免疫染色のコツが丸わかり！（Vector社) 免疫染色(免疫組織化学染色、IHC)選択ガイド

免疫染色（免疫組織化学染色, Immunohistochemistry, IHC）とは、抗体を用いて組織中のタンパク質を染色する手法です。

VECTOR Laboratories社では、免疫染色（IHC）の間接法に分類されるアビジン・ビオチン複合体を用いたABC法（ABCキット）および、酵素標識ポリマー法に分類されるImmPRESS^® Reagentを取り扱っています。

VECTASTAIN ABCキットは、一次抗体にビオチン標識二次抗体を反応させた後、アビジン・ビオチン標識酵素複合体反応させるため、高感度かつ低バックグランドで免疫染色（IHC）を行うことができます。このVECTASTAIN ABC Kitを改良し、約5倍の染色感度と低バックグラウンドが特長のVECTASTAIN ABC Eliteキットもあります。ImmPRESS^® Reagentは、酵素マイクロポリマーと二次抗体を結合させた新しい免疫染色（IHC）キットです。わずか 2 ステップで、高感度かつ低バックグラウンドの免疫組織染色を行えます。

VECTASTAIN ABC Elite Kit使用例

組織学的に重要な抗原や、その他の目的分子の局在性を確認する方法として、免疫ペルオキシダーゼ法が、Su-Ming Hsu らにより開発されました。この方法は一次抗体、ビオチン標識二次抗体、およびあらかじめ調製したアビジン- ビオチン標識酵素複合体（Avidin： Biotiny-latedEnzyme Complex）を用いるため、“ABC”法と名付けられました。

アビジンとビオチンの極めて強い結合は実質上不可逆的です。アビジンには四つのビオチン結合部位があります。一方、酵素を含むほとんどのタンパク質は、数分子のビオチンと結合することができます。これらの特性によって、アビジンとビオチン標識酵素の間には、巨大分子複合体（ABC）が形成されます。

VECTOR Laobratories社ではこの原理を応用した免疫染色（IHC）試薬を、キット化して提供しています。VECTASTAIN ABC キットは、アビジンDH とビオチン標識酵素（ペルオキシダーゼ（HRP）、アルカリホスファターゼ（AP）、またはグルコースオキシダーゼ）か成り、免疫染色（IHC）およびその他の用途に最適な複合体を形成するよう、特別に調製されています。アビジン DH- ビオチン標識酵素複合体の構造はまだ完全には解明されていませんが、多くのビオチン標識酵素分子がアビジンを介してクロスリンクし、三次元的配列を形成していると考えられています。複合体は少なくとも１個のビオチン結合部位を有しています。複合体はアビジンDH とビオチン標識酵素をバッファー中で混合するだけで形成され、形成後は数時間は安定です。