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免疫組織化学染色(IHC)に有用です VECTOR社 VECTASTAIN ABC Kit

掲載日情報:2019/07/12 現在Webページ番号:805

免疫染色(免疫組織化学、IHC)特集 免疫染色実験ガイドカタログバナー

免疫染色(IHC)試薬として定評のあるVECTASTAIN ABC Kitをご紹介します。
キットに、基質は含まれていません。
下記の製品以外にも VECTASTAIN ABC Kitシリーズおよび関連製品を多数取り扱っています。

VECTASTAIN ABC法とは

組織学的に重要な抗原や、その他の目的分子の局在性を確認する方法として、新しい免疫ペルオキシダーゼ法が、Su-Ming Hsu らにより開発されました。この方法は一次抗体、ビオチン標識二次抗体、およびあらかじめ調製したアビジン- ビオチン標識酵素複合体(Avidin: BiotinylatedEnzyme Complex)を用いるため、“ABC”法と名付けられました。
VECTOR社の VECTASTAIN ABC Kit は、アビジンDH *とビオチン標識酵素(ペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ)から成り、免疫組織化学染色およびその他の用途に最適の複合体を形成するよう、特別に調製されています。
アビジン DH は VECTASTAIN ABC Kit用に特別に調製された製品です。単品では販売していません。

参考文献
Hsu, S. M., Raine, L., Fanger, H., Am. J. Clin. Pathol., 75, 734 - 738 (1981).
Hsu, S. M., Raine, L., Fanger, H., J. Histochem.Cytochem., 29 , 577 - 580 (1981).

VECTASTAIN ABC Elite Kitを使用した免疫染色(IHC)使用例

VECTASTAIN ABC Elite Kitを使用した免疫染色(IHC)使用例

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VECTASTAIN ABC Kitを用いた免疫染色(IHC)の概略図

1.内在性酵素活性を不活化する。
1.内在性酵素活性を不活化する。
2. 二次抗体を調製した動物種の正常血清を滴下し、一次抗体の非特異的結合をブロックする。
2. 二次抗体を調製した動物種の正常血清を滴下し一次抗体の非特異的結合をブロックする。
3. 一次抗体を滴下する。
3. 一次抗体を滴下する。
4. ビオチン標識二次抗体を滴下する。
4. ビオチン標識二次抗体を滴下する。
5. VECTASTAIN ABC 試薬(アビジン- ビオチン標識酵素複合体)を滴下する。
5. VECTASTAIN ABC 試薬(アビジン- ビオチン標識酵素複合体)を滴下する。
6. 酵素基質溶液を滴下する。
6. 酵素基質溶液を滴下する。
VECTASTAIN ABC Kitを用いた免疫染色(IHC)の概略図

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VECTASTAIN ABC Kitの選択ガイド

VECTASTAIN Kit 酵素*1 染色枚数の目安*2 キット内容
ABC Kit
  • 低バックグラウンドで、シグナルの増幅が大きい
  • 多数の切片を染色する場合、一次抗体が安価な場合に適している
HRP

切片:1,000 ~ 2,000 枚

  • ブロッキング用血清
  • ビオチン標識アフィニティ精製二次抗体
  • 試薬 A
  • 試薬 B

Elite ABC Kit

  • ABC キットを改良したもので、感度が高く(5 ~ 10 倍)、低バックグラウンドで、シグナルの増幅が大きく、短時間で染色可能
  • 抗原濃度が低い場合、厚い切片、神経組織、一次抗体が微量の場合に適している
HRP

切片:500 ~ 1,000 枚

Universal Elite ABC Kit

  • Elite ABC キットと同性能を有し、マウスとウサギ由来の一次抗体に共通に使用可能
HRP

切片:500 ~ 1,000 枚

  • ブロッキング用血清
  • ビオチン標識アフィニティ精製ユニバーサル二次抗体
  • 試薬 A
  • 試薬 B

R.T.U. Universal Elite ABC Kit

  • Universal Elite ABC キットとキット内容は同じだが、あらかじめ混合希釈/安定化済みの試薬キット
HRP

切片:500 ~ 500 枚

Universal Elite ABC PLUS Kit

  • マウスとウサギ由来の一次抗体に共通に使用可能
  • Universal Elite ABC Kitに、内在性酵素ブロッキング試薬、DAB基質を加えたキット
HRP

