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生細胞のcAMP検出用蛍光バイオセンサー cADDis cAMP BacMam Assay
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：64420
cADDis cAMP sensor BacMamは、cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が上昇または減衰する蛍光タンパク質を応用した蛍光バイオセンサーです。この蛍光バイオセンサーは、蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡による画像解析システムを用いて、従来困難であった生細胞におけるcAMPの動的挙動の継時測定、局在性の観察およびマルチプレックスアッセイを簡便に行うことができます。
※ Montana Molecular社のセカンドメッセンジャーアッセイキットの特長についてはこちらもご覧下さい。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
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| cADDis cAMP sensorを導入したHEK293細胞 | cADDis cAMP sensorを導入した心筋細胞 | |
| ライブセルアッセイプロトコール1 | ライブセルアッセイプロトコール2 |
追加しました。
- cADDis cAMP BacMam Assay とは
- 蛍光バイオセンサー製品の種類
- 特長
- 画像解析におけるcADDis cAMP BacMam Assayの種類の選択基準
- 使用例
- 操作方法概略
- キット内容
- 他社cAMPライブセルモニタリングシステムとの比較
- 価格
cADDis cAMP BacMam Assay とは
ELISA法に代表される従来のcAMPの測定法は、細胞溶解など煩雑な操作が必要で、またエンドポイント測定のために生細胞における動的挙動について理解を得ることは困難でした。cAMP BacMam Assayでは、哺乳動物の生細胞において、cAMPに結合して蛍光が増大（Upward Kit）または減少（Downward Kit）する蛍光タンパク質をコードする遺伝子を組み込んだ発現ベクターを使用しています。これらの発現ベクターは非増殖バキュロウイルスとして供給され、標的培養細胞に感染することにより発現しcAMPと結合することにより、一過性のcAMP感応性蛍光バイオセンサーとして機能します。
cAMPはGPCRシグナリング（Gsシグナリング）のセカンドメッセンジャーであるため、GPCRシグナリングの増幅または抑制する化合物のスクリーニングや、外部刺激に対する細胞レベルでのシグナル応答研究に最適です。
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蛍光バイオセンサー製品の種類
※商品コードをクリックすると価格表を直接ご覧いただけます。
| Target factor | 標的経路 | プロモーター | 細胞種 | 色 | 蛍光シグナル | 測定方法 | 商品コード | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Plate | Imaging | |||||||
| cAMP | Gs | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | U0200G |
| Downward | ● | ● | D0200G | |||||
| Red | Upward | ● | ● | U0200R | ||||
| Non-neuronal / primary-cilia | Green | Downward | ● | ● | D0201G | |||
| Synapsin* | Neuron / whole cell | Green | Upward | － | ● | U0202G | ||
| Downward | － | ● | D0202G | |||||
| cAMP | Gi | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | X0200G |
| DAG | Gq | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | U0300G |
| Downward | ● | ● | D0300G | |||||
| Red | Upward | ● | ● | U0300R | ||||
| PIP2 | Gq | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | D0400G |
| Red | ● | ● | D0400R | |||||
| Ca2+ | Gq | CMV | Non-neuronal / whole cell | Red | Upward | ● | ● | U0600R |
| Voltage | - | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | D0700G |
| Cellular stress | Endoplasmic Reticulum (ER) and ER Unfolded Protein Response | CMV | HEK293 cells (Adherent cells and iPSC-derived lines) |
Green Upword Cell Stress Sensor | Upward | ● | ● | U0900G |
| Green Upword Cell Stress Sensor with constitutive red fluorescent protein for ratiometric measurement. | ● | ● | U0901G | |||||
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特長
- 安定性の高い蛍光により、細胞内におけるcAMPの継時変化の測定が行えます。
- 添加するバキュロウイルス量に応じて、センサー発現量を簡単に調節することが可能です。
- 自動蛍光プレートリーダーおよびイメージングシステムに対応しています。
- 簡便なシングルステップアッセイです。補酵素や細胞溶解の操作は不要です。
- 異なる蛍光センサー製品を組み合わせて用いることにより、Gs, GqおよびGiの複数のシグナル伝達経路の多重測定を簡便に行うことができます。
- 多くの細胞株、初代培養細胞に用いることができます。 ⇒ 使用実績のある細胞種
- 測定回数：4×96 wellプレート分の試薬が含まれています。
- 測定波長：
Green 励起485～505 nm／蛍光515～535 nm
Red 励起550～590 nm／蛍光600～700 nm
上図：cADDisの模式図 (Downward型センサー#D0200Gの場合)。Downward型cADDis cAMP センサーはcAMPに結合していない場合緑色蛍光を発する。Gs型GPCRであるb2-ARのアゴニストisoproterenolを添加すると、b2-AR に結合したGsが活性化され、Adenylyl cyclaseに作用し、cAMPが産生される。cAMPの産生に伴い、cADDis cAMPセンサーがcAMPに反応して、蛍光が消光する。
中図：実際にHEK293細胞でDownward型cADDis cAMPセンサーを発現させたときの細胞の蛍光観察像。
下図：蛍光像の変化を蛍光プレートリーダーで測定。縦軸（Delta F/F0）は各時間における蛍光強度Fをｔ=0における蛍光強度F0で割った値の変化量。
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画像解析におけるcADDis cAMP BacMam Assayの種類の選択基準
Upward Kitを利用した場合にはcAMP分子の局在と蛍光シグナルが同調するため、cAMPの局在性を直接観察することができます。しかし、もともとの蛍光バックグラウンドが高い場合では、蛍光シグナルの増幅の確認が困難になるためにDownward Kitの使用をご検討下さい。Downward Kitを使用した場合、cAMP分子の局在に対応して蛍光シグナルが消光することから、もともとの蛍光バックグラウンドが高くUpward Kitでの解析が困難な場合に有効です。この場合、細胞全体の蛍光シグナルの初期値から差分を取った減衰値によりcAMPの局在性の解析を行うことが可能です。
| センサーの種類 | 蛍光シグナル | 用途・選択基準 |
|---|---|---|
| Upward Kit | 上昇 | 蛍光バックグラウンドが低い場合に使用可能 | Downward Kit | 減衰 | 蛍光バックグラウンドが高い場合に有用 |
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使用例
(1) Isoproterenol誘導cAMP産生: カイネティック分析, 量依存的応答曲線とアッセイ信頼性解析
