in vivo専用のmRNAトランスフェクション試薬 in vivo-jetRNA®+
掲載日情報：2022/11/25 現在Webページ番号：65887
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- in vivoでのmRNA導入について
- カチオン性脂質を用いたRNA医薬の導入とその問題点について
- 特長
- 操作方法概略
- 使用例
- キット内容
- メーカーポスター
- in vivo-jetRNA®（旧製品）との違いについて
- 価格
in vivoでのmRNA導入について
個体へのmRNA導入は、核酸医薬において有望な手法として期待されています。mRNAの導入は、DNA導入に対する利点として❶高発現（核移行が不要）、❷ゲノムへのインテグレーションが無い、❸免疫への応答性が高いこと（mRNAが自己アジュバント活性を持つことと、十分な免疫反応に必要な抗原量が少なくて済むこと）が挙げられます。また、ウイルスを使用しないため、免疫療法や悪性細胞（malignant cells）を直接標的とする抗がん研究にも効果的な手法です。
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カチオン性脂質を用いたRNA医薬の導入とその問題点について
イオン性脂質ナノ粒子（LNP）はRNA医薬のin vivo導入に広く使用されており、主に肝臓を標的としています（Patisiran, BNTech162b, mRNA-1273など）。現在の課題は、市販の脂質を使用し全身投与されたRNAの生体内分布を適切にコントロールし、標的とする臓器や細胞に効果的に送達することです。LNPに使用される古典的なカチオン性脂質（DOTMAおよびDOTAP）は、毒性を誘発するトリメチルアンモニウム基が含まれています。そのほか、イオン化可能な脂質（DLin-MC3-DMA、SM-102、ALC-0315）も使用されていますが、生体内分布と安定性に制限があります。Polyplus社が開発したin vivo jetRNA®+はイミダゾリウムである極性頭部（Polar head）と正電荷を隠すR1官能基（R1 Functional Group）を有する独自のカオチン性構造の存在により、毒性が低減されています。
＊Basmah N.A., et al., Pharmaceutics, 13(2):206(2021). [PMID：33540942]
※ LNPの調製に使用できる新世代のカオチン性脂質LipidBrick IM21.7cについてはこちらをご参照下さい。
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特長
- 適応性 ：静脈、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、皮下など様々なインジェクション方法、標的器官で使用できます。本製品でカプセル化したmRNAを腹腔内投与すると、脾臓やリンパ節のほか、肝臓や肺、膵臓、子宮などにも輸送されます。
- 安全性 ：毒性が低く、動物の個体および器官の健康を維持します。
- 時間短縮：インジェクション溶液は2段階で調製することができ、15分で動物に注射する準備が整います。
- アプリケーション例：免疫応答誘発、抗腫瘍研究、CRISPR / Cas9システムを使用したin vivoでのゲノム編集、タンパク製剤の補給
- マウスへの使用回数の目安（in vivo-jetRNA®+ 1 mlあたり）：静脈内注射50回、筋肉内注射100回
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操作方法概略
キット付属のmRNA bufferで調製したmRNA（μg）と本試薬（μl）を1:2で混合し、インジェクションするだけのシンプルなプロトコルです。特殊な装置は必要なく、インジェクション用試薬の調製は15分で完了します。
マウスへインジェクションする際の推奨条件
| インジェクション部位 | 出発条件 | 最適化範囲 | インジェクション量 | |
|---|---|---|---|---|
| mRNA | in vivo-jetRNA®+ | |||
| 尾静脈／眼窩後 | 10 μg mRNA 20 μl in vivo-jetRNA®+ |
10～20 μg | 20～40 μl | 200 μl |
| 腹腔内 | 20 μg mRNA 40 μl in vivo-jetRNA®+ |
10～20 μg | 20～40 μl | 500 μl |
| 皮下 | 5 μg mRNA 10 μl in vivo-jetRNA®+ |
5～10 μg | 10～20 μl | 100 μl |
| 皮内 | 2 μg mRNA 4 μl in vivo-jetRNA®+ |
2～5 μg | 4～10 μl | 50 μl |
| 筋肉内 | 5 μg mRNA 10 μl in vivo-jetRNA®+ |
5～10 μg | 10～20 μl | 100 μl |
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使用例
本製品またはDLin-MC3-DMA（LNPを形成）によるmRNAカプセル化の比較
A：mRNAのみ（lane 1）または本製品でカプセル化したmRNA（lane 2）のアガロースゲル電気泳動結果。本製品によりmRNAが完全にカプセル化されていることが分かる。
