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Anti-CD19 CARおよびNFATルシフェラーゼレポーターの二重安定発現株 Anti-CD19 CAR/NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line

掲載日情報:2020/08/24 現在Webページ番号:67160

CAR(Chimeric Antigen Receptor:キメラ抗原レセプター)T細胞による治療法の研究に有用な、Anti-CD19 CARおよびNFATルシフェラーゼレポーターを発現する二重安定細胞株です。
Anti-CD19 CARの発現、およびCD19/CHO組換え細胞株を含む標的細胞の刺激によるルシフェラーゼレポーターの活性化について検証されており、患者由来の初代T細胞で試験する前のAnti-CD19 CARコンストラクトおよびレンチウイルスの一次スクリーニングや機能検証に使用できます。


Anti-CD19 CARの概略図

Anti-CD19 CARの概略図

Anti-CD19 CARは、CD28、4-1BB共刺激ドメイン、およびCD3ζシグナルドメインを含む第3世代CAR(キメラ抗原レセプター)に結合したAnti-CD19 scFvで構成されています。

CAR(Chimeric Antigen Receptor:キメラ抗原レセプター)T細胞とは

FDA(アメリカ食品医薬局)により、CAR-T細胞の白血病およびリンパ腫への治療への利用が承認されました。CARは、抗体一本鎖可変断片(scFv)に基づく細胞外ドメインと、TCRg鎖に由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、および他の共刺激レセプターを用いて設計された膜貫通タンパク質です。scFvは、がん細胞上の標的タンパク質を認識する特異的結合ドメインを提供、T細胞を単離、活性化し、その後CARを発現する遺伝子をトランスフェクションします。標的タンパク質を発現する腫瘍細胞を同定、攻撃するため、T細胞をリプロブラミングし、がんを特異的に標的とする免疫細胞を作製します。

CAR-T細胞は、BCMAおよびCD22が多発性骨髄腫および急性リンパ芽球性白血病に対する有望な標的であることも示唆されました。CD19標的化CAR-T細胞においては、PD-1:PD-L1およびCD28:CTLA4経路を標的とする治療用抗体との併用療法の開発が進められています。

BPS Biosciences社では、新しいCAR-T細胞療法の探索のために、実験細胞株や組換えタンパク質、およびスクリーニングサービスを提供しています。

CAR-T細胞のイメージ


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特長

  • Anti-CD19 CAR-T細胞構築用レンチウイルスベクターであるAnti-CD19 CAR Lentivirus(#79851)を用いて構築されています(「関連製品」参照)。
  • フローサイトメトリー(FACS)によりAnti-CD19 CARの発現、およびCD19/CHO組換え細胞株を含む標的細胞によって刺激されたルシフェラーゼレポーターの活性化について検証されています。
  • マイコプラズマ種が存在しないことを確認しています。
  • ネガティブコントロールとして使用できるAnti-CD19 CAR negative control/NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line(#79854)もご用意しています(「関連製品」参照)。
  • 細胞数:2×106 cells/1 ml(10% DMSO in FBS)
  • 推奨培地:Thaw Medium 2(解凍・播種用、#60184)、Growth Medium 2H(増殖用、#79784
  • 宿主細胞株:NFAT-luciferase reporter Jurkat cells(#60621
  • 適用:患者由来の初代T細胞を用いる前段階における、様々なCARデザイン・コンストラクトの特異性、有効性、および効力についての検証、CARの動作メカニズム(MOA)の予測、細胞内共刺激および活性化など

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使用例

NFAT-luciferase reporter Jurkat cell lineにおけるAnti-CD19 CAR発現の検証

図1. NFAT-luciferase reporter Jurkat cell lineにおけるAnti-CD19 CAR発現の検証

形質導入率を決定するために、ビオチン標識CD19(#79475)を用いてフローサイトメトリー(FACS)分析を行った。

Anti-CD19 CAR NFATレポーター安定細胞株の共培養アッセイ

図2. Anti-CD19 CAR NFATレポーター安定細胞株の共培養アッセイ

野生型CHOコントロール細胞(青色)は活性化を示さなかったが、CD19/CHO組換え細胞株(橙色)はAnti-CD19 CAR NFAT Jurkat reporter cellでルシフェラーゼ活性を誘導した。
細胞内活性化ドメインを持たないJurkat/NFAT cell lineおよびAnti-CD19 CAR negative control Jurkat/NFAT cell lineをネガティブコントロールとして使用した。


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Anti-CD19 CAR negative control/ NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line

Anti-CD19 CARネガティブコントロールおよびNFATルシフェラーゼレポーターを発現する二重安定細胞株です。
Anti-CD19 CARネガティブコントロールは、細胞内シグナル伝達ドメインのないCD28膜貫通モチーフに結合したAnti-CD19 scFvで構成されています。
FACSによりAnti-CD19発現が確認されていますが、CD19/CHO組換え細胞株を含む標的細胞による刺激は、この細胞株のルシフェラーゼレポーター遺伝子を活性化しません。
この細胞株は、Anti-CD19 CAR / NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line(#79853)のネガティブコントロールとして使用できます。

Anti-CD19 CARネガティブコントロールの概略図

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Anti-CD19 CAR Lentivirus

CD19を標的とするキメラ抗原レセプター(CAR, Chimeric Antigen Receptor)を発現するT細胞の構築に用いる、高力価を有するredy-to-useのレンチウイルス粒子です。

Anti-CD19 CAR Lentivirusのベクターマップ

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Anti-CD19 CAR Lentivirus (CD19 SCFV-CD28-4-1BB-CD3ζ)

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