細胞のストレスをモニタリングする蛍光バイオセンサー Cell Stress Assay Kits

• 測定原理
• 使用例
• 蛍光バイオセンサー製品の種類
• 特長
• 操作方法概略
• キット内容
• iPSC由来細胞を用いたストレスおよび毒性試験の動画による説明
• 価格

測定原理

Green Cell Stress Assay（#U0900G)

Ratiometric Cell Stress Assay（#U0901G)

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使用例

化合物によるストレスのモニタリング

• 使用キット：Green Ratiometric Cell Stress Assay Kit(#U0900G)

遺伝的ストレスのモニタリング

• 使用キット：Green Ratiometric Cell Stress Assay Kit(#U0900G)

ストレス回復の検出

• 使用キット：BacMam Ratiometric Cell Stress Assay Kit(#U0901G)

HEK293T細胞を用いたタプシガルギン（ERストレス誘導化合物）による細胞ストレスの測定

• 使用キット：Ratiometric Cell Stress Assay Kit(#U0901G)
• 左：プレートリーダーによるEC₅₀の決定。データのプロット幅は標準偏差（±SD）を示し、三重試験を行った。

• 右：蛍光顕微鏡により細胞のストレスをモニタリングした。緑色のストレスマーカーを発現する細胞の割合は、タプシガルギン処理濃度用量依存的に増加することがわかる。
• タプシガルギンに対するEC₅₀値は、プレートリーダーと画像解析データの間で高い相関性が見られた。

細胞ストレスバイオセンサーによるタンパク質発現および細胞ストレスの変化のモニタリング

• 使用キット：Ratiometric Cell Stress Assay Kit(#U0901G)
• 左：Ratiometric Cell Stress Assay（#U0901G)をHEK293T細胞に形質導入し、DMSO（コントロール）または1μMのタプシガルギン（Tg）で処理した。Synergy MX plate reader（BioTek社）で24時間緑色および赤色蛍光をモニターした。ストレスの誘導は緑色蛍光の増加によって示され、これは60分以内に出現し、7時間後に減少し始めたことがわかる。 タンパク質の発現レベルは、タプシガルギンによる長期処理によっても変化した。赤色蛍光は、DMSO処理細胞とタプシガルギン処理細胞ともに、タプシガルギンによるストレスが回復し始める7時間までは同速度で増加した。タプシガルギン処理を行った細胞では、その後に一般的なタンパク質の発現が上方制御される。緑色／赤色蛍光比を用いることで、タンパク質発現の変化を標準化できる。
• 右：本キットのバイオセンサーと、ロドプシン、SODおよびα-シヌクレインの3つのタンパク質の野生型または変異型をHEK293T細胞に形質導入した。ロドプシン変異体では、緑色蛍光によってストレスが有意に増加したことがわかる。一方、SODまたはα-シヌクレイン変異体では、赤色チャンネルで示されるタンパク質発現の有意な減少が観察された。緑色／赤色蛍光比は、タンパク質発現の減少を制御し、SOD変異体がその野生型のコントロールに対する細胞ストレスの検出を可能にする（全データは平均値±SDとn=3～6 wellsの結果を図示した)。

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蛍光バイオセンサー製品の種類

Target factor	標的経路	プロモーター	細胞種	色	蛍光シグナル	測定方法		商品コード
						Plate	Imaging
Cellular stress	小胞体(ER)のストレスまたは ER変性タンパク質（UPR）に反応して、明緑色の蛍光を発現する。	CMV	HEK293細胞 (iPSC由来心筋細胞, 神経細胞)	Green Upward Cell Stress Sensor	Upward	●	●	U0900G
				恒常的に赤色シグナルを発現し、小胞体(ER)のストレスまたは ER変性タンパク質（UPR）に反応して、明緑色の蛍光を発現する。		●	●	U0901G

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特長

• ERストレスとUPRの普遍的かつ可逆的バイオセンシングが可能です。
• 初代培養細胞、iPSC由来心筋細胞または神経細胞を用いることができます。
• red cADDis、GECO Ca²⁺またはDAGセンサーなどの異なる蛍光センサー製品を組み合わせて用いることにより、Gs, GqおよびGiの複数のセカンドメッセンジャーシグナル伝達経路の多重同時測定を簡便に行うことができます。
• 自動蛍光プレートリーダーおよびイメージングシステムに対応しています。
• 哺乳動物生細胞（CMVプロモーター）および神経細胞（Synapsinプロモーター）を標的としたスクリーニングが可能です。
• 死細胞の計数に比べ、迅速かつ高感度です。

測定波長

蛍光色素の種類	励起波長（nm）	測定波長（nm）	蛍光スペクトル図
Green	506	517
Red	550～590	600～650

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操作方法概略

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キット内容

• Green Cell stress sensor BacMam（ERと細胞性ストレスに対応して緑色シグナルが増加）（#U0900Gのみ）
• Red/Green Cell stress sensor BacMam（恒常的に赤色シグナルを発現し、小胞体(ER)のストレスまたは ER変性タンパク質（UPR）に反応して、明緑色の蛍光を発現する。（#U0901Gのみ）
• Sodium butyrate aqueous solution (HDAC inhibitor)^*
• Thapsigargin dissolved in DMSO, diluted to 100 μM in in H₂O.