切片:250 ~ 500 枚

  • ブロッキング用血清
  • ビオチン標識アフィニティ精製ユニバーサル二次抗体
  • 試薬 A
  • 試薬 B
  • BLOXALL Blocking Solution
  • ImmPACT DAB EqV Reagent 1 / 2

ABC-AP Kit

  • 染色密度はやや低いが、非常に高感度(Elite ABC と同程度)
  • バックグラウンドが低く、シグナルの増幅が大きい
AP

切片:1,000 ~ 2,000 枚

  • ブロッキング用血清
  • ビオチン標識アフィニティ精製二次抗体
  • 試薬 A
  • 試薬 B

Universal ABC-AP Kit

  • ABC-AP キットと同性能を有し、マウスとウサギ由来の一次抗体に共通して使用可能
  • 細胞の形態的観察を行う場合(固定組織では内在性のアルカリホスファターゼの影響はない)に適している
AP

切片:500 ~ 1,000 枚

  • ブロッキング用血清
  • ビオチン標識アフィニティ精製ユニバーサル二次抗体
  • 試薬 A
  • 試薬 B

Universal Quick Kit

  • ストレプトアビジンとペルオキシダーゼの複合体をあらかじめ形成させた検出法
  • 他の検出法に比べ簡便・短時間で結果を得ることができる
  • 二次抗体はマウス・ウサギ・ラット・ヤギ・ヒツジ・ウシの IgG を認識可能
    HRP 切片:250 ~ 500 枚
    • ブロッキング用血清
    • ビオチン標識ユニバーサル二次抗体
    • ストレプトアビジンーペルオキシダーゼ複合体

    R.T.U. Universal Quick Kit

    • Universal Quick キットとキット内容は同じだが、あらかじめ混合/希釈/安定化済みの試薬キット
    HRP 切片:250 ~ 500 枚

    *1 HRP:西洋ワサビペルオキシダーゼ、AP:アルカリホスファターゼ
    *2 メンブレンの種類:ニトロセルロースまたはナイロンメンブレン

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    Vector Laboratories社 VECTASTAIN ABC Kitシリーズの種類

    表中の商品コードをクリックすると、直接価格表がご覧いただけます。

    酵素 製品シリーズ 一次抗体の免疫動物 Standard
    Kit*
    Rabbit IgG Mouse IgG Rat IgG Goat IgG Sheep IgG Guinea Pig IgG Human IgG Mouse IgM
    HRP ABC PK-4001 PK-4002 PK-4004 PK-4005 PK-4006 PK-4007 PK-4010 PK-4000
    Elite ABC PK-6101 PK-6102 PK-6104 PK-6105 PK-6106 PK-6103 PK-6100
    Universal Elite ABC PK-6200 PK-6100
    R.T.U. Universal Elite ABC PK-7200 PK-7100
    Universal Elite ABC PLUS PK-8200 PK-6100
    Universal Quick PK-8800
    R.T.U. Universal Quick PK-7800
    AP ABC-AP AK-5001 AK-5002 AK-5004 AK-5000
    Universal Elite ABC-AP AK-5200

    * VECTASTAIN Standard Kitには試薬Aと試薬Bのみが含まれ、ブロッキング用血清とビオチン標識抗体は含まれていません。使用目的に合ったものを別途ご用意下さい。詳細はお問い合わせ下さい。

