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Edit-R CRISPR (knockout) Human Synthetic sgRNA デザイン済みSynthetic sgRNA (化学合成sgRNA)
掲載日情報：2020/07/10 現在Webページ番号：68800
Horizon Discovery社のWebサイトでの本記事掲載製品の検索方法はこちら！
Edit-Rのデザイン済み化学合成sgRNAは、S. pyogenes由来Cas9ヌクレアーゼのターゲット配列を認識させ、目的のゲノム領域におけるCas9を介したDNA二本鎖切断を起こす化学合成ガイドRNAです。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
※ Dharmacon製品（メーカー略称：DHA）につきまして、2023年4月1日より製品ご注文時にHandling Fee（手数料）を本体価格とは別にご請求させていただきます。詳細は「Handling Feeについてのご案内」をご確認下さい。
※ Horizon｜Dharmacon製品をご注文いただくには、事前にユーザー登録が必要です。ご注文方法の詳細はこちらをご覧下さい。
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特長
- crRNAとtracrRNAを組み合わせた化学合成による単一のガイドRNAです。
- シングルガイドフォーマットのためノックアウト効率が向上し、初代培養細胞や編集の難しい細胞にも使用できます。
- 目的のターゲット遺伝子の編集が保証されています。
- タンパク質の機能的なノックアウトの可能性をアルゴリズムで最大化し、オフターゲット編集を最小化するようにデザインされています。
- 化学合成RNAのため、クローニングとin vitro転写ステップが不要です。
- ヌクレアーゼ耐性修飾が導入されています。
- あらゆるタイプのCas9ヌクレアーゼと互換性があります。
※ デザイン済みガイドRNAの結果はすべて、予想されるノックアウトパフォーマンスの順にランク付けされています。
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製品概要
■信頼性の高い遺伝子ノックアウト結果のための機能的および特異的ターゲティング
すべてのEdit-RガイドRNAは、挿入または欠失を起こすだけでなく、機能的なタンパク質ノックアウトが効率的に生ずるようにアルゴリズムによりデザインされています。さらに、化学修飾がすべてのEdit-R化学合成ガイドRNA製品に導入されおり、ヌクレアーゼによる分解が減少するため、全体的なゲノム編集性能が向上しています。
このような他に類を見ない正確性と効率により、Edit-Rのデザイン済み化学合成sgRNAは、パスウェイ分析や化学合成sgRNAライブラリースクリーニングからのヒットのフォローアップに理想的なツールになります。
■化学合成sgRNAを使用したEdit-R CRISPR-Cas9ゲノム編集実験に必要なコンポーネント
- Cas9ヌクレアーゼ（発現用プラスミド、mRNA、タンパク質、または発現用レンチウイルスベクター）
- 目的の遺伝子をターゲットとするようにデザインされたEdit-R化学合成sgRNA
■大規模な実験には
ヒトゲノムおよび遺伝子ファミリー全体のスクリーニングのために、デザイン済み化学合成sgRNAライブラリーのアレイ化コレクションをご参照下さい。
■推奨トランスフェクション試薬
| Cas9ヌクレアーゼ発現 | 推奨トランスフェクション試薬 |
|---|---|
| 安定して発現したCas9ヌクレアーゼ | 化学合成ガイドRNAのトランスフェクション用のDharmaFECT 1、2、3、4 |
| Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミド | プラスミドおよび化学合成ガイドRNAの同時トランスフェクション用のDharmaFECT Duo |
| Cas9 mRNAまたはタンパク質NLS | mRNAまたはタンパク質と化学合成ガイドRNAの同時トランスフェクション用のDharmaFECT Duo |
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使用例
遺伝子ターゲットごとに単一のデザイン済み化学合成sgRNAを使用したCD4+ T細胞のタンパク質ノックアウトのフローサイトメトリー分析
Lonza 96-well Shuttleシステムを用いて、遺伝子ターゲットごとに個別のデザイン済み化学合成sgRNAまたは非ターゲティングコントロール（NTC）を使用して、初代ヒトCD4+ T細胞をCas9 RNPで核内に導入した。72時間後、CD28、CD3E、およびCXCR3の機能的ノックアウトを、FACS分析によりターゲット遺伝子を発現していない細胞の割合として評価した。細胞を染色し、Alexa Fluor 488標識抗体を使用してCD4発現を正規化し、APC標識一次抗体を使用して各ターゲットCD28、CD3E、およびCXCR3と比較した。
デザイン済み化学合成sgRNAを使用したCD4+ T細胞のタンパク質ノックアウトのフローサイトメトリー分析
Lonza 96-well Shuttleシステムを用いて、遺伝子ターゲットごとに個別のデザイン済み化学合成sgRNAまたは非ターゲティングコントロール（NTC）を使用して、初代ヒトCD4+ T細胞をCas9 RNPで核内に導入した。72時間後、CD28、CD3E、およびCXCR3の機能的ノックアウトを、FACS分析によりターゲット遺伝子を発現していない細胞の割合として評価した。細胞を染色し、Alexa Fluor 488標識抗体を使用してCD4発現を正規化し、APC標識一次抗体を使用して各ターゲットCD28、CD3E、およびCXCR3と比較した。
プール化化学合成sgRNAによるFUS遺伝子の機能的ノックアウト
FUSの機能的ノックアウトは、CAGプロモーター下でCas9を恒常的に発現するU2OS細胞で評価した。0.04μl DharmaFECT 4を用いて、FUSをターゲットとする3つの異なるEdit-Rデザイン済みsgRNAを含む25 nM sgRNAプールで細胞に導入した。トランスフェクションの72時間後に細胞を分割し、96時間後に細胞を固定し、FUSを標的とする一次抗体およびAlexa Fluor 488標識蛍光二次抗体で染色した。Hoechst染色は、核を識別するために使用した。
