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ストランド特異的なNGSライブラリーを調製するキット RNA-seq用ライブラリー調製キット（REALLY rNONE/hg-rNOME Kit）

掲載日情報：2025/05/20 現在Webページ番号：72141

クラレット バイオサイエンス /
Claret Bioscience
[メーカー略称：CAT]

わずか4つの簡単なステップで、劣化したRNAからでもNGS解析用のライブラリー調製およびリボソームRNA除去を実行できます。ライブラリー調製の過程で、二本鎖DNAを生成しないため、方向性情報を保持するためのステップの追加は不要です。rRNAの除去に対応したREALLY rNONE Kitと、rRNAおよび全血由来のヘモグロビン転写物の除去に対応したREALLY hg-rNONE Kitがあります。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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REALLY rNONEテクノロジーについて

Claret Bioscience社は、一本鎖DNAから効率良くNGS解析用のライブラリーを調製するSRSLY Kitを販売しています（☞ 本技術を用いたDNAライブラリー調製キットの詳細はこちら）。本ページに掲載のREALLY rNONE Kitシリーズは、合成した一本鎖cDNAにこのSRSLY技術を利用して直接アダプターをライゲーションするRNA-seq用のライブラリー調製キット（Illumina社装置対応）です。アダプター結合前にcDNAを二本鎖にする必要がなく、第一鎖からライブラリーを調製できるため、シークエンスの方向性を気にする必要がありません。また、事前にrRNAを除去するのではなく、アダプター結合後に除去する方法を用いることにより、不安定なRNAの処理にかかる時間を短縮しています。

REALLY rNONEを用いたNGS解析用のライブラリー調製のワークフロー

図をクリックすると拡大します（🔍）

REALLY rNONEを用いたNGS解析用のライブラリー調製のワークフロー



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特長

  • ストランド特異的なライブラリーを構築するため、シークエンスの向きを気にする必要がありません。
  • DNA精製用ビーズおよびrRNA除去用試薬もキットに含まれます。
  • ヒトおよびマウスの細胞質およびミトコンドリアrRNAを、1%未満まで高効率に除去します。
  • 10～250 ngのTotal RNAからライブラリーを調製できます。

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製品ラインナップ

ライブラリー調製には、☞ ライブラリー調製キット（REALLY rNONE/hg-rNONE Kit）に加え、☞ Index Primerが別途必要となります。


ライブラリー調製キット

ライブラリー調製キットは、rRNAを除去したライブラリー用のREALLY rNONE Kit、およびrRNAとhemoglobin転写物を除去したライブラリー用のREALLY hg-rNONE Kitが選択できます。それぞれ、24および96 reactionsの製品があります。


品名 REALLY rNONE Kit REALLY hg-rNONE Kit
調製できるライブラリー rRNAを除去 rRNAとhemoglonin転写物を除去
アッセイ数 24 reactions 96 reactions 24 reactions 96 reactions
商品コード CBS-RB100-24 CBS-RB100-96 CBS-RB200-24 CBS-RB200-96
キット内容 hgNONE probe set − ●
Clarefy DNA purification beads for REALLY ● ●
Streptavidin beads ● ●
rNONE purification beads ● ●
REALLY DNase Ⅰ enzyme ● ●
First strand buffer ● ●
Randam primers ● ●
First strand enzyme ● ●
Strand specificity reagent ● ●
rNONE enhancer ● ●
Hybridization buffer ● ●
Bind N wash buffer ● ●
rNONE probe set ● ●


Index Primer

Index PrimerはUDI（Unique Dual Index）あるいは UDIを含むUMI（Unique Molecular Index）から選択できます。


品名 Unique Dual Indexing PCR Primers Unique Molecular Index with Unique Dual Indexing PCR Primers
24 UDI Primer Set 96 UDI Primer Set 24 UMI/UDI Primer Set 96 UMI/UDI Primer Set
アッセイ数 24 reactions 96 reactions 24 reactions 96 reactions
商品コード CBS-UD-24 CBS-UD-96 CBS-UM-24 CBS-UM-96


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使用例

本製品と従来品の比較

Condition Input PCR cycles Yield（ng） Adapter dimer（%） Avg. bp
REALLY 10 ng 11 26.16 1.01 479
50 ng 9 22.52 0.21 491
100 ng 9 46.8 0.1 463
250 ng 9 81.2 0.02 464
dsPrep 10 ng 16 16.4 0 379
50 ng 14 17.16 0.08 383
100 ng 14 24.8 1.14 390
250 ng 14 66.4 0.03 414

本製品（REALLY rNONE Kit）と二本鎖合成を必要とする従来のライブラリー調製キット（dsPrep）を用いて、Total Human RNA controlからライブラリーを調製した。本製品を用いた場合、少ないPCRサイクル数でも得られるライブラリー収量が従来のキットを用いた場合より総じて高い結果となった。


Library trace
Concordance

本製品（REALLY rNONE Kit）と二本鎖合成を必要とする従来のライブラリー調製キット（dsPrep）を用いて、さまざまな量のTotal Human RNA controlからライブラリーを調製した。二本鎖合成を必要とするdsPrepと比較して、本製品で調製したライブラリーは、高い複雑性を有し、またバイアスが無い均一な遺伝子領域のカバレッジを示した。