B：本製品（リポソームを形成）またはDLin-MC3-DMA（pH応答性カチオン性脂質、LNPを形成）を用いて、ルシフェラーゼをコードするmRNAをマウスへ静脈注射した。本製品では10 μgのmRNAを用い、mRNA buffer中でmRNA／本製品の比率が1：2（μg mRNA：μl試薬）となるようにリポソームを形成させた。注射から24時間後にルシフェラーゼの発現を確認したところ、本製品を使用した条件は、ワクチン用のゴールドスタンダードとして使用されているLNPに匹敵する効率で遺伝子発現が観察された。
本製品を用いて形成したmRNAカプセル化リポソームの安定性
A：本製品で形成させたmRNAカプセル化リポソーム（50 μg/ml）を、室温または4℃でグラフ中に記載の期間保存後、動的光散乱法（DLS）でリポソームのサイズを測定した。いずれの条件でも、リポソームのサイズは1か月後も安定していることが分かる。
B：本製品と小さいmRNA（1929 base；50、100、200、300 μg）を用いてリポソームを形成させ、グラフ中に記載の時間が経過した後にDLSでリポソームのサイズを測定した。mRNA濃度はリポソームのサイズに影響を及ぼすが、低濃度／高濃度のいずれにおいてもリポソームのサイズが安定していることが分かる。
投入経路による各器官におけるmRNAの分布
ルシフェラーゼをコードするmRNA（μg）と本製品（μl）が1：2の比率となるよう混合し、腹腔内（A：20 μg mRNA）または筋肉内（B：5 μg mRNA）へインジェクションした。24時間後に、ルシフェラーゼの発現を測定した。腹腔内投与した場合、免疫応答に関わる脾臓やリンパ節を含め、肺や肝臓、脾臓、子宮など様々な臓器で発現が見られた。
本製品による実験動物への安全性の評価（炎症性サイトカイン量の測定）
ルシフェラーゼをコードするmRNAと本製品を混合してmRNAカプセル化リポソームを形成し、マウスに静脈注射 (眼窩後注射) した。2～24時間後に血液を採取し、IL-6、IL-12、GM-CSF、IFN-γ、TNF-α量をELISA（IL-6）またはMACSPlexキットを用いて測定した。その際にポジティブコントロールとして、LPSを使用した。
本製品を導入した場合、炎症性サイトカインの発現が誘導されていないことが分かる。
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キット内容
- in vivo-jetRNA®+ transfection reagent（1 ml）
- mRNA buffer（60 ml）
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メーカーポスター
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in vivo-jetRNA®（旧製品）との違いについて
in vivo-jetRNA®+（本製品）は旧製品と同じ陽イオン性脂質を含むリポソームベースの試薬になりますが、試薬の組成を改良することで安定性を高めています。本製品は旧製品を用いた場合と比較して、マウスの各臓器に対し同等以上のmRNA導入効率を示すことが確認されています。
マウスの各臓器に対する本製品および旧製品のmRNA導入効率の比較
本製品および旧製品を用いて、ルシフェラーゼをコードするmRNAを腹腔内注射により導入し、導入効率を比較した。mRNA（ug）と本製品（ul）が1：1（旧製品）または1：2（本製品）になるように混合した。
※1 ugのmRNAあたりの推奨使用量が旧製品よりも増えています。in vivo-jetRNA®+のプロトコルをご参照のうえ、実験条件のご検討をお願いいたします。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月18日 20時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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in vivo-jetRNA+ |
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[在庫・価格 ：2024年04月18日 20時55分現在]
in vivo-jetRNA+
文献数： 0
- 商品コード：101000122
- メーカー：PPU
- 包装：1kit
- 価格：¥301,000
- 在庫：1個
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
mRNAの導入に特化したin vivo導入専用のトランスフェクション試薬。毒性が低く，様々なインジェクション方法，標的器官に対応する。シンプルかつ簡単なプロトコルで，15分で試薬が調製できる。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年6月15日号 p.8
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| 製品記事 | |||
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トランスフェクション試薬選択ガイド mRNAワクチン研究・開発関連製品 トランスフェクション手法の紹介・比較 |
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