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    別売品の種類

    商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

    酵 素 VECTASTAIN ABC キット 別売品
    ABC試薬 ビオチン標識二次抗体 正常血清
    品名 商品コード 商品コード 特異性 免疫動物 商品コード 商品コード
    HRP ABC Standard Kit PK-4000 PK-4000
    ABC Goat IgG Kit PK-4005 PK-4000 Goat IgG(H+L) Rabbit BA-5000 S-5000
    ABC Guinea Pig IgG Kit PK-4007 PK-4000 Guinea Pig IgG(H+L) Goat BA-7000 S-1000
    ABC Mouse IgG Kit PK-4002 PK-4000 Mouse IgG(H+L) Horse BA-2000 S-2000
    ABC Mouse IgM Kit PK-4010 PK-4000 Mouse IgM(μ) Goat BA-2020 S-1000
    ABC Rabbit IgG Kit PK-4001 PK-4000 Rabbit IgG(H+L) Goat BA-1000 S-1000
    ABC Rat IgG Kit PK-4004 PK-4000 Rat IgG(H+L) Rabbit BA-4000 S-5000
    ABC Sheep IgG Kit PK-4006 PK-4000 Sheep IgG(H+L) Rabbit BA-6000 S-5000
    Universal Quick Kit PK-8800 Mouse/Rabbit/Goat IgG(H+L) Horse BA-1300 S-2000
    R.T.U. Universal Quick Kit PK-7800 Horse S-2012
    Elite Standard Kit PK-6100 PK-6100
    Elite R.T.U. Standard Kit PK-7100 PK-7100
    Elite Goat IgG Kit PK-6105 PK-6100 Goat IgG(H+L) Rabbit BA-5000 S-5000
    Elite Human IgG Kit PK-6103 PK-6100 Human IgG(H+L) Goat BA-3000 S-1000
    Elite Mouse IgG Kit PK-6102 PK-6100 Mouse IgG(H+L) Horse BA-2000 S-2000
    Elite Rabbit IgG Kit PK-6101 PK-6100 Rabbit IgG(H+L) Goat BA-1000 S-1000
    Elite Rat IgG Kit PK-6104 PK-6100 Rat IgG(H+L) Rabbit BA-4000 S-5000
    Elite Sheep IgG Kit PK-6106 PK-6100 Sheep IgG(H+L) Rabbit BA-6000 S-5000
    Elite Universal Kit PK-6200 PK-6100 Mouse/Rabbit IgG(H+L) Horse BA-1400 S-2000
    Elite Universal PLUS PK-8200 Mouse/Rabbit IgG(H+L) Horse BP-1400 S-2012
    R.T.U. Elite Universal Kit PK-7200 Mouse/Rabbit IgG(H+L) Horse BP-1400 S-2012
    AP ABC Standard Kit AK-5000 AK-5000
    ABC Mouse IgG Kit AK-5002 AK-5000 Mouse IgG(H+L) Horse BA-2000 S-2000
    ABC Rabbit IgG Kit AK-5001 AK-5000 Rabbit IgG(H+L) Goat BA-1000 S-1000
    ABC Rat IgG Kit AK-5004 AK-5000 Rat IgG(H+L) Rabbit BA-4000 S-5000
    Universal Kit AK-5200 AK-5000 Mouse/Rabbit IgG(H+L) Horse BA-1400 S-2000


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    動画による操作方法の説明

    Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

    Detection with VECTASTAIN ELITE ABC Kit from Vector Laboratories




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    日本語マニュアル

    VECTASTAIN ABC Kitの日本語マニュアルはこちらから入手できますのでご利用下さい。

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    FAQ

    Q-1. 抗原の異なる2種類のマウス由来一次抗体を使用した二重染色を考えています。VECTASTAIN ABC Mouse IgG Kitは使用できますか?

    A-1. はい。2つの異なる酵素基質を用いて、それぞれの抗原検出(一次抗体から発色まで)を独立して行う(一つの検出が終わった後に、他方の検出を行う)ことが可能です。メーカーで推奨されている酵素の組み合わせやプロトコールはこちらのガイド『IHC Multiplexing Resource Guide』をご参照下さい。


    Q-2. VECTASTAIN ABC Kitはどのように選択したらよいでしょうか?