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rRNAおよびHemoglobin転写物の除去効率

Library trace

10 ngおよび100 ngの全血由来のTotal RNAから調製したライブラリーと、その後rRNA除去（REALLY rNONE Kit）、rRNAおよびHemoglobin転写物除去（REALLY hg-rNONE Kit）を行ったライブラリーで比較を行った。いずれの試料においても、rRNA、あるいはrRNAとHemoglobin転写物が除去されていることが示された。


Library trace
Concordance

REALLY hg-rNONE KitによるHemoglobin転写物を除去した場合と、除去していない場合を比較した。hg-rNONEプローブによる除去を実施した場合、高発現型ヘモグロビン（HBA1、HBA2、HBB）、低発現型ヘモグロビン（HBD、HBM、HBQ1）のいずれにおいても高度に除去されていることが示された。

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劣化したRNAからのライブラリー調製における比較

Method Input Pairs Kept（%） Mapped（%） Unmapped（%） Duplicates（%） Correct strand（%）
REALLY 10 ng FFPE 35,416,649 80.30 78.40 11.55 85.68 97.91
100 ng FFPE 33,338,471 95.79 83.32 8.25 45.70 98.51
dsPrep 100 ng FFPE 10,475,270 98.46 88.36 6.05 69.06 92.26

Library trace

Library trace

Concordance

Concordance

FFPE由来の劣化したTotal RNA（RIN<3）からREALLY rNONEキットを用いてライブラリーを調製した。従来のdsPrep法ではライブラリーを調製できなかったが、本キットを用いると10 ngの劣化したRNAからでも16サイクルのPCRでライブラリーを調製することが出来た。得られたライブラリーは高いマッピング率と重複率を有し、また10 ngと100 ngの劣化したRNAから調製したライブラリーにおいて高い一致が観察された。

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価格

☞ 製品ラインナップをご確認の上、必要な製品を組み合わせてご購入下さい。

REALLY rNONE NGS Library Preparation Bundle Kit

[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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 納期 文献数
REALLY-rNONE RNA NGS Library Preperation Bundle (24 reactions)
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 3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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説明文
RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNA除去とライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
法規制等
保存条件 法規備考
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REALLY-rNONE NGS Library Preparation Bundle (96 reactions)
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説明文
RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNA除去とライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

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REALLY-rNONE RNA NGS Library Preperation Bundle (24 reactions)

文献数： 0

説明文 RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNA除去とライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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REALLY-rNONE NGS Library Preparation Bundle (96 reactions)

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説明文 RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNA除去とライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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REALLY hg-rNONE NGS Library Preparation Bundle Kit

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REALLY hg-rNONE RNA NGS Library Preperation Bundle (24 reactions)
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RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNAとヘモグロビン転写物の除去、ライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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REALLY hg-rNONE RNA NGS Library Preparation Bundle (96 reactions)
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RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNAとヘモグロビン転写物の除去、ライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

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REALLY hg-rNONE RNA NGS Library Preperation Bundle (24 reactions)

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説明文 RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNAとヘモグロビン転写物の除去、ライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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REALLY hg-rNONE RNA NGS Library Preparation Bundle (96 reactions)

文献数： 0

説明文 RNA-seq用ライブラリー調製キット。一本鎖cDNAを合成後、二本鎖DNAの合成を経ずに4ステップでリボソームRNAとヘモグロビン転写物の除去、ライブラリー調製が行える。※Index Primerは別途注文する必要があります。
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Unique Dual Indexing PCR Primers

[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

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24 UDI Primer Pairs for 24 reactions
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SRSLY Kitで使用するUnique Dual Indexプライマー。
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製品記事 一本鎖DNAライブラリー調製キット（SRSLY Prep Kit）
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96 UDI Primer Pairs for 96 reactions
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SRSLY Kitで使用するUnique Dual Indexプライマー。
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製品記事 一本鎖DNAライブラリー調製キット（SRSLY Prep Kit）
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リキッドバイオプシー（Liquid Biopsy）研究用製品特集

[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

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24 UDI Primer Pairs for 24 reactions

文献数： 0

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製品記事 一本鎖DNAライブラリー調製キット（SRSLY Prep Kit）
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96 UDI Primer Pairs for 96 reactions

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説明文 SRSLY Kitで使用するUnique Dual Indexプライマー。
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製品記事 一本鎖DNAライブラリー調製キット（SRSLY Prep Kit）
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Unique Molecular Index with Unique Dual Indexing PCR Primers

[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

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12 UDI-UMI primer pairs for 24 reactions
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SRSLY Kitで使用するUDIプライマーとUMIプライマーのセット。
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リキッドバイオプシー（Liquid Biopsy）研究用製品特集
96 UDI-UMI primer pairs for 96 reactions
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説明文
SRSLY Kitで使用するUDIプライマーとUMIプライマーのセット。
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製品記事 一本鎖DNAライブラリー調製キット（SRSLY Prep Kit）
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リキッドバイオプシー（Liquid Biopsy）研究用製品特集

[在庫・価格 ：2025年06月23日 20時55分現在]

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12 UDI-UMI primer pairs for 24 reactions

文献数： 0

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リキッドバイオプシー（Liquid Biopsy）研究用製品特集
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96 UDI-UMI primer pairs for 96 reactions

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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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