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免疫染色のネガティブコントロールに最適な各種動物IgG Control IgG(Control Antibody)(Vector社)

掲載日情報:2021/04/16 現在Webページ番号:69688

Vector社のControl IgGは、免疫組織染色を始めとした抗体使用実験において、非特異的な結合の有無を確認するネガティブコントロールとして使用することができます。

Control sections for IHC and IF applications(Vector社ウェビナー)

免疫染色(免疫組織化学、IHC)特集

組織染色の結果の検証におけるネガティブコントロールについて

一般的なネガティブコントロールの1つは、一次抗体の省略(不使用)です。このコントロールは、二次抗体試薬が非特異的な染色の原因になっているか確認することができます。一方で、Fcレセプターや荷電分子などの様々な組織の要素が、一次抗体に非特異的に結合する場合があります。ネガティブコントロールとして一次抗体を省略する方法では、潜在的な偽陽性による染色を見逃す懸念があります。免疫組織染色(IHC)においては、一次抗体の省略以外に、以下のような方法がネガティブコントロールとして用いられます。

抗体作製に使用した免疫原をよる一次抗体の吸収

一次抗体のWorking solutionと最適化された濃度の免疫原を共に一定期間インキュベートします。吸収処理後の一次抗体を用いることにより、溶液中の標的抗原に対する一次抗体の特異性が示されます。この方法によるポジティブ染色は、一次抗体の特異性の欠如または一次抗体がFcレセプターや荷電分子によって結合していることを示している可能性があります。これを確かめるために、以下に示したアイソタイプコントロールと組み合わせて使用することができます。

アイソタイプコントロールの適用

アイソタイプコントロール(免疫していないマウスIgGなど)は、最も一般的に使用されるネガティブコントロールで、一次抗体と同じ動物種、タンパク質濃度で用いられます。このコントロールは、二次検出試薬からの非特異的結合に加え、Fcレセプターや荷電分子などが一次抗体と同種の免疫グロブリンに結合しているかどうか確認するために使用できます。多くの場合においては、アイソタイプ免疫グロブリンのサブクラス(マウスIgG2aやIgG2bなど)を使用する必要はありません。免疫する前の免疫動物の免疫グロブリンを用いることもできますが、メーカーが免疫前免疫グロブリンを市販しているのは非常に稀です。

一次抗体の無関係な抗体への置き換え

一次抗体を「無関係」な抗体への置き換えたものをネガティブコントロールとすることもできます。この場合の「無関係」は、使用する一次抗体と同じアイソタイプ(マウスIgGなど)であり、同濃度で使用され、組織切片の標的物質に結合しないことが知られている一次抗体を指します。例えば、平滑筋組織に対する抗サイトケラチン抗体などが挙げられます。

ノックアウト調製物の利用

組織切片から標的抗原を除去した「ノックアウト」調製物をネガティブコントロールとして用いる方法もあります。標的抗原を除去することで、染色性が欠如し、完全なアッセイを行うことができます。標的抗原を除去する方法の一つは、既知の酵素による消化です。例を挙げると、標的抗原がコラーゲンである場合のコラゲナーゼ、または標的抗原がヒアルロン酸である場合のヒアルロニダーゼの使用が挙げられます。もちろん、このアプローチには制約がありますが、この「欠失」または「ノックアウト」のアプローチによるバリエーションは、有効なネガティブコントロールになります。



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適用

  • 免疫組織染色(IHC)
  • 免疫細胞染色(IC)
  • 免疫蛍光染色(IF)
  • ウェスタンブロッティング(WB)

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製品の種類

写真をクリックすると拡大写真、使用文献(Mouse IgG使用文献)をクリックすると各製品の使用文献リスト、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 Control Antibody
Mouse IgG Goat IgG Rabbit IgG Rat IgG
使用文献 Mouse IgG使用文献 Goat IgG使用文献 Rabbit IgG使用文献 Rat IgG使用文献
包装 1 mg 5 mg 5 mg 1 mg
再構成 水0.5 mlを添加 水1 mlを添加 水1 mlを添加 水1 mlを添加
商品コード I-2000 I-5000 I-1000 I-4000

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価格

[在庫・価格 :2024年10月06日 00時00分現在]

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詳細 商品名
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納期 文献数
IgG, Mouse
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説明文
SKU:I-2000-1(商品コード末尾あり)
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IgG, Goat
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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SKU:I-5000-5(商品コード末尾あり)
法規制等 医薬用外毒物
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IgG, Rabbit
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SKU:I-1000-5(商品コード末尾あり)
法規制等 医薬用外毒物
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IgG, Rat
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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SKU:I-4000-1(商品コード末尾あり)
法規制等 医薬用外毒物
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IgG, Mouse

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IgG, Goat

文献数: 0

説明文 SKU:I-5000-5(商品コード末尾あり)
法規制等 医薬用外毒物
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IgG, Rabbit

文献数: 0

説明文 SKU:I-1000-5(商品コード末尾あり)
法規制等 医薬用外毒物
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IgG, Rat

文献数: 0

説明文 SKU:I-4000-1(商品コード末尾あり)
法規制等 医薬用外毒物
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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