    A-2. 以下の手順でご選択下さい。
    ステップ1) 2種類の酵素(ペルオキシターゼあるいはアルカリフォスファターゼ)からどちらかを選択する。
    ステップ2) 検出感度を(標準あるいは高感度)から選択する。
    ステップ3) 使用する未標識一次抗体の免疫動物に対応するVECTASTAIN ABC Kitを選択する。
    例. ウサギ由来の一次抗体 ⇒ VECTASTAIN ABC Rabbit IgG Kit
    ステップ4) 切片の動物種を選択する(マウス由来抗体をマウス切片で使用する場合など、試薬の選択が変わります)。
    ビオチン標識抗体等を既にお持ちの場合、アビジン/ビオチン化酵素試薬のみを含むVECTASTAIN ABC Standard Kit(#PK-4000, PK-6100, PK-7100, PK-6100, AK-5000, AK-5000)がお勧めです。
    キット製品(VECTASTAIN Universal Elite PLUS ABC Kit(PK-8200)を除く)には基質が含まれておりません。別途ご用意いただく必要がございます。
    ご希望の免疫染色(IHC)キットを簡単に検索エンジンもございます。ぜひご利用下さい。


    Q-3. -20℃(冷凍)での保存は可能でしょうか?

    A-3. ABCキットを冷凍で保存することはお勧め致しません。-20℃(冷凍)で保管すると酵素活性や感度が低下します。


    Q-4. 従来のVECTASTAIN ABC Kit(#PK-4000シリーズ)とVECTASTAIN Elite ABC Kit(#PK-6000 シリーズ)の違いは何でしょうか?

    A-4. 主な違いは感度にあります。VECTASTAIN Elite ABC kitsは従来のVECTASTAIN ABC kitと比べ、感度が5倍程度高くなっております。感度が向上されることにより、高価な一次抗体を更に希釈することで使用量を節約し、発現量が少ない抗原を検出することができます。この感度の違いは、VECTASTAIN Elite ABC試薬に含まれる従来とはわずかに異なる化学的性質により実現しました。これにより、より多くのペルオキシダーゼ酵素が導入され、基質との反応が大きくなり、抗原の局在部位に発色します。従来のVECTASTAIN ABCとVECTASTAIN Elite ABC kitに同梱されている血清と二次抗体は同じであり、互換性があるため使用できます。ただし、試薬A(アビジン)と試薬B(ビオチン化酵素)はキットに固有であり、互換性はありません。


    Q-5. 作製したworking solutionsはどのくらい安定していますか?

    A-5. 最大限の酵素活性と性能を維持するため、working solutions(試薬Aと試薬Bの混合液)は調整後、長時間放置せず24時間以内に使用することを推奨しています。染色結果(強度含む)を比較する場合などは特にその活性と性能を維持することが重要です。動物種に特異的なキットに含まれる血清とビオチン標識二次抗体は、希釈(working solutionを調整)した後、冷蔵保存で最大1週間安定しています。尚、便利で長期間安定な調整済み製品として、Ready-To-Use (R.T.U.) タイプのVECTASTAIN ABC試薬もあります。


    Q-6. mouse IgG一次抗体を用いてIHCを行っております。ビオチン標識抗Mouse IgG二次抗体を含むVECTASTAIN Elite ABC Peroxidase Kit(#PK-6100)とDAB Substrate Kit(#SK-4100)を組み合わせて使用していますが検出できません。使用している検出試薬が適切に機能しているか確かめる方法を教えて下さい。

    A-6. プロトールに沿ってDAB基質を新しく調整します。新しく調整したDAB基質を少量(~1 ml)綺麗なガラス試験管に入れた後、VECTASTAIN Elite ABC Kit試薬Bを一滴(~50μl)添加します。HRP酵素の活性がある場合、DABが反応し、即座に色が変化します。これにより、最後の検出試薬が正常に機能しているかどうかを確認することができます。

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    お問い合わせ先

    (テクニカルサポート 試薬担当)

    reagent@funakoshi.co.jp

    製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
    表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。