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ヒトアデノ随伴ウイルス（AAV）の粒子濃度を定量するキット AAV Titration ELISA Kitシリーズ

掲載日情報：2021/03/02 現在Webページ番号：3349

プロジェン バイオテクニック /
PROGEN Biotechnik GmbH
[メーカー略称：POG]

ヒトAAV（アデノ随伴ウイルス：Adeno Associated Virus）調製物中のウイルス力価（titer）を、サンドイッチ法により比色定量するELISAキットです。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


AAV力価定量キット

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標的AAVの種類 商品コード 品名 コントロール
（標準） 		コントロールの
商品コード
AAV1 PRAAV1 AAV1 Titration ELISA Kit AAV1 PRAAV1-C
AAV2 PRATV AAV2 Titration ELISA Kit AAV2 PRAAV2-C
PRAAV2R AAV2 Titration ELISA 2.0R Kit*1
AAV3 PRAAV3R AAV3 Titration ELISA 2.0R Kit*1 AAV3 PRAAV3-C
AAV5 PRAAV5 AAV5 Titration ELISA Kit AAV5 PRAAV5-C
AAV6 PRAAV6 AAV6 Titration ELISA Kit AAV6 PRAAV6-C
AAV8 PRAAV8 AAV8 Titration ELISA Kit AAV8 PRAAV8-C
AAV9 PRAAV9 AAV9 Titration ELISA Kit AAV9 PRAAV9-C
AAVrh10 PRAAV10 AAVrh10 Titration ELISA Kit AAVrh10 -

＊1 捕捉抗体および検出抗体に組換え抗体を使用しています。
※Controlは単品でもご購入可能です。

キット内容物とプロトコルを改良することにより、結果が得られるまでの時間が短縮（2時間以内）された改良版が発売されました。
☞ AAV Xpress ELISA Kitシリーズについてはこちらをご覧下さい。

AAVのセロタイプによる標的器官の違い

AAVセロタイプの感染標的細胞と標的組織

☞ PROGEN Biotechnik 社 Adeno-Associated Virus (AAV)関連サイトはこちら


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特長

  • 定量的PCRとは異なり、立体構造エピトープを認識する抗体を使用しているため、インタクトなウイルス粒子および空カプシド*2のみを検出できます。
  • 野生型AAV粒子、組換え体AAV粒子、および空カプシド*2の力価を測定できます。
  • ストレプトアビジン－ビオチンシステムにより、迅速かつ高感度で、再現性の高い結果が得られます。
  • コントロールとしてAAV の空カプシド*2が含まれています。
  • 測定試料：細胞培養上清、精製ウイルス
  • 測定方法：比色
  • 測定波長：450 nm（補正波長： 650 nm）
  • 測定回数：12 × 8 tests (96 tests)

＊2 核酸を含むウイルス粒子と同様の立体構造をとるカプシド

※測定にはプレートリーダーとインキュベーター（37℃）が必要です。


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測定原理

ヒトAAVの粒子濃度を定量するキット

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操作方法概略

ヒトAAV粒子濃度定量方法概略
  • KC0：Blank（ASSB：Assay buffer）
  • KC：Control
  • Biotin：Anti-AAV biotin conjugate
  • Strep-HRP：Streptavidin peroxidase conjugate
  • TMB：TMB substrate
  • STOP：Stop solution

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検量線イメージ

AAVキット検量線イメージ


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キット内容

  • Microtiter plate, coated with mouse monoclonal to AAV antibody(12×8 well), ready-to-use*2
  • Control (empty AAV capsids)*2
  • Assay buffer
  • Anti-AAV biotin conjugate*2
  • Streptavidin peroxidase conjugate
  • TMB substrate, ready-to-use
  • Stop solution, ready-to-use
  • Adhesion foil

*2 キットにより内容が異なります。
※ Controlは単品でお買い求めいただくこともできます。

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PROGEN Biotechnik社のAAV製品の独占的権利について

(クリックで開閉します)

