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細胞遊走能を再現性高く測定できるキット Oris Cell Migration Assay Kit

掲載日情報:2021/01/25 現在Webページ番号:3493

遊走能を持つ細胞を計数できるキットです。創傷治癒アッセイ(wound healing assay)など従来の細胞遊走能の測定法は再現性が低く,また測定法により結果に大きな違いが生じることがありました。本製品は,各ウェルの中央部にシリコーン樹脂製のstopperがセットされた96ウェルプレートを用いて,細胞遊走能を高い再現性(CV:9~12%)で,定量的にハイスループット測定できます。

NMuMG細胞の遊走能アッセイ

本キット(TriCoatedタイプ)を用いたマウス乳腺上皮細胞(NMuMG細胞)の遊走能アッセイ

NMuMG細胞をTriCoatedプレートの3種類のウェルに播種し,一晩培養した。Stopperを取り外した後,ROCK阻害剤を添加してさらに24時間培養した。細胞を固定した後,TRITC-ファロイジンを用いて線維状のアクチンを染色した。マイクロプレートリーダーを用いてAnalytic zoneに存在する細胞のTRITC蛍光強度を測定し,移動度を示す指標とした(左図:棒グラフ)。蛍光顕微鏡での観察結果(右図)を反映した測定結果が得られていることがわかる。
Data courtesy of Drs. Scott Gehler and Patricia Keely, University of Wisconsin-Madison.

Oris AssayとScratch Assayの比較

細胞遊走は,各種疾患,生理・発生学的プロセスと関連している。

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特長

  • 遊走時における細胞形態のリアルタイム観察にも使用できます。
  • 特別な測定用装置を必要とせず,通常の倒立顕微鏡や蛍光マイクロプレートリーダーで測定できます。
  • 細胞の標識に呈色プローブ,蛍光色素,量子ドットが使用できます。また複数プローブの同時使用も可能です。
  • カイネティックアッセイおよび,エンドポイントアッセイのいずれの方法でも測定できます。
  • プレートのウェル底面が,未修飾(Tissue Culture Treated)の製品,コラーゲンⅠコート済みの製品,フィブロネクチンコート済みの製品,TriCoatedタイプの製品があります。
  • TriCoatedタイプの製品は,1枚のプレートに3種類(未修飾/コラーゲン/フィブロネクチン)のコーティングが施されており,細胞外マトリクスに依存した細胞遊走能の比較ができます。
  • ImageJによる解析が可能です。

検出には蛍光色素の使用を推奨します。発色色素の場合はプレート底面の傷などにより検出しにくくなる可能性があります。

プレートリーダーによる検出の場合,細胞標識用の蛍光色素が別途必要です。

TriCoatedタイプ
stopperの外観


stopperの外観



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製品の種類

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

シリーズ名 アッセイ数 中央検出
領域
プレート
表面処理
適用可能機器 包装 商品コード
顕微鏡 HCS/HCI マイクロプレート
リーダー
Oris
Oris
96 Stopper 未処理 1 pack CMA1-101
5 packs CMA5-101
コラーゲンⅠ 1 pack CMACC1-101
5 packs CMACC5-101
フィブロネクチン 1 pack CMAFN1.101
5 packs CMAFN5.101
TriCoated* 1 pack CMATR1.101
5 packs CMATR5.101
プレートと分離した
stopper
未処理 1 pack CMAU101
5 packs CMAU505
4 packs CMAUFL4

Oris Pro Cell Migration Assay Kitについては,フナコシホームページをご覧下さい。



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測定例

Oris CMA と Scratch assayの比較

Oris™ CMA と Scratch assayの比較

それぞれ,4つの実験系を併行して実行した。平均閉鎖率±SD(n_12)としてデータを示した。

  • A:Oris CMAにおける細胞遊走前の顕微鏡写真
  • B:Oris CMAにおける細胞遊走20時間後の顕微鏡写真
  • C:スターチアッセイにおける細胞前の顕微鏡写真
  • D:スターチアッセイにおける遊走20時間後の顕微鏡写真。スケールバー:500μm
  • E:Oris CMAとスクラッチアッセイを使用した細胞遊走比較図

