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厳密な発現誘導ができるレンチウイルスベクター SparQ Cumate Switch Inducible System

掲載日情報:2018/05/29 現在Webページ番号:4984

レンチウイルスベクターを用いて、目的遺伝子またはmiRNAを厳密かつ可逆的に発現誘導できるシステムです。目的遺伝子発現用ベクターと、CymRリプレッサー発現用ベクターを細胞に導入し、発現誘導物質Cumateの添加により誘導を行います。

※ご注意
目的遺伝子を誘導発現させるCumate switch promoterを持つベクターは、レンチウイルス粒子によって目的細胞に導入してください。トランスフェクションによってプラスミドのまま導入させますと、上流のRSV promoterによって恒常的に発現してしまうことがございます。


特長

  • 強力なCMV5プロモーターをCumateオペレーター配列により発現調節しています。
  • 非誘導時のバックグラウンド発現が極めて低く抑えられています。
  • 発現誘導物質Cumateは、細胞毒性を有さない低分子化合物です。
  • Cumateの添加量により、誘導レベルを容易に調節できます。
  • 特殊な培地や培養条件は必要ありません。
  • 発現誘導のONとOFFを可逆的に繰り返すことができます(図参照)。
  • GFPやRFPまたはGFP-PuroやRFP-Puroをマーカー遺伝子として、目的遺伝子と同時に発現誘導できます(マーカー遺伝子を恒常発現させるベクターもあります)。

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原理

本システムでは、Cumateオペレーター配列(CuO)に強く結合しているCymRリプレッサーを介して発現のON/OFFが行われます。CymRリプレッサーにより遺伝子の発現が抑制されている状態(図:Cumate Switch OFF)にCumateを加えると、CumateがCymRリプレッサーに結合しCymRリプレッサーがCuOから解離するため、遺伝子発現が起こります(図:Cumate Switch ON)。


Cumate System原理

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Cumateによる可逆的な発現誘導

Cumate System発現誘導例

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SparQ Cumate Inducible Lentivector

cDNAおよびmiRNA用の発現ベクターです。シングルまたはデュアルプロモーターの製品があります。
マーカー遺伝子は、シングルプロモーターの製品ではIRESまたはT2AによりCumate依存的に、デュアルプロモーターの製品ではEF1プロモーターによりCumateの有無に関係なく恒常発現します。マーカー遺伝子はGFPおよびRFPから選択できます。
T2Aを用いた製品(#QM521A-1、#QM522A-1)は、miRNAの発現には適していません。IRESまたはデュアルプロモーターを用いた製品をご使用下さい。


ベクター選択表

プロモーター 目的遺伝子の発現
マーカー
の発現
発現物 マーカー 商品コード
cDNA miRNA
シングル IRES Cumate Switch Promoter (IRES) GFP #QM530A-2
RFP #QM531A-2
T2A (T2A) × GFP #QM521A-1
RFP #QM522A-1
デュアル EF1 GFP #QM511B-1
RFP #QM512B-1
GFP-Puro #QM513B-1
RFP-Puro #QM516B-2

Cumateベクターマップ

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CymR Repressor Lentivector

CymR Repressor発現用レンチベクターです。CymRリプレッサー発現細胞の樹立に用います。
T2Aによりピューロマイシン耐性遺伝子またはRFPをマーカー遺伝子として発現します。


CymR Repressor Lentivector

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ウイルス粒子にパッケージング済みの製品(#QM350VA-1, #QM200VA-2、#QM300VA-1)の力価は1×106 cfu/mlです。


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Cumate Solution

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Cumate Solution, 1000×

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Cumate Starter Pack

SparQ Cumate Inducible Lentivector(1種類を選択)とCymR Repressor Lentivector(#QM-200VA-2)およびCumate Solutionをセットにしたスターターパックです。

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Cumate Starter Pack
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。 構成品:SparQ Cumate Inducible Lentivector(1種類を選択),CymR Repressor Lentivector(#QM-200VA-2),Cumate Solution。Iducible Lentivectorは,選択可能なベクターから,1種類を注文時にご指定下さい。選択可能なベクター:#QM500A-1,#QM511B-1,#QM512B-1,#QM513B-1,#QM516B-2,#QM521A-1,#QM522A-1,QM530A-2,#QM531A-2。
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All-in-one Cumate Switch Inducible Lentivector

All-in-one Cumate Switch Inducible Lentivector

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