2019年9月、高品質の研究用抗体メーカーとして確立されたPROGEN Biotechnik社は、ドイツがん研究センター（DKFZ）よりアデノ随伴ウイルス（AAV）抗体およびELISAシステムの独占契約を締結しました。このライセンスにはDKFZの科学者によって開発された数種類の抗体とELISAキットが含まれています。今後はPROGEN Biotechnik社が、AAV ELISAテクノロジーおよびAAV抗体を世界中で独占的に使用できるようになりました。
改変されたAAVゲノムは、新しい遺伝子治療法の研究開発においてますます重要な役割を果たしています。PROGEN Biotechnik社は、AAV遺伝子治療の進歩を推進するさらに先進的な製品を提供する予定です。

※ プレスリリースはこちらからご覧いただけます。



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AAV Titration ELISAに関するFAQ

Q-1. qPCRやddPCRと比較してPROGEN社 AAV Titration ELISA Kitにはどのような特徴がありますか？

A-1. qPCRやddPCRはウイルスDNAを検出し、AAV DNAの力価のみを測定します。これらの手法は、遺伝子治療におけるAAVの使用に不可欠なパラメータである総AAVカプシドの力価を示すものではありません。また、qPCRやddPCRはAAVの力価測定によく用いられる高感度な手法ですが、ばらつきがみられます。qPCRやddPCRとは対照的に、PROGEN社 AAV Titration ELISA Kitは遺伝子が導入されたカプシドと空のカプシドを含む総AAVカプシドの力価を測定しますが、AAV DNA力価の測定にはご利用できません。また、バラツキの大きなqPCR/ddPCRと比較して、本製品はアッセイ間およびアッセイ内でのばらつきが小さく、信頼性の高い一貫したデータを提供します。AAVの力価（AAV DNA力価およびAAV全カプシド力価を含む）の測定には異なる手法の使用を推奨します。

Q-2. なぜ遺伝子治療のために総AAVカプシドの力価の測定が重要なのでしょうか？

A-2. 大半のAAV調整物は多くの空のカプシドを含んでいます。そのため、AAVベクターの遺伝子治療への応用には総カプシドの力価の測定が不可欠です。免疫原性反応を最小限に抑え、標的細胞への遺伝子導入効率を最大にするためには、精製されたAAV粒子調製物の正確な特性評価と定量が臨床応用への重要なステップとなります。したがって、信頼性が高く、再現性のあるAAV力価の定量は、安全かつ効果的なAAV遺伝子治療に不可欠です。

Q-3. AAVの定量化にPROGEN社AAV Titration ELISA Kitを選ぶ理由を教えて下さい。

A-3. PROGEN社AAV Titration ELISA Kitは、遺伝子治療の研究開発において信頼性の高い総AAVカプシド力価の測定ツールであり、アッセイ間およびアッセイ内でのばらつきも少ないことが実証されています。AAV Titration ELISA Kitは他の定量法と比較して、ばらつきが小さく、またその使いやすさからrAAV調製物の定量に最適なフォーマットであると考えられています。

Q-4. PROGEN社AAV Titration ELISA Kitの測定原理を教えて下さい。

A-4. PROGEN社AAV ELISA Kitはサンドイッチ法のELISAキットです。マイクロタイタープレートにはAAVカプシド集合上の立体構造的なエピトープに特異的なモノクローナル抗体がコートされており、AAV粒子（遺伝子が導入されたAAVカプシドと空カプシド）を捕捉します。AAV粒子の検出は、2段階のプロセスで行われます。まず、ビオチン標識モノクローナルAAV抗体が捕捉したAAV粒子に結合します。その後、HRP標識ストレプトアビジンとビオチン分子を反応させます。基質の添加後、450 nmの吸光度を測定し、キットコントロールで生成された標準曲線に基づいて、試料中のAAVの力価を算出することができます。詳細情報と簡単なプロトコールについては、AAV ELISA Kitをご覧下さい。

Q-5. キットコントロールはどのようなものですか？

A-5. 各AAV Titration ELISA Kitに付属のキットコントロールは、完全に特徴付けされた空の粒子で構成されており、ELISAの標準曲線の作成に使用します。この標準曲線に基づいて、未知のAAV試料中の総カプシドの力価を決定します。

