1を発現するベクターのセット。
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商品コードをクリックすると、価格表がご覧いただけます。

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PD-1/NFAT-Reporter-Jurkat Recombinant Cell Line 2 vials 60535 ヒトPD-1を恒常的に発現し、さらにNFAT応答因子の制御下でホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現する組換えJurkat T細胞、細胞量:2 vials×106 cells (in 1 ml of 10%DMSO)
3か月間の使用に限りお試し価格でご提供いたします。詳細はお問い合わせ下さい。
Anti-PD-1 neutralizing antibody 100μg 71120 抗PD-1中和抗体
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One-Step Luciferase Assay System 10 ml 60690-1 組換え体ルシフェラーゼレポーター細胞株を用いた活性測定および阻害物質のスクリーニングを、ワンステップで簡便、迅速に行う試薬セット。
100 ml 60690-2


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関連製品の価格

[在庫・価格 :2024年04月20日 00時00分現在]

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詳細 商品名
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納期 文献数
PD-1/NFAT Reporter - Jurkat Recombinant Cell Line
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
※ライセンス同意書の提出が必要。 ※輸入諸費用(60,000円)を別途いただく製品です。 ヒトPD-1を恒常的に発現し,さらにNFAT応答因子の制御下でホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現する組換えJurkat T細胞,細胞量:2 vials×106 cells(in 1 ml of 10%DMSO)。※受注発注品。※受注発注品。※別途ご購入いただきたい製品の商品コード:60690,60184,79796,60190
Gene Accession No: NM_005018
法規制等
保存条件 液体窒素中での保存 法規備考
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説明文 ※ライセンス同意書の提出が必要。 ※輸入諸費用(60,000円)を別途いただく製品です。 ヒトPD-1を恒常的に発現し,さらにNFAT応答因子の制御下でホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現する組換えJurkat T細胞,細胞量:2 vials×106 cells(in 1 ml of 10%DMSO)。※受注発注品。※受注発注品。※別途ご購入いただきたい製品の商品コード:60690,60184,79796,60190
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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