三次元培養細胞に適した核酸導入試薬 3D-FectIN／3D-Fect

3D-FectINとコラーゲンベースのハイドロゲル（Matrigel、BD Biosciences社）を用いたHMEC-1細胞のトランスフェクション
96ウェルプレート1ウェル当たり2 μgのGFP plasmid DNA（pVectOZ-GFP、#PL00120）と8 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体と重合反応させたコラーゲンベースのハイドロゲル（Matrigel、BD Biosciences社）にHMEC-1細胞（30,000 cells/well）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション48時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-FectINとコラーゲンベースのハイドロゲル（Matrigel、BD Biosciences社）を用いた神経幹細胞のトランスフェクション
96ウェルプレート1ウェル当たり1 μgのRFP Plasmid DNAと1 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体と重合反応させたコラーゲンベースのハイドロゲル（Matrigel、BD Biosciences社）に神経幹細胞（Neural Stem Cell、NSC、20,000 cells/well）からなるNeurospheresを添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション48時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-FectINとコラーゲン由来のハイドロゲルを用いたRAWのトランスフェクション
96ウェルプレート1ウェル当たり2 μgのRFP Plasmid DNAと8 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体と重合反応させたコラーゲン由来ハイドロゲル中にRaw細胞（マウス由来マクロファージ、30,000 cells/well）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション48時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-FectINとコラーゲン由来のハイドロゲルを用いた各種細胞株のトランスフェクション
96ウェルプレート1ウェル当たり2 μgのRFPまたはGFP Plasmid DNAと8 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体と重合反応させたコラーゲン由来ハイドロゲルにさまざまな細胞株（NIH-3T3細胞、COS-7細胞、HEK-293T細胞、30,000 cells/well）それぞれ添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション48時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-FectINとコラーゲン由来のハイドロゲルを用いてSEAP Plasmid DNAを導入した細胞から分泌されたアルカリホスファターゼ濃度
96ウェルプレート1ウェル当たり2 μgのSEAP Plasmid DNA（pVectOZ-SEAP、#PL00150）と8 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体と重合反応させたコラーゲン由来ハイドロゲルに各種細胞（COS-7細胞、NIH-3T3細胞、hASC、RAW細胞、30,000 cells/well）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション2日後に、培養液中に分泌されたアルカリホスファターゼの濃度を測定した。

3D-FectINを用いたGFP発現NIH-3T3細胞の遺伝子ノックダウン（siRNA）
各種濃度のsiRNAと4 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体と重合反応させたハイドロゲルにGFP発現NIH-3T3細胞（30,000 cells）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション48時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-Fectとコラーゲンベース3Dスキャフォールドを用いたCOS-7細胞のトランスフェクション
24ウェルプレート1ウェル当たり3 μgのRFP Plasmid DNAと12 μlの3D-Fectを用いて形成した複合体と反応させたコラーゲンベース3DスキャフォールドにCOS-7細胞（0.5×10⁵ cells/well）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション24時間に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-Fectとコラーゲン由来3Dスキャフォールドを用いたHEK-293T細胞のトランスフェクション
24ウェルプレート1ウェル当たり3 μgのRFP Plasmid DNAと12 μlの3D-Fectを用いて形成した複合体と反応させたハニカム構造のコラーゲン由来3DスキャフォールドにHEK-293T細胞（0.5×10⁵ cells/well）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション24時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-Fectとコラーゲンベース3Dスキャフォールドを用いてSEAP Plasmid DNAを導入した細胞から分泌されたアルカリホスファターゼ濃度
24ウェルプレート1ウェル当たり3 μgのSEAP Plasmid DNA（pVectOZ-SEAP、#PL00150）と12 μlの3D-Fectで形成した複合体と反応させたコラーゲンベース3Dスキャフォールドに各種細胞（COS-7細胞、HMEC-1細胞、MDCK細胞、NIH-3T3細胞、1.0×10⁵ cells/well）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション3日後に、培養液中に分泌されたアルカリホスファターゼの濃度を測定した。

3D-Fectを用いたGFP発現HeLa細胞の遺伝子ノックダウン（siRNA）
50 nM siRNAと各容量（0～8 μl）の3D-Fectを用いて形成した複合体と反応させたアテロコラーゲンベースのスキャフォールドにGFP発現HeLa細胞（150,000 cells）を添加し、トランスフェクションした。トランスフェクション72時間後に明視野と蛍光像を顕微鏡を用いて撮影をした。

3D-FectINまたは他社トランスフェクション試薬を用いたHEK293T細胞の遺伝子導入効率
96ウェルプレート1ウェル当たり2 μgのRFP Plasmid DNAと8 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体を重合反応させたコラーゲン由来ハイドロゲルにHEK-293T細胞（30,000 cells/well）を添加し、トランスフェクションした。他社トランスフェクション試薬はその推奨プロトコルに基づきトランスフェクションした。トランスフェクション48時間後に蛍光発現を観察した。

3D-FectINまたは他社トランスフェクション試薬を用いたNIH-3T3細胞の遺伝子導入効率
1 μgのSEAP Plasmid DNAと3 μlの3D-FectINを用いて形成した複合体を重合反応させたコラーゲン由来ハイドロゲルに、NIH-3T3細胞を添加し、トランスフェクションした。他社トランスフェクション試薬はその推奨プロトコルに基づきトランスフェクションした。トランスフェクション4日後に培養液中に分泌されたアルカリホスファターゼの濃度を測定した。

3D-Fectまたは他社トランスフェクション試薬を用いたCOS-7細胞の遺伝子導入効率
24ウェルプレート1ウェル当たり3 μgのRFP Plasmid DNAと12 μlの3D-Fectを用いて形成した複合体と反応させたコラーゲンベース3DスキャフォールドにCOS-7細胞（1×10⁵ cells/well）を添加し、トランスフェクションした。他社トランスフェクション試薬はその推奨プロトコルに基づきトランスフェクションした。トランスフェクション48時間後にRFPの蛍光を観察した。

3D-Fectまたは他社のトランスフェクション試薬を用いたCOS-7細胞の遺伝子導入効率
24ウェルプレート1ウェル当たり3 μgのSEAP Plasmid DNAと12 μlの3D-Fectを用いて形成した複合体と反応させたコラーゲンベース3DスキャフォールドにCOS-7細胞（1×10⁵ cells/well）を添加し、トランスフェクションした。他社トランスフェクション試薬はその推奨プロトコルに基づきトランスフェクションした。トランスフェクション4日後に培養液中に分泌されたアルカリホスファターゼの濃度を測定した。