ImageJを用いたDetection Zone中の細胞数の解析

Oris Cell SeedingStopperを取り外してから16時間後の細胞遊走を観察した。

ImageJを用いたDetection Zone中の細胞数の解析

  • A:細胞遊走コントロールの位相差顕微鏡像
  • B:組織培養処理したMDA-MB-231細胞の遊走
  • C:コラーゲン I
  • D:フィブロネクチン
  • E~H:粒子分析の領域を定義する2 mmの円形ROI(赤い円)を持つDAPI標識細胞の蛍光画像。
  • I~L:ROI内の試料の粒子分析図
  • M~P:DAPIと粒子分析図のマージ。スケールバー:500μm

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ImageJを用いた細胞数の定量

各条件の8ウェルからの平均細胞数±SDのデータを示した。p<0.001;全表面上におけるコントロールと16時間の移行の統計的差異はp<0.001であり,表面間の細胞移動(2標本,t検定)の統計的差異はp<0.005であった。それぞれ,3つの表面(組織培養処理,コラーゲンI,またはフィブロネクチン)上での細胞移動を示した。

ImageJを用いた細胞数の定量

  • A:MDA-MB-231
  • B:HT-1080

Oris AssayとScratch Assayの比較

Oris AssayとScratch Assayの比較

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操作方法概略

操作方法概略A

BCG*:Bio-Compartible Gel(生物適合性ゲル)

  1. Stopperをセットしてあるプレートの各ウェルに細胞をアプライし,インキュベートする。
  2. インキュベートしてウェルのOris cell seeding stopperで塞がれていない外縁部に細胞を定着させる。
  3. ウェルからOris cell seeding stopperを取り出し,中心部にあるDetection zoneを露出させる。
  4. プレートをインキュベートする。細胞遊走が起こると,ウェル中央のDetection zoneにも細胞が存在するようになる。
  5. Detection zone内にある細胞の測定を行う。

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使用実績のある細胞

未修飾プレート コラーゲンコートプレート フィブロネクチンコートプレート
  • HT-1080
  • PC-3
  • A549
  • NCl H1650
  • MDA-MB-231
  • NMuMG
  • 3T3-Swiss albino
  • HCEC
  • HUVEC
  • MCF10A
  • HT-1080
  • T47D
  • MCF10A
  • HeLa
  • HUVEC
  • MDA-MB-231
  • HT-1080
  • PC-3
  • A549
  • NCI H1650
  • NCI H1650
  • MDA-MB-231
  • NMuMG

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キット内容

  • 96 well plate with Oris cell seeding stopper
  • Oris detection mask
  • Oris stopper tool

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アプリケーションノート

Platypus社では,上記のほかにも多数の適用例の情報を提供しています。下のバナーをクリックしたリンク先のウェブサイトで,アプリケーションノートを閲覧およびダウンロードいただけます。

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使用動画

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FAQ

下のバナーをクリックするとFAQがご覧いただけます。。

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使用文献

  • Y. Lee, et al, "Downregulation of PRMT1 promotes the senescence and migration of non-MYCN amplified neuroblastoma SK-N-SH cells", Sci. Rep., 9, 177 (2019). citation-pdf
  • A. Kanda, et al., "TGF-β-SNAIL axis induces Muller glial-mesenchymal transition in the pathogenesis of idiopathic epiretinal membrane", Sci. Rep., 9, 673 (2019). citation-pdf
  • M. Gnanamony, et al., "Chronic radiation exposure of neuroblastoma cells reduces nMYC copy number", Oncology Lett., 14(3), (2017). citation-pdf
  • H. Marei, et al., "Differential Rac1 signalling by guanine nucleotide exchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration", Nature Comm., 7, 10664 (2016). citation-pdf
  • S. Ravi, et al., "Incorporation of fibronectin to enhance cytocompatibility in multilayer elastin-like protein scaffolds for tissue engineering" , J. Biomed/ Mater. Res. A., 101(7), (2013). citation-pdf
  • W. Gough, et al., "A Quantitative, Facile, and High-Throughput Image-Based Cell Migration Method Is a Robust Alternative to Scratch Assay", J. Biomol. Screen., 16(2), pp.155~163, (2011). citation-pdf

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価格

[在庫・価格 :2021年05月15日 00時13分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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納期 文献数
Cell Migration Assay Kit, Oris (1pack)
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説明文
検出には蛍光色素をご使用下さい。
別包装品 別包装品あり
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掲載カタログ ニュース2020年10月1日号 p.11
ニュース2019年11月1日号 p.14

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2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 7
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検出には蛍光色素をご使用下さい。キット内容:Oris compatible 96 well plate, Oris cell seeding stopper, Oris detection mask, Oris stopper tool
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(テクニカルサポート 試薬担当)

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