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T細胞の動態解析用製品 T Cell Immunology Research Tools

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:6752

制御性T細胞とTh17細胞に特異的な因子の動態を解析する製品です。自己免疫疾患、炎症、がんなどにおける、これらの細胞の動態研究に有用です。

本製品で使用しているウイルスベクターには、欠損し機能を有しないものの、構造遺伝子のgagとenvの一部が含まれています。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


制御性T細胞とTh17細胞について

制御性T(Treg)細胞とTh17細胞は、いずれもCD4リンパ球のサブタイプで、対立する機能を有しています。これらの細胞のバランスが、自己免疫疾患および炎症の発症に関与しています。

Treg細胞ではForkhead box P3 transcription factor(Foxp3、別名scufin)が特異的に発現しており、T細胞の分化がTreg細胞にシフトした場合、免疫寛容が支配的になります。

一方、Th17細胞ではRAR-related orphan receptorγt(RORγt)とIL-17が特異的に発現しており、T細胞の分化がTh17細胞にシフトした場合、炎症が生じます。


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T細胞関連因子発現用ベクター

Foxp3およびRORγtの発現ベクターです。安定発現細胞株を樹立することも可能です。

また、これらのタンパク質を安定的に発現するJurkat細胞株の製品もあります。


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特長

  • Foxp3やRORγtの安定性および、アセチル化・メチル化・リン酸化・ユビキチン化など翻訳後修飾の解析に有用です。
  • これらのタンパク質の安定発現細胞株を樹立するために、レンチウイルスベクターおよびトランスポゾンを用いて宿主ゲノムに組み込むPiggyBacシステムを採用した製品があります(ヒト用、マウス用)。また、誘導発現細胞株を樹立するために、Cumate Switchシステムを採用した製品があります(マウス用のみ)。
  • ウエスタンブロッティングのほか、ベクターに組み込まれたGFPの蛍光を利用してフローサイトメトリーや蛍光顕微鏡で解析できます。

レンチウイルスベクター製品は、プラスミドDNAとして供給されます。組換え体ウイルスを作製する際は、pPACK Lentivector Packaging Kit(#LV100A-1(FIV用)、#LV500A-1(HIV用):参照)を併せてご使用下さい。
PiggyBacシステム製品は、Transposase発現ベクター(Super PiggyBac Transposase Expression Vector:#PB210PA-1)が別途必要です。詳細はこちらのページをご覧下さい。
Cumate Switchシステムは、目的遺伝子を誘導発現する際にCumate(# PBQM100A-1)を添加します。システムの原理についてはこちらのページをご覧下さい。

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Foxp3の恒常発現用製品

Foxp3をレンチウイルスベクター Foxp3をPiggyBacシステムベクター

ヒトおよびマウスのFoxp3をJurkat細胞に導入し、ウエスタンブロッティングで確認した。
1. ヒトFoxp3をレンチウイルスベクター(#TCL200A-1)で導入
2. マウスFoxp3をレンチウイルスベクター(#TCL100A-1)で導入
3. ヒトFoxp3をPiggyBacシステム(#TCL200PB-1)で導入
4. マウスFoxp3をPiggyBacシステム(#TCL100PB-1)で導入
5. 未導入(ネガティブコントロール)

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Foxp3の誘導発現用製品

CuO-Mouse Foxp3-IRES-GFP-EF1-CymR-T2A-Puro Cumate inducible lentivector plasmid #TCL500A-1を用いたウエスタンブロッティングおよびGFPの蛍光

マウスのFoxp3を#TCL500A-1を用いて細胞に導入し、ウエスタンブロッティングおよびGFPの蛍光で確認した。

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RORγtの恒常発現用製品

RORγtをレンチウイルスベクター RORγt導入Jurkat細胞のウエスタンブロッティング

マウスのRORγtをJurkat細胞に導入し、ウエスタンブロッティングで確認した。
1. マウスRORγtをレンチウイルスベクター(#TCL300A-1)で導入
2. マウスRORγtをPiggyBacシステム(#TCL300PB-1)で導入
3. 未導入(ネガティブコントロール)


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恒常発現用レンチウイルスベクター

[在庫・価格 :2024年04月25日 14時55分現在]

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誘導発現用レンチウイルスベクター

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CuO-Mouse Foxp3-IRES-GFP-EF1-CymR-T2A-Puro Cumate inducible lentivector plasmid
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CuO-Mouse Foxp3-IRES-GFP-EF1-CymR-T2A-Puro Cumate inducible lentivector plasmid

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恒常発現用PiggyBacシステム

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Foxp3/RORγt安定発現細胞株

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T細胞関連因子解析用レポーターベクター

マウスのFoxp3、IL-17およびRORγtのプロモーターの下流にGFPとルシフェラーゼの遺伝子を組み込んだベクターです。

特長

  • GFPの蛍光により、生細胞におけるFoxp3、IL-17およびRORγt転写活性化を検出可能です。また、ルシフェラーゼアッセイにより転写活性化レベルを定量的に評価することもできます。
  • 前駆体細胞からTregおよびTh17細胞への分化のモニタリングにも有用です。
  • 各因子のプロモーター領域は、下記の文献を参照してデザインされています。

参考文献

Foxp3プロモーター:
Tone, M., et al., Nat. Immunol., 12 (1), 14~16 (2011).
Zheng, Y., et al., Nature, 463 (7282), 808~812 (2010).
Burgler, S., et al., J. Immunol., 184 (11), 6161~6169 (2010).
RORγtプロモーター:
Dang, E. V., et al., Cell, 146 (5), 772~784 (2011).
Lazarevic, V., et al., Nat. Immunol., 12 (1), 96~104 (2011).
Ruan, Q., et al., J. Exp. Med., 208 (11), 2321~2333 (2011).
IL-17プロモーター:
Zhang, F., et al., Nat. Immunol., 9 (11), 1298~1306 (2008).

製品は、プラスミドDNAとして供給されます。組換え体ウイルスを作製する際は、pPACK Lentivector Packaging Kit(#LV100A-1(FIV用)、#LV500A-1(HIV用))を併せてご使用下さい。詳細は、「pPACK Lentivector Packaging Kit」をご覧下さい。

レポーターベクターを導入したJurkat T細胞 Jurkat T細胞PMA / Ionomycinで処理ルシフェラーゼ活性

各種レポーターベクターを導入したJurkat T細胞について、PMA / Ionomycinで処理した場合と未処理の場合のルシフェラーゼ活性を測定した。


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RORγt Promoter, Mouse, Lentivector, Plasmid, pGreenFire, with Puro Marker
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(テクニカルサポート 試薬担当)

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