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アデノ随伴ウイルス(AAV)の力価を最短20分で検出できるラテラルフローテスト Dip'n'Check AAV Kit(Progen社)

掲載日情報:2022/05/12 現在Webページ番号:67454

Dip'n'Check AAV Kitは,AAVカプシド(キャプシド)をセロタイプに特異的な抗体を用いて半定量的に検出するサンドイッチ法のラテラルフローアッセイです。AAVの各セロタイプ(AAV1とAAV6,AAV2とAAV3,AAV8,AAV9)を迅速かつ確実に検出できます。下流工程や精製工程における工程中での確認に有用です。

AAVの力価を最短20分で検出

ラテラルフローテスト検出イメージ

キット箱イメージ

Dip'n'Check AAVラテラルフローテスト外観イメージ


アデノ随伴ウイルス(AAV)について

アデノ随伴ウイルス(AAV)は,非病原性のssDNAウイルスで,遺伝子治療用のウイルスベクターとして盛んに研究されています。このウイルスは,分裂している細胞から非分裂の細胞まで様々な細胞に感染し,長期間の遺伝子発現と低い細胞性免疫反応を示します。現在,AAV試料の特性評価には,ELISA,qPCR,ddPCR,DNAドットブロット,セルベースアッセイ,SDS-PAGEおよび電子顕微鏡などの方法がありますが,本製品はラテラルフローアッセイにより,迅速・簡便に検出を行えます。



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特長

  • 操作開始から終了まで約20分で,AAVカプシドの力価(タイター)を迅速に推定・比較することができます。
  • 1.0×108~1.0×1010 capsidsの検出範囲を持つ半定量的なアッセイです。この範囲では,2倍の濃度差を明確に検出することができます。
  • 導入した配列を欠く空のカプシド(Empty Capsids)と完全なカプシド(Full Capsids)に対する抗体の親和性に差はありません。
  • 測定試料:粗ライセートまたは精製されたAAV
  • AAV粒子抗体とAAVカプシドの変異体との結合親和性を解析できます。

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測定原理

ラテラルフローテストイメージ

Dip'n'Check AAVラテラルフローテスト測定原理

Dip'n'Check AAVラテラルフローテストは,イムノクロマトグラフィーの原理を利用しています。
AAV test stripには,下記の試薬がコーティングされています。

  • Gold conjugate:金コロイド標識抗体
  • テストライン(T):ストレプトアビジン
  • コントロールライン(C):抗マウス抗体(Anti-mouse antibody)
  1. 粗ライセートまたは精製されたAAV試料をAntibody conjugate AおよびBと混合することで,溶液中にAAVカプシドと2種類の標識抗体の複合体が形成される。
  2. 溶液にtest stripを浸すと,形成した複合体は毛細管現象によってtest stripの中を移動し,複合体のAntibody conjugate AにGold conjugateが結合する。
  3. 溶液中にAAVカプシドを含む複合体が存在する場合,複合体はテストライン(T)に結合し,発色する。
  4. 溶液中にAAVカプシドが存在しない場合,複合体は形成されないため,テストライン(T)にGold conjugateは結合せず,発色しない。
  5. コントロールライン(C)の発色により,テストが適切に機能しているかどうかを確認する。

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操作方法概略

ラテラルフローテスト操作方法概略
  1. 2 mlチューブに50μlのRunning bufferを加える。
  2. 50μlのRunning bufferに対し,Antibody conjugate AとBをそれぞれ3μlずつ加える。
  3. 100μlの試料をチューブに加えて混合する。室温で10分間インキュベートする。
  4. チューブ内の溶液にTest stripのSample padを浸す。明瞭なコントロールライン(C)が現れるまで10分間静置する。

検出範囲に達するまで,細胞溶解液や精製AAVをPBSなどで複数回希釈してご使用下さい。


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結果の解釈方法

ラテラルフローテスト結果の解釈方 AAV3ラテラルフローテスト結果

画像をクリックすると拡大図をご覧いただけます。

キットには濃度標準試薬(Standard)は含まれていません。

  • 陽性:テストライン(T)とコントロールライン(C)の両方で発色した。
  • 陰性:テストライン(T)は発色せず,コントロールライン(C)のみで発色した。
  • 無効:コントロールライン(C)に発色が無い場合,テストライン(T)の発色に関係なく,結果は無効。

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キット内容

  • AAV test strip(25 strips)
  • Running buffer
  • Reaction tube(25 tubes)
  • Antibody conjugate A / B

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価格

[在庫・価格 :2022年05月18日 23時09分現在]

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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