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トランスポゾンによりゲノムへの組み込み・除去が可能な発現システム PiggyBac Transposon Vector System

掲載日情報:2018/11/15 現在Webページ番号:5301

トランスポゾンを用いて非ウイルス的に,目的cDNA・miRNA・shRNA配列を宿主細胞のゲノムに組み込み,安定発現細胞株を樹立することができる発現システムです。また,一旦ゲノムに組み込んだ目的配列を,Excision only PiggyBac Transposaseにより痕跡を残さずに除去することができます。

PiggyBac Transposonシステムご購入時のご注意

営利団体・企業にご所属のお客様は,本製品ご注文の前にライセンス契約を締結していただく必要があります。ご使用者のご所属によって注文方法が異なりますので,各製品の価格表に掲載の書類「PiggyBac Transposon Vector使用者確約書」をご確認ください。

LULL(Limited Use Label License for PiggyBac Vectors and Transposase)について
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詳細は当社受託・特注品担当までお問い合わせ下さい。
TEL:03-5684-1645   FAX:03-5684-6539   Mail:jutaku@funakoshi.co.jp

特長

  • 一度のトランスフェクションで,安定発現細胞株の樹立が可能です。
  • ヒト・マウス・ラット由来細胞で使用できます。
  • 10~100 kbの配列も導入可能です。
  • 複数のベクターを同時に組み込むことも可能です(図2参照)。
  • cDNA・miRNAの誘導発現が可能なCumate Switchベクターもあります(図3参照)。
  • ゲノムに組み込んだ目的配列は,Excision only PiggyBac Transposaseにより高効率に痕跡を残さずに除去することができます(図4参照)。
  • 高効率での遺伝子導入,iPS細胞の樹立,可逆的な遺伝子改変などに有用です。

ゲノムへの組み込みには,目的配列を発現させるためのPiggyBac vectorの他に,別途transposase vector(#PB210PA-1,下記参照)が必要です。
営利団体・企業(Commercial Entity)にご所属のお客様が一定期間を越えてPiggyBac Systemを使用される場合,ライセンス契約が必要です。

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原理

1. 目的cDNA配列などを挿入したPiggyBac Transposon Vectorと,Super PiggyBac Transposase Expression Vectorを宿主細胞にコトランスフェクションする。
2. Super PiggyBac Transposase Expression Vectorから発現したPiggyBac Transposaseにより,PiggyBac Transposon Vector中の両端に存在するトランスポゾン特異性末端逆位配列(PiggyBac Terminal Repeat)の部分で配列が切り出される。
3. 切り出された配列が,宿主細胞ゲノム中のTTAA部位に組み込まれ,安定発現細胞株が樹立される。
4. 安定発現細胞株にExcision only PiggyBac Transposase Expression Vectorのみを再度トランスフェクションすると,発現したTransposaseにより,組み込んだ目的配列が痕跡を残さずに除去される。

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使用例


図1:1つのベクターを組み込んだ例
PiggyBac Dual Promoter Vector(#PB513B-1)と,Super PiggyBac Transposase Expression VectorをHeLa細胞にコトランスフェクションし,ピューロマイシンで選択した。GFPを発現する細胞株が得られた。

図2:2つのベクターを同時に組み込んだ例
PiggyBac Dual Promoter Vector(#PB513B-1),PiggyBac Single Promoter Vector(#PB531A-2)とSuper PiggyBac Transposase Expression Vectorを293細胞にコトランスフェクションし,ピューロマイシンで選択した。GFPおよびRFPを発現する細胞が得られた。

図3:Cumate誘導発現ベクターの使用例
PiggyBac Cumate Switch Inducible Vector(#PBQM812A-1)とSuper PiggyBac Transposase Expression Vectorを細胞にコトランスフェクションし,ピューロマイシンで選択した。樹立した細胞株にCumateを添加してGFPを誘導発現した。

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cDNA・miRNA恒常発現用ベクター


プロモーター 目的遺伝子の発現 マーカーの発現 マーカー 商品コード
シングル EF1α (IRES) GFP PB530A-2
RFP PB531A-2
Neo PB533A-2
デュアル CMV EF1α Puro PB510B-1
GFP PB511B-1
RFP PB512B-1
GFP+Puro PB513B-1
RFP+Puro PB514B-2
MSCV EF1α GFP+Puro PB713B-1

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ウェビナー

Powerful PiggyBac:Application for Genome Engineering and Inducible Expression

ウェビナー「Powerful PiggyBac:Application for Genome Engineering and Inducible Expression」

PiggyBacシステムの解説,ゲノム編集や誘導発現への応用,およびこれらアプリケーションでの実施例が紹介されたWebinarです。(解説約30分,質疑応答約10分)
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cDNA/miRNA 恒常発現ベクターの価格

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PB-EF1-MCS-IRES-GFP cDNA Cloning and Expression Vector

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PB-CMV-MCS-EF1-GFP cDNA Cloning and Expression Vector

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PB-CMV-MCS-EF1-RFP cDNA Cloning and Expression Vector

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cDNA・miRNA誘導発現用ベクター

発現誘導物質Cumateの添加により,cDNAまたはmiRNAを厳密に誘導発現できるベクターです。非誘導時のバックグラウンド発現が低く抑えられています。本製品ではひとつのベクターで,目的誘導遺伝子とCymRリプレッサーを共発現します。
Cumate Switch Systemの原理については,フナコシホームページをご覧下さい。

[在庫・価格 :2020年11月24日 13時51分現在]

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PB-Cuo-MCS-IRES-GFP-EF1-CymR-Puro Inducible cDNA Cloning and Expression Vector
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Cumate Solution, 10000×
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[在庫・価格 :2020年11月24日 13時51分現在]

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PB-Cuo-MCS-IRES-GFP-EF1-CymR-Puro Inducible cDNA Cloning and Expression Vector

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Cumate Solution, 10000×

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shRNA発現用ベクター

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PB-CMV-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector
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PB-EF1-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector
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PB-CMV-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector

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PB-EF1-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector

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Transposase発現ベクター

Transposase発現ベクターは使い切り製品となり,バクテリアでの複製は行えません。予めご了承下さい。

ゲノムへの組み込み・除去が可能な発現システム PiggyBac Transposon Vector System

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Super PiggyBac Transposase Expression Vector(replaces PB200PA-1), 50 Reactions
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ニュース2017年6月15日号 p.18

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Excision only PiggyBac Transposase Expression Vector, 50 Reactions
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ニュース2019年5月15日号 p.28

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Super PiggyBac Transposase Expression Vector(replaces PB200PA-1), 50 Reactions

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ニュース2017年6月15日号 p.18

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(テクニカルサポート 試薬担当)

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