A：HEK293細胞にDownward 型cADDis cAMP センサー（#D0200G）を発現させ、isoproterenolを各濃度で添加した際の蛍光強度の変化を経時的にプロットした。Isoproterenolの濃度依存的に蛍光強度の変化が見られた。
B：AのデータをもとにIsoproterenol濃度と蛍光強度の変化をプロットした。
C：再現性の評価とハイスループットスクリーニングにおける信頼性の指標であるZ’factorの算出。Z’ factor=0.95
(2) 2種類の蛍光バイオセンサーを用いたGs/Gqシグナル伝達経路特異的応答の同時測定
(3) Giシグナル: カイネティック分析, 量依存的応答曲線とアッセイ信頼性解析
A：HEK293細胞にUpward 型cADDis cAMP センサー（#X0200G）とGi型のGPCRであるドーパミンD2受容体を共発現させ、Quinpiroleを各濃度で添加した際の蛍光強度の変化をプロットした。Quinpiroleの濃度依存的に蛍光強度の変化が見られた。
B：AのデータをもとにQuinpirole濃度と蛍光強度の変化をプロットした。
C：再現性の評価とハイスループットスクリーニングにおける信頼性の指標であるZ’ factorの算出。Z’ factor=0.85
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操作方法概略
- 細胞を播種する。
- BacMam（ウイルス）と添付のSodium butyrate（HDAC阻害剤）を培地に混ぜて細胞に添加する。
- 6時間後に培地交換し18時間培養する。
- センサータンパク質が発現する。
- 任意のアゴニスト／化合物を添加する。
- 蛍光プレートリーダー または蛍光顕微鏡で継時的に測定および観察を行う。
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キット内容
- cADDis cAMP sensor BacMam (9×105～2×107 IU/ml in TNM-FH Insect Culture)*1
- Sodium butyrate aqueous solution (HDAC inhibitor)*2
- β2 Adrenergic receptor with nuclear red label (Gs-coupled receptor as a positive control)
- Isoproterenol (Gs signaling positive control)
*1：キットにより内容が異なります。
*2：他のHDAC阻害物質もご使用いただけます。
※測定には、96 wellマイクロプレート、蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡（蛍光イメージングシステム）が必要です。
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他社cAMPライブセルモニタリングシステムとの比較
| ポイント | MOM社cADDis cAMP BacMam Assay | A社ライブセルイメージングシステム |
|---|---|---|
| センサータンパク質 | cAMP結合タンパク質融合蛍光タンパク質 cAMPにより蛍光強度が変化 | cAMP結合タンパク質融合ルシフェラーゼ cAMPによりルシフェラーゼが活性化 |
| 検出系 | 蛍光シグナル - 蛍光プレートリーダー - 各種蛍光顕微鏡 (細胞内局在の観察） | ルシフェリン発光ルミノメーター |
| 遺伝子導入、標的細胞 | BacMam：さまざまな細胞で高発現 | プラスミド：細胞種が限定 |
| 薬剤応答濃度限界 | nM | sub-uM |
| アゴニスト添加後の データサンプリング | 秒単位 | 分単位 |
| マルチプレックス | 対応 | 非対応 |
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価格
[在庫・価格 ：2025年04月25日 17時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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Green Downward cAMP in BacMam(400 assay, 10mL) |
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Green Downward cAMP in BacMam(30mL) |
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Green Downward cAMP in BacMam(60mL) |
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Green Upward cAMP in BacMam(400 assay, 10mL) |
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Green Upward cAMP in BacMam(30mL) |
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Green Cilia-Targeted cAMP in BacMam(400 assay, 10mL) |
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Red Upward cAMP in BacMam(400 assay, 10mL) |
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Red Upward cAMP in BacMam(30mL) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 17時35分現在]
Green Downward cAMP in BacMam(400 assay, 10mL)
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- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 。 哺乳動物細胞内で，cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が減衰する蛍光バイオセンサー。蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡を用いた画像解析により，生細胞におけるcAMPの動的挙動を簡便かつ継時的に測定することができる。測定波長：励起 485～505 nm，蛍光 510～535 nm。 |
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- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 。 哺乳動物細胞内で，cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が上昇する蛍光バイオセンサー。蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡を用いた画像解析により，生細胞におけるcAMPの動的挙動を簡便かつ継時的に測定することができる。測定波長：励起 485～505 nm，蛍光 510～535 nm。 |
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- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 。 一次繊毛において，cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が減衰する蛍光バイオセンサー。蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡を用いた画像解析により，一次繊毛におけるcAMPの動的挙動を簡便かつ継時的に測定することができる。測定波長：励起 450～490 nm，蛍光 510～550 nm。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 4℃,暗所保存 | 法規備考 | |
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ニュース2019年10月15日号 p.19 ニュース2017年8月1日号 p.7
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| 説明文 | 。 哺乳動物細胞内で，cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が上昇する蛍光バイオセンサー。蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡を用いた画像解析により，生細胞におけるcAMPの動的挙動を簡便かつ継時的に測定することができる。測定波長：励起 550～590 nm，蛍光 600～700 nm。 |
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