HOME > 試薬 > 細胞情報伝達 > その他シグナル伝達 > cADDis cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assay

生細胞のcAMP検出用蛍光バイオセンサー cADDis cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assay

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:64420

cADDis cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assayは、cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が上昇または減衰する蛍光タンパク質を応用した蛍光バイオセンサーです。この蛍光バイオセンサーは、蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡による画像解析システムを用いて、従来困難であった生細胞におけるcAMPの動的挙動の継時測定、局在性の観察およびマルチプレックスアッセイを簡便に行うことができます。
目的細胞へのバイオセンサー導入に用いるバキュロウイルスベクターにBacMamを使用する従来型に加え、HEK293細胞やCHO細胞に対する導入効率が大幅に向上した改良型のバキュロウイルスベクターBig Sky BacMamを使用する製品もあります。

画像内容説明

画像内容説明
cADDis cAMPセンサーを導入したHEK293細胞

cADDis cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assayとは

ELISA法に代表される従来のcAMPの測定法は、細胞溶解など煩雑な操作が必要で、またエンドポイント測定のために生細胞における動的挙動について理解を得ることは困難でした。cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assayでは、哺乳動物の生細胞において、cAMPに結合して蛍光が増大(Upward Kit)または減少(Downward Kit)する蛍光タンパク質をコードする遺伝子を組み込んだ発現ベクターを使用しています。これらの発現ベクターは非増殖バキュロウイルスとして供給され、標的培養細胞への感染により細胞内で発現し、これがcAMPと結合することにより、一過性のcAMP感応性蛍光バイオセンサーとして機能します。
cAMPはGPCRシグナリング(Gsシグナリング)のセカンドメッセンジャーであるため、GPCRシグナリングの増幅または抑制する化合物のスクリーニングや、外部刺激に対する細胞レベルでのシグナル応答研究に最適です。
また、Gi共役GPCRの活性化に伴うcAMP産生抑制の解析に使用できる製品(#X0250G)もあります。


Upward sensor Downward sensor

BacMamベクターとBig Sky BacMamベクターの比較

HEK293T細胞に対する従来型ベクターBacMamおよび改良型ベクターBig Sky BacMamの導入効率
従来型ベクターBacMamおよび改良型ベクターBig Sky BacMamを用いてmNeon Green遺伝子をHEK293T細胞に導入し、その蛍光強度で導入効率を比較した
HEK293T細胞において、同一条件で比較したところ、24時間後の蛍光強度は3~4倍に向上した。

画像内容説明
従来型ベクターBacMamおよび改良型ベクターBig Sky BacMamを用いてmNeon Green遺伝子をCHO細胞に導入し、その蛍光強度で導入効率を比較した
それぞれの導入効率を24時間後および48時間後の蛍光シグナルで比較した。48時間後では、改良型であるBig Sky BacMamベクターは従来型ベクターBacMamと比較して約9倍の遺伝子導入効率を示した。なお、本結果は従来推奨していたspinoculation処理を行わずに得られた。



目次に戻る

cADDis cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assayの主なラインナップ

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

Target factor 標的経路 プロモーター 細胞種 ベクター 蛍光シグナル 測定方法 商品コード
Plate Imaging
cAMP Gs CMV Non-neuronal / whole cell Big Sky BacMam Green Upward U0250G
Downward D0250G
Red Upward U0250R
Non-neuronal / primary-cilia BacMam Green Downward - D0201G
Gi Non-neuronal / whole cell Big Sky BacMam Green Downward X0250G


目次に戻る

特長

  • 安定性の高い蛍光により、細胞内におけるcAMPの継時変化の測定が行えます。
  • 添加するバキュロウイルス量に応じて、センサー発現量を簡単に調節することが可能です。
  • 自動蛍光プレートリーダーおよびイメージングシステムに対応しています。
  • 簡便なシングルステップアッセイです。補酵素や細胞溶解の操作は不要です。
  • 異なる蛍光センサー製品を組み合わせて用いることにより、Gs、GqおよびGiの複数のシグナル伝達経路の多重測定を簡便に行うことができます。
  • 多くの細胞株、初代培養細胞に用いることができます。
  • 測定回数:4×96 wellプレート分の試薬が含まれています。
  • 測定波長:
    Green 励起485~505 nm/蛍光515~535 nm
    Red 励起550~590 nm/蛍光600~700 nm
cAMPProduction with cADDis

