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双方向プロモーターのレンチウイルスベクター Bidirectional Promoter Lentivector

掲載日情報:2014/09/10 現在Webページ番号:46088

プロモーター干渉を回避し発現量の低下が抑えられます

レンチウイルスベースのcDNA発現ベクターです。
目的遺伝子とマーカー遺伝子といった2種類の遺伝子を、IRESによってバイシストロニックに発現させると、IRESの下流遺伝子の発現量が低下する場合があります。
また、T2Aペプチドのような翻訳後に自己消化されるアミノ酸配列を発現させると、タンパク質の機能や安定性に影響を与える可能性があります。
加えて、複数の遺伝子を異なるプロモーターで発現する際に、同一方向にプロモーターを配置すると干渉が起きる恐れがあります。

そこでBidirectional Promoter Lentivectorでは、これらの問題を回避するためにIRESやT2Aを使用せず、2種類のプロモーター(EF1とPGK)を双方向に配したコンストラクトにより、目的遺伝子とマーカー遺伝子の共発現を行います。




特長

  • 単方向性プロモーターを有するレンチウイルスベクターで、しばしば問題となるプロモーター干渉を回避することができます。
  • EF1およびPGKプロモーターを採用し、ES細胞、栄養膜幹細胞株(TS細胞)、胚体外内胚葉性(XEN)幹細胞においても使用可能です。
  • レンチウイルスへのパッケージングにより、分裂細胞、非分裂細胞のいずれにも高い効率で導入できます。また、初代培養細胞、幹細胞、神経細胞といったトランスフェクションが困難な細胞にも、遺伝子導入が可能です。
  • シングルプロモーター/デュアルプロモーターのcDNA発現レンチウイルスベクターはこちらをご覧下さい。

本ベクターを使用して組換え体ウイルスを作製する際は、pPACK Lentivector Packaging Kit(#LV500A-1(HIV用))を併せてご使用下さい。

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プラスミドマップ

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製品ラインナップ

cDNA vector Catalog # target gene promoter expression level application
pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) CD810A-1 EF1 Medium / High
(with PGK)
robust in most cell types, including primary, differentiated, stem cells
pCDH-EF1-MCS-(PGK-copGFP) CD811A-1
pCDH-EF1-MCS-(PGK-copGFP-T2A-Puro) CD813A-1
pCDH-EF1-MCS-T2A-RFP-(PGK-Puro) CD822A-1
pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP-(PGK-Puro) CD823A-1

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使用例

Bidirectional Promoter Lentivectorを用いて形質導入を行ったHT1080細胞内の各マーカー遺伝子の発現

Bidirectional Promoter Lentivector(#CD813A-1)を用いて形質導入を行ったHT1080細胞内のmiRNA-150の発現
左図:GFPマーカー発現の確認
右図:miR-150の発現レベルの比較(U6を内部標準として使用)



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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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