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ゲノムの修正・変異導入が可能な相同組換えシステム PiggyBac Genome Engineering HR Vector

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:7922

guide RNAによるゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

CRISPR/Cas9 を併用し,ゲノムの特定箇所の修正や,変異の導入を行うための相同組換え用ドナーベクターです。
導入したセレクションマーカーカセットは,Transposase発現ベクター( PiggyBac Transposase,#PB220PA-1)により痕跡を残さずに除去できます。

PiggyBac Transposonシステムご購入時のご注意

営利団体・企業にご所属のお客様は,本製品ご注文の前にライセンス契約を締結していただく必要があります。ご使用者のご所属によって注文方法が異なりますので,各製品の価格表に掲載の書類「PiggyBac Transposon Vector使用者確約書」をご確認ください。

LULL(Limited Use Label License for PiggyBac Vectors and Transposase)について
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詳細は当社受託・特注品担当までお問い合わせ下さい。
TEL:03-5684-1645   FAX:03-5684-6539   Mail:jutaku@funakoshi.co.jp


■PiggyBacとは
トランスポゾンを利用して,哺乳動物ゲノムに目的遺伝子を挿入する技術です。目的遺伝子を組み込んだドナーベクターと,Transposase発現ベクターを細胞にトランスフェクションするだけで,簡便に目的遺伝子を挿入可能です。また,挿入した目的遺伝子も痕跡を残さずに除去することができます。システムの詳細は,こちらをご覧下さい。

■TALE Nucleaseとは
TALE Nuclease(Transcription Activator-Like Effectors Nucleases)は,TAL EffectorsにFokⅠのヌクレアーゼドメインを融合したハイブリッド酵素で,ゲノム上の任意の配列を切断するゲノム編集ツールです。詳細は,こちらをご覧下さい。

■CRISPR-Cas9とは
標的配列を含むguide RNA (crRNA:tracrRNA) とCas9タンパク質により,ゲノム上の任意の配列を切断するゲノム編集ツールです。詳細は,こちらをご覧下さい。

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ベクターのコンストラクト

厳密なターゲティングが可能な相同組換えシステム PiggyBac Genome Engineering HR Vector

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特長

  1. ホモロジーアームに任意の変異を導入し,相同組換えを起こすことで,特定の箇所に点変異の導入や修正などが可能となります。
  2. 選択マーカー(Puro耐性および蛍光(RFPまたはGFP))により,相同組換えを起こした細胞株を選択できます。
  3. ホストゲノムに導入した選択マーカーは,Transposase発現ベクターSuper PiggyBacを発現させることにより,ほとんど痕跡を残さずに除去することができます。TTAA配列付近を変異導入のターゲットとする事で,まったく痕跡を残さず選択マーカーを除去する事ができます。
  4. マーカーの除去の際にはチミジンキナーゼを利用したセレクションが可能です。
  5. インスレーター配列により,ホストゲノムのクロマチン環境に依存せずに,選択マーカーカセット領域が安定的に発現します。

ゲノムに導入した目的遺伝子の除去には,別売品のExcision-only Super PiggyBac Transposase Expression Vector(#PB220PA-1)が必要です。

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操作方法概略

  1. 任意の5’ and 3’ HR armsをクローニングする。
  2. HR Vectorと,TALE NucleaseもしくはCas9 SmartNucleaseをトランスフェクションする。
  3. トランスフェクションが成功した細胞をGFPなどにより選択する。
  4. HR Vectorが組み込まれた細胞を,Puromycinにより選択する。
  5. 組換えが正確に行われたかどうか調べるために,junction PCRを行う。
  6. PiggyBac Transposase Expression Vectorをトランスフェクションにより導入し,発現したTransposaseによりホストゲノムに組み込まれたカセットを除去する。

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原理

厳密なターゲティングが可能な相同組換えシステム PiggyBac Genome Engineering HR Vector

Excision-only PiggyBac Transposase( #PB220PA-1)を用いたシームレスな遺伝子編集

Step 1:
Cas9 はgRNA に相補的な部分でDSB(二本鎖切断)を起こす。
※DSB はイントロン内で生じるようにする。

Step 2:
DNA 修復機構がDSB にリクルートされる。
この時,DSB の付近と相同な配列を持つHR ドナーベクターが存在すると,NHEJ(非相同末端結合)ではなくHR(相同組換え)が生じやすい。HR ドナーのホモロジーアームが相同組換えによりゲノムに組み込まれる。

Step 3:
マーカーカセットの除去
Excision-only PiggyBac Transposase が5’/3’PiggyBacTR( Terminal Repeat)の間にある配列を完全に除去する。

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価格

[在庫・価格 :2020年11月25日 14時51分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
piggyBac HR Vector (5'MCS-EF1-GFP-Puro-TK-3'MCS)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。EZ-TAL TALE Assembly KitまたはPrecisionX Cas9 SmartNuclease Systemと組み合わせて使用することにより,ゲノム内に変異の修正や変異の導入を行なうことができる。一旦ゲノムに組み込んだセレクション用のマーカー遺伝子は,PiggyBac Transposaseにより痕跡を残さず除去することが可能。 ※営利団体・企業(Commercial)にご所属のお客様は,コマーシャルライセンス契約が必要です。
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年5月15日号 p.28

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piggyBac HR Vector (5'MCS-EF1-GFP-Puro-TK-3'MCS)

文献数:0

説明文 切断部位におけるHomologous Recombinationを行うためのドナーベクターが作製できます。EZ-TAL TALE Assembly KitまたはPrecisionX Cas9 SmartNuclease Systemと組み合わせて使用することにより,ゲノム内に変異の修正や変異の導入を行なうことができる。一旦ゲノムに組み込んだセレクション用のマーカー遺伝子は,PiggyBac Transposaseにより痕跡を残さず除去することが可能。 ※営利団体・企業(Commercial)にご所属のお客様は,コマーシャルライセンス契約が必要です。
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年5月15日号 p.28

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Transposase発現ベクター

ゲノムに導入した目的遺伝子の除去に必要となります。
Transposase発現ベクターは使いきり製品となり,バクテリアでの複製は行えません。予めご了承下さい。

営利団体・企業(Commercial Entity)にご所属のお客様が一定期間を越えてPiggyBac Systemを使用される場合,ライセンス契約が必要です。

厳密なターゲティングが可能な相同組換えシステム PiggyBac Genome Engineering HR Vector

[在庫・価格 :2020年11月25日 14時51分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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  • メーカー
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  • 法規制等
納期 文献数
Excision only PiggyBac Transposase Expression Vector, 50 Reactions
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
※営利団体・企業(Commercial)にご所属のお客様は,コマーシャルライセンス契約が必要です。
法規制等
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掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.30
ニュース2019年5月15日号 p.28

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[在庫・価格 :2020年11月25日 14時51分現在]

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Excision only PiggyBac Transposase Expression Vector, 50 Reactions

文献数:0

説明文 ※営利団体・企業(Commercial)にご所属のお客様は,コマーシャルライセンス契約が必要です。
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.30
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詳細 商品名
  • 商品コード
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納期 文献数
Cold Fusion Cloning Kit (10reactions)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
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法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
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法規制等
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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