上図:cADDisの模式図(Downward型センサー)。Downward型cADDis cAMPセンサーはcAMPに結合していない場合緑色蛍光を発する。Gs型GPCRであるb2-ARのアゴニストisoproterenolを添加すると、b2-ARに結合したGsが活性化され、Adenylyl cyclaseに作用し、cAMPが産生される。cAMPの産生に伴い、cADDis cAMPセンサーがcAMPに反応して、蛍光が消光する。

中図:実際にHEK293細胞でDownward型cADDis cAMPセンサーを発現させたときの細胞の蛍光観察像。

下図:蛍光像の変化を蛍光プレートリーダーで測定。縦軸(Delta F/F0)は各時間における蛍光強度Fをt=0における蛍光強度F0で割った値の変化量。



目次に戻る

画像解析におけるcADDis cAMP BacMam/Big Sky BacMam Assayの種類の選択基準

Upward Kitを利用した場合にはcAMP分子の局在と蛍光シグナルが同調するため、cAMPの局在性を直接観察することができます。しかし、もともとの蛍光バックグラウンドが高い場合では、蛍光シグナルの増幅の確認が困難になるためにDownward Kitの使用をご検討下さい。Downward Kitを使用した場合、cAMP分子の局在に対応して蛍光シグナルが消光することから、もともとの蛍光バックグラウンドが高くUpward Kitでの解析が困難な場合に有効です。この場合、細胞全体の蛍光シグナルの初期値から差分を取った減衰値によりcAMPの局在性の解析を行うことが可能です。

センサーの種類蛍光シグナル用途・選択基準
Upward Kit 上昇 蛍光バックグラウンドが低い場合に使用可能
Downward Kit 減衰 蛍光バックグラウンドが高い場合に有用


目次に戻る

アプリケーション例

本項のデータは従来のBacMam(販売終了品)にて取得。

1. Isoproterenol誘導cAMP産生: カイネティック分析、量依存的応答曲線とアッセイ信頼性解析

cAMPProduction with cADDis

A:HEK293細胞にDownward型cADDis cAMPセンサーを発現させ、isoproterenolを各濃度で添加した際の蛍光強度の変化を経時的にプロットした。Isoproterenolの濃度依存的に蛍光強度の変化が見られた。

B:AのデータをもとにIsoproterenol濃度と蛍光強度の変化をプロットした。

C:再現性の評価とハイスループットスクリーニングにおける信頼性の指標であるZ’factorの算出。Z’ factor=0.95


2. 2種類の蛍光バイオセンサーを用いたGs/Gqシグナル伝達経路特異的応答の同時測定

Gs/Gqシグナル伝達経路特異的応答の同時測定

3. Giシグナル: カイネティック分析、量依存的応答曲線とアッセイ信頼性解析

Ca2+/cAMPのマルチプレックス測定

A:HEK293細胞にUpward型cADDis cAMPセンサーとGi型のGPCRであるドーパミンD2受容体を共発現させ、Quinpiroleを各濃度で添加した際の蛍光強度の変化をプロットした。Quinpiroleの濃度依存的に蛍光強度の変化が見られた。

B:AのデータをもとにQuinpirole濃度と蛍光強度の変化をプロットした。

C:再現性の評価とハイスループットスクリーニングにおける信頼性の指標であるZ’ factorの算出。Z’ factor=0.85



目次に戻る

操作方法概略

cADDis cAMP BacMam Assayの操作方法概略
  • 1日目:細胞へのトランスダクションおよび播種
    • ステップ1:ウイルス導入用試薬を調製
    • ステップ2:細胞の調製
    • ステップ3:ウイルス導入用試薬と細胞を混合
  • 2日目:ライブセルアッセイ
    • ステップ4:培養培地をDPBSに置換
    • ステップ5:蛍光を測定