Q-6. PROGEN社AAV Titration ELISAで定量できるAAVセロタイプを教えて下さい。

A-6. PROGEN社では、AAVセロタイプ1,2,3,5,6,8,9およびrh10の定量を目的としたAAV Titration ELISA Kitと、AAVセロタイプ2,8,9をより迅速に定量可能なAAV Xpress ELISA Kitをご用意しております。

Q-7. PROGEN社AAV Titration ELISAは別のセロタイプも検出しますか？

A-7. いくつかのキットは別のセロタイプも検出します。例えばAAV2 ELISA KitはAAV3も検出します。しかし、AAV2 ELISA KitはAAV3の定量には不向きです。AAV Titration ELISA Kitは各セロタイプに特化したキャリブレーションを行っています。信頼性の高いAAVカプシド力価を定量するためには、各セロタイプに対応するELISAキットをご使用いただくことをお勧めいたします。AAV Titration ELISA Kitに使用されている抗体の交差性については下記の表、および参考文献をご覧下さい。

■AAV Titration ELISA Kitに使用されているモノクローナル抗体の交差性

抗体のクローン名をクリックすると、抗体単品製品の価格表をご覧になれます。

抗体の
クローン名		 AAV1 AAV2 AAV3 AAV4 AAV5 AAV6 AAV7 AAV8 AAV9 AAVrh10 AAV11 AAV12
ADK1a ＋＋＋
A20 ＋＋
A20R ＋＋
ADK4 ＋
ADK5a ＋
ADK6 ＋
ADK8 ＋＋＋＋＋
ADK9 ＋

■参考文献

  1. Mietzsch, M., et al., Hum. Gene Ther., 25 (3), 212～222 (2014). [PMID:24299301]
  2. Wobus, C. E., et al., J. Virol., 74 (19), 9281～9293 (2000). [PMID:10982375]
  3. Kuck, D., et al., J. Virol. Methods, 140 (1-2), 17～24 (2007). [PMID:17126418]



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Developing reliable AAV standards for ELISA
Developing reliable AAV standards for ELISA
POG_New AAV3 Titration ELISA
The New AAV3 Titration ELISA - continued tradition of reliable AAV titer determination
Evolution of AAV2 Titration ELISA
(r)Evolution of AAV2 Titration ELISA - from monoclonal to recombinant
Cryo and negative staining EM
Cryo and negative staining EM - a comparison study with AAV capsids


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メーカー動画：PROGENのAAV ELISAキット



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Adeno associated virus-1をサンドイッチELISAにより比色定量するキット。測定波長：450 nm。
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掲載カタログ ニュース2023年6月15日号 p.12
ニュース2021年10月15日号 p.20

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AAV2 Titration ELISA Kit (96 tests)
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Adeno associated virus-2をサンドイッチELISAにより比色定量するキット。測定波長：450 nm
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AAV2 Titration ELISA 2.0R (96 tests)
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AAV-5 Titration ELISA Kit (96tests)
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Adeno associated virus-5をサンドイッチELISAにより比色定量するキット。測定波長：450 nm。
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AAV-6 Titration ELISA Kit (96tests)
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Adeno associated virus-8をサンドイッチELISAにより比色定量するキット。測定波長：450 nm。
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AAV-9 Titration ELISA Kit (96tests)
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AAVrh10 Titration ELISA Kit (96 tests)
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AAV-1 Titration ELISA Kit (96tests)

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説明文 Adeno associated virus-1をサンドイッチELISAにより比色定量するキット。測定波長：450 nm。
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AAV2 Titration ELISA Kit (96 tests)

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AAV-5 Titration ELISA Kit (96tests)

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AAV-8 Titration ELISA Kit (96tests)

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Vol. 64 アデノ随伴ウイルス（AAV）製品のパイオニア

PROGEN 社はアデノ随伴ウイルス（AAV）関連製品を世界的に独占して開発・製造、販売するライセンスを保有しています。今回は、AAV 製品のパイオニアであるPROGEN 社にお話を伺いました。

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（テクニカルサポート 試薬担当）

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ELISA