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ImmPRESS® Reagent(酵素標識ポリマー法)を用いた二重染色

掲載日情報:2021/03/22 現在Webページ番号:947

免疫染色(免疫組織化学,IHC)特集

VECTOR LABORATORIES社の酵素標識ポリマー法の免疫染色試薬,ImmPRESS® Reagentを用いた二重染色をご紹介します。染色ステップの少ないImmPRESS® Reagentを用いることで,染色ステップ数を抑えつつ,高感度かつ低バックグラウンドの二重染色が可能です。

あらかじめ2種類の酵素標識マイクロポリマーを結合させた二次抗体(PeroxidaseまたはAP標識ウマ抗IgG抗体)が混合済みで,ワンステップで二重染色が可能なImmPRESS® Duet Double Staining Polymer Kit(一次抗体の免疫動物がマウスおよびウサギ用)もあります。ヒトまたは霊長類以外の組織をご使用の場合,免疫動物がマウスまたはウサギ以外の一次抗体をご使用の場合は,ご使用条件に合わせて適切なImmPRESS® Reagentを選択のうえ,本記事の二重染色法(従来法)をご参照下さい。
VECTOR LABOATORIES社のその他の酵素標識ポリマー法の免疫染色試薬については,ImmPRESS® Reagentをご覧下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

ImmPRESS® Reagentを用いた二重染色のプロトコル

酵素標識ポリマー法を用いた二重染色の概略図

図. 二重染色の概略図(第1の抗原検出:1~3,第2の抗原検出:4~6)

第1の抗原検出

  1. 調製済みブロッキング用正常血清を滴下し,20分間反応させる。
  2. 適切なバッファー(2.5% 正常血清または0.1%BSA*1を含む)で希釈した第1の一次抗体を滴下し,反応させる。
  3. バッファーで5分間洗浄する。
  4. ImmPRESS® Reagentを滴下し,30分間反応させる。
  5. バッファーで5分間洗浄する。
  6. 基質溶液*2を滴下し,適切な染色強度が得られるまで反応させる(用いる基質により反応時間が異なる)。
  7. バッファーで5分間洗浄する。

第2の抗原検出

  1. 調製済みブロッキング用正常血清を滴下し,20分間反応させる。
  2. 適切なバッファー(2.5%正常血清または0.1%BSA*1を含む)で希釈した第2の一次抗体を滴下し,反応させる。
  3. バッファーで5分間洗浄する。
  4. ImmPRESS® Reagentを滴下し,30分間反応させる。
  5. バッファーで5分間洗浄する。
  6. 第1の抗原検出とは異なる基質溶液*2を滴下し,適切な染色強度が得られるまで反応させる(用いる基質により反応時間が異なる)。
  7. バッファーで5分間洗浄する。
  8. 対比染色後,脱水・透徹,封入する*3

*1 BSAは免疫組織染色用BSA(#SP-5050)をご使用下さい。
*2 VECTOR LABOATORIES社の酵素基質はEnzyme Substrates for Immunohistochemistryをご覧下さい。
*3 基質により脱水しない場合もあります。
必要に応じてAntigen Unmasking Solution(#H-3300,#H-3301)などを用い,抗原を賦活化させて下さい。
プロトコルの詳細はA Guide to Multiple Antigen Labelingをご確認いただくか,テクニカルサポート部(試薬担当)までお問い合わせ下さい。


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関連動画:ImmPRESS® Reagentを用いたポリマー法の免疫染色

本動画は二重染色についての説明は含まれていません。



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価格

[在庫・価格 :2022年05月18日 23時09分現在]

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納期 文献数
ImmPRESS UNIVERSAL Reagent, Anti-Mouse/Rabbit Ig
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ImmPRESS Reagent, Anti-Mouse IgG
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ImmPRESS Reagent, Anti-Rabbit Ig
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ImmPRESS Reagent, Anti-Goat Ig
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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