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トランスポゾンによりゲノムへの組み込み・除去が可能な発現システム PiggyBac Transposon Vector System

掲載日情報:2018/11/15 現在Webページ番号:5301

トランスポゾンを用いて非ウイルス的に,目的cDNA・miRNA・shRNA配列を宿主細胞のゲノムに組み込み,安定発現細胞株を樹立することができる発現システムです。また,一旦ゲノムに組み込んだ目的配列を,Excision only PiggyBac Transposaseにより痕跡を残さずに除去することができます。

特長

  • 一度のトランスフェクションで,安定発現細胞株の樹立が可能です。
  • ヒト・マウス・ラット由来細胞で使用できます。
  • 10~100 kbの配列も導入可能です。
  • 複数のベクターを同時に組み込むことも可能です(図2参照)。
  • cDNA・miRNAの誘導発現が可能なCumate Switchベクターもあります(図3参照)。
  • ゲノムに組み込んだ目的配列は,Excision only PiggyBac Transposaseにより高効率に痕跡を残さずに除去することができます(図4参照)。
  • 高効率での遺伝子導入,iPS細胞の樹立,可逆的な遺伝子改変などに有用です。

ゲノムへの組み込みには,目的配列を発現させるためのPiggyBac vectorの他に,別途transposase vector(#PB210PA-1,下記参照)が必要です。
営利団体・企業(Commercial Entity)にご所属のお客様が一定期間を越えてPiggyBac Systemを使用される場合,ライセンス契約が必要です。

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原理

1. 目的cDNA配列などを挿入したPiggyBac Transposon Vectorと,Super PiggyBac Transposase Expression Vectorを宿主細胞にコトランスフェクションする。
2. Super PiggyBac Transposase Expression Vectorから発現したPiggyBac Transposaseにより,PiggyBac Transposon Vector中の両端に存在するトランスポゾン特異性末端逆位配列(PiggyBac Terminal Repeat)の部分で配列が切り出される。
3. 切り出された配列が,宿主細胞ゲノム中のTTAA部位に組み込まれ,安定発現細胞株が樹立される。
4. 安定発現細胞株にExcision only PiggyBac Transposase Expression Vectorのみを再度トランスフェクションすると,発現したTransposaseにより,組み込んだ目的配列が痕跡を残さずに除去される。

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使用例


図1:1つのベクターを組み込んだ例
PiggyBac Dual Promoter Vector(#PB513B-1)と,Super PiggyBac Transposase Expression VectorをHeLa細胞にコトランスフェクションし,ピューロマイシンで選択した。GFPを発現する細胞株が得られた。

図2:2つのベクターを同時に組み込んだ例
PiggyBac Dual Promoter Vector(#PB513B-1),PiggyBac Single Promoter Vector(#PB531A-2)とSuper PiggyBac Transposase Expression Vectorを293細胞にコトランスフェクションし,ピューロマイシンで選択した。GFPおよびRFPを発現する細胞が得られた。

図3:Cumate誘導発現ベクターの使用例
PiggyBac Cumate Switch Inducible Vector(#PBQM812A-1)とSuper PiggyBac Transposase Expression Vectorを細胞にコトランスフェクションし,ピューロマイシンで選択した。樹立した細胞株にCumateを添加してGFPを誘導発現した。

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cDNA・miRNA恒常発現用ベクター


プロモーター 目的遺伝子の発現 マーカーの発現 マーカー 商品コード
シングル EF1α (IRES) GFP PB530A-2
RFP PB531A-2
Neo PB533A-2
デュアル CMV EF1α Puro PB510B-1
GFP PB511B-1
RFP PB512B-1
GFP+Puro PB513B-1
RFP+Puro PB514B-2
MSCV EF1α GFP+Puro PB713B-1

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ウェビナー

Powerful PiggyBac:Application for Genome Engineering and Inducible Expression

ウェビナー「Powerful PiggyBac:Application for Genome Engineering and Inducible Expression」

PiggyBacシステムの解説,ゲノム編集や誘導発現への応用,およびこれらアプリケーションでの実施例が紹介されたWebinarです。(解説約30分,質疑応答約10分)
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cDNA/miRNA 恒常発現ベクターの価格

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cDNA・miRNA誘導発現用ベクター

発現誘導物質Cumateの添加により,cDNAまたはmiRNAを厳密に誘導発現できるベクターです。非誘導時のバックグラウンド発現が低く抑えられています。本製品ではひとつのベクターで,目的誘導遺伝子とCymRリプレッサーを共発現します。
Cumate Switch Systemの原理については,フナコシホームページをご覧下さい。

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Cumate Solution, 10000×

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shRNA発現用ベクター

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PB-CMV-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector
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PB-CMV-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector

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PB-EF1-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector

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Transposase発現ベクター

Transposase発現ベクターは使い切り製品となり,バクテリアでの複製は行えません。予めご了承下さい。

ゲノムへの組み込み・除去が可能な発現システム PiggyBac Transposon Vector System

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Super PiggyBac Transposase Expression Vector(replaces PB200PA-1), 50 Reactions
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Super PiggyBac Transposase Expression Vector(replaces PB200PA-1), 50 Reactions

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  • 商品コード:PB220PA-1
  • メーカー:SBI
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