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製品ラインナップ
■Edit-R デザイン済みSynthetic sgRNA (化学合成sgRNA)
品名をクリックするとHorizon Discovery社のご注文WEBサイトをご覧いただけます。
Individual：1配列
Set of 3：1遺伝子に対する3配列（3本）のセット
| 品名 | 生物種 | 包装 | 商品コード |
|---|---|---|---|
| Edit-R Synthetic sgRNA | Human | 2 nmol | SG-HUMAN-XX-0002 |
| 5 nmol | SG-HUMAN-XX-0005 | ||
| 10 nmol | SG-HUMAN-XX-0010 | Mouse | 2 nmol | SG-MOUSE-XX-0002 |
| 5 nmol | SG-MOUSE-XX-0005 | ||
| 10 nmol | SG-MOUSE-XX-0010 |
| 品名 | 生物種 | 包装 | 商品コード |
|---|---|---|---|
| Edit-R Synthetic sgRNA Set of 3 | Human | 2 nmol | SQ-HUMAN-XX-0002 |
| 5 nmol | SQ-HUMAN-XX-0005 | ||
| 10 nmol | SQ-HUMAN-XX-0010 | Mouse | 2 nmol | SQ-MOUSE-XX-0002 |
| 5 nmol | SQ-MOUSE-XX-0005 | ||
| 10 nmol | SQ-MOUSE-XX-0010 |
■Edit-R Synthetic sgRNA (化学合成sgRNA)用コントロール
品名をクリックするとHorizon Discovery社のご注文WEBサイトを、商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。
また、Edit-R Lethal Controlのご使用をおススメする理由についてはこちらをご覧下さい。
| 品名 | 動物種 | 包装 | 商品コード | |
|---|---|---|---|---|
| PPIB Control | DNMT3B Control | |||
| ポジティブコントロール Edit-R Synthetic sgRNA Positive Control |
Human | 2 nmol | U-009000-01-02 | U-009010-01-02 |
| 5 nmol | U-009000-01-05 | U-009010-01-05 | ||
| Mouse | 2 nmol | U-009120-01-02 | U-009110-01-02 | |
| 5 nmol | U-009120-01-05 | U-009110-01-05 | ||
| ポジティブコントロールsgRNA（PCR プライマー付き） Edit-R Synthetic sgRNA Control Kit |
Human | 2 nmol | UK-009050-01-02 | UK-009060-01-02 |
| 5 nmol | UK-009050-01-05 | UK-009060-01-05 | ||
| Mouse | 2 nmol | UK-009150-01-02 | UK-009160-01-02 | |
| 5 nmol | UK-009150-01-05 | UK-009160-01-05 | ||
| 品名 | 動物種 | 包装 | Control 1 | Control 2 |
| Edit-R Lethal Synthetic sgRNA Control Cas9の機能性とsgRNA導入効率のモニター用 |
- | 2 nmol | U-008000-01-02 | U-008000-02-02 |
| 5 nmol | U-008000-01-05 | U-008000-02-05 | ||
| 品名 | ネガティブコントロール Non-targeting sgRNA |
|
|---|---|---|
| 包装 | 2 nmol | 5 nmol |
| Control #1 | U-009501-01-02 | U-009501-01-05 |
| Control #2 | U-009502-01-02 | U-009502-01-05 |
| Control #3 | U-009503-01-02 | U-009503-01-05 |
| Control #4 | U-009504-01-02 | U-009504-01-05 |
| Control #5 | U-009505-01-02 | U-009505-01-05 |
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実験のヒント：製品開発者インタビュー
Horizon Discoveryのゲノム編集試薬の製品マネージャーであるRyan DonnellyにsgRNAを使用したCRISPRワークフロー効率化の可能性について聞きました。
|
Horizon Discovery社 実験のヒント Vol. 1 あらゆる細胞のCRISPRワークフローを効率化するために：Dharmaconの化学合成sgRNA |
 |
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ご注文方法
Horizon｜Dharmacon製品をご注文いただくには、事前にユーザー登録が必要です。
初めてご注文いただくお客様はユーザー登録・ご注文方法の詳細をこちらでご覧下さい。
ユーザー登録済みのお客様はID（メールアドレス）とパスワードで、Horizon Discovery社のWebサイトトップページでログインして、製品を検索・ご指定の上ご注文下さい。
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製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。