目次に戻る

動画

ライブセルアッセイプロトコール


ライブセルアッセイプロトコール1


ライブセルアッセイプロトコール2

使用例


cADDis cAMPセンサーを導入した心筋細胞

目次に戻る

他社cAMPライブセルモニタリングシステムとの比較

ポイントMOM社cADDis cAMP BacMam AssayA社ライブセルイメージングシステム
センサータンパク質cAMP結合タンパク質融合蛍光タンパク質
cAMPにより蛍光強度が変化
cAMP結合タンパク質融合ルシフェラーゼ
cAMPによりルシフェラーゼが活性化
検出系蛍光シグナル
- 蛍光プレートリーダー
- 各種蛍光顕微鏡(細胞内局在の観察)
ルシフェリン発光ルミノメーター
遺伝子導入、標的細胞BacMam:さまざまな細胞で高発現プラスミド:細胞種が限定
薬剤応答濃度限界nMsub-uM
アゴニスト添加後の
データサンプリング
秒単位分単位
マルチプレックス対応非対応


目次に戻る

キット内容

  • cADDis cAMP sensor BacMam*1
  • Sodium butyrate*2
  • Receptor BacMam*1、*3
  • IsoproterenolまたはQuinpirole Hydrochloride*3

*1:キットにより内容が異なります。
*2:他のHDAC阻害物質もご使用いただけます。
*3:#D0201Gには含まれません。
測定には、96 wellマイクロプレート、蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡(蛍光イメージングシステム)が別途必要です。



目次に戻る

価格

[在庫・価格 :2026年05月16日 15時55分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Green Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (30ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Downward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Downward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Downward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (30ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Red Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Red Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Red Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Cilia-Targeted cAMP in BacMam(400 assay, 10mL)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
。 一次繊毛において,cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が減衰する蛍光バイオセンサー。蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡を用いた画像解析により,一次繊毛におけるcAMPの動的挙動を簡便かつ継時的に測定することができる。測定波長:励起 450~490 nm,蛍光 510~550 nm。
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年10月15日号 p.19
ニュース2017年8月1日号 p.7

製品記事 イメージング解析用プローブ(細胞用)特集
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Gi cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Gi cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)
Green Gi cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (30ml)
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • お問い合わせ
説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

[在庫・価格 :2026年05月16日 15時55分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

Green Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (30ml)

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Downward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Downward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Downward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (30ml)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Red Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Red Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Red Upward cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Cilia-Targeted cAMP in BacMam(400 assay, 10mL)

文献数: 0

説明文 。 一次繊毛において,cAMPと特異的に結合することにより蛍光強度が減衰する蛍光バイオセンサー。蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡を用いた画像解析により,一次繊毛におけるcAMPの動的挙動を簡便かつ継時的に測定することができる。測定波長:励起 450~490 nm,蛍光 510~550 nm。
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年10月15日号 p.19
ニュース2017年8月1日号 p.7

製品記事 イメージング解析用プローブ(細胞用)特集
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Gi cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (5ml)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Gi cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (15ml)

文献数: 0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)

Green Gi cADDis cAMP Assay - Big Sky BacMam (30ml)

文献数: 0

説明文
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ

製品記事
関連記事 セカンドメッセンジャーを経時的・動的に測定(Montana Molecular社)



目次に戻る

関連製品:MOM社2ndメッセンジャー測定用蛍光バイオセンサー

Target factor 標的経路 プロモーター 細胞種 蛍光シグナル 測定方法 商品コード
Plate Imaging
DAG Gq CMV Non-neuronal / whole cell Green Upward U0350G
Downward D0350G
Red Upward U0350R
Downward D0350R
PIP2 Gq CMV Non-neuronal / whole cell Green Downward D0450G
Red D0450R
Ca2+ Gq CMV Non-neuronal / whole cell Green Upward U0650G
Red U0650R
Cellular stress Endoplasmic Reticulum (ER) and
ER Unfolded Protein Response
CMV HEK293 cells
(Adherent cells and
iPSC-derived lines)
Green Upword Cell Stress Sensor with constitutive red fluorescent protein for ratiometric measurement. Upward U0921G

目次に戻る

お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。