iPS細胞の3D培養をゼノフリー条件で効率化 RocketCell 3D iPSC Xeno-Free Complete Growth Kit

RocketCell 3D iPSC Xeno-Free Complete Growth Kitは、ヒトiPS細胞およびヒトES細胞などの多能性幹細胞を、ゼノフリー条件で三次元（3D）培養・増殖するためのオールインワンキットです。キットには3D培養用ハイドロゲル（VitroGel STEM）、専用培地、サプリメント、細胞生存性向上試薬を含み、マトリックス、培地、添加試薬を個別に準備する手間を抑えて、iPS細胞の3D培養を効率よく開始できます。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

二次元（2D）培養したiPS細胞をPBS/EDTAまたはAccutaseで処理し、細胞懸濁液を回収・遠心する。得られた細胞ペレットを、RocketCell Cell viability enhancerを添加したRocketCell 3D iPSC Xeno-free suspension mediumに再懸濁し、ハイドロゲル（VitroGel STEM）と1：2の比率で穏やかに混合して培養容器に播種する。15分間静置後、RocketCell Cell viability enhancerを含む完全培地を静かに重層し、三次元（3D）培養を開始する。

3D培養したiPS細胞由来スフェロイドをVitroGel Cell / VitroGel Organoid Recovery Solutionで処理し、必要に応じてAccumaxなどで解離する。回収後、RocketCell Cell viability enhancerを添加したRocketCell 3D iPSC Xeno-free suspension mediumに再懸濁し、VitroGel STEMと混合して新しいウェルに播種する。

二次元（2D）培養細胞から播種したヒトiPS細胞を、本キットを用いて三次元（3D）培養した。
A. 典型的なタイムラプス画像では、単一細胞または小さな細胞塊から、均一な3Dスフェロイドへ移行する様子が確認された。スフェロイドは一貫した形態を示し、数日間の培養後には直径約85～100 μmに達した。
B. スフェロイド増殖の定量解析では、総スフェロイド面積が経時的に増加し、6.5日後には平均で約300％まで拡大した。この結果から、本キットにより、ゼノフリー条件下で安定したヒトiPS細胞の3D増殖が可能であることが示された。

ハイドロゲル（VitroGel STEM）中で培養したiPS細胞について、Alamar Blueを用いた代謝活性測定（左図）と、自動セルカウントによる細胞数測定（右図）を比較した。Alamar Blue吸光度測定では、三次元（3D）培養したiPS細胞の代謝活性が培養期間中に経時的に増加し、細胞増殖および生存性が維持されていることが示された。細胞数測定においても、iPS細胞由来スフェロイドの安定した増殖が確認された。
これらの結果から、VitroGel STEM中に包埋されたiPS細胞の増殖評価には、従来の細胞数測定に加え、Alamar Blueなどの代謝活性アッセイも使用できることが示された。なお、iPS細胞株によって3D環境への応答は異なる場合があり、Alamar Blueアッセイでは高増殖時にシグナルが飽和する可能性がある。

本キットを用いて、二次元（2D）培養細胞から調製したヒトiPS細胞（HFF-1VL）を24ウェルタイプのVitroPrime 3D Culture and Imaging Plateに播種し、7日間培養した。
A. 培養後、PE-Alexa594標識抗EpCAM抗体を用いて生細胞の細胞表面免疫蛍光染色を行い、Leica MICA共焦点顕微鏡で観察した。
B. 取得したZスタック画像を3D再構成したところ、深さ300 μm、約800×900 μmの視野において、VitroGel STEM中で形成されたiPS細胞由来スフェロイドの3D構造が確認された。

本キットを用いて、iPS細胞を24ウェルタイプのVitroPrime 3D Culture and Imaging Plateで7日間培養した。培養後、細胞を固定し、多能性マーカーであるTra-1-60、Lin28およびOct4を、それぞれAlexa Fluor標識二次抗体を用いて免疫蛍光染色し、Leica MICA共焦点顕微鏡で観察した。
その結果、VitroGel STEM中で3D培養したiPS細胞において多能性マーカーの発現が確認され、本キットが、多能性の維持に適した三次元（3D）培養環境を提供することが示された。

本キットを用いたゼノフリー条件下でのiPS細胞の三次元（3D）培養ワークフローを紹介するオンデマンドウェビナーです。二次元（2D）培養から3D培養への移行方法、3D培養下での多能性維持、長期生存性、スケールアップ、免疫染色および高解像度3Dイメージングへの応用について解説しています。

三次元（3D）ハイドロゲル培養から高解像度イメージングまでを1枚で行える培養・観察用プレートです。RocketCell 3D iPSC Xeno-Free Complete Growth Kitを用いたiPS細胞の三次元（3D）培養および免疫蛍光観察に適しています。
詳細は、VitroPrime 3D Culture and Imaging Plateの製品ページをご覧下さい。

ハイドロゲル（VitroGel STEM）中で培養した細胞やオルガノイドの回収に使用できます。三次元（3D）培養後の継代、解析、下流アプリケーションに適しています。
詳細は、VitroGel Organoid / VitroGel Cell Recovery Solutionの製品ページをご覧下さい。

三次元（3D）培養細胞および二次元（2D）培養細胞の生死判定に使用できるライブ／デッドアッセイキットです。ハイドロゲル（VitroGel STEM）などで培養した幹細胞スフェロイドの細胞生存性評価にも使用できます。
詳細は、Cyto3D Live-Dead Assay Kitの製品ページをご覧下さい。

ヒトiPS細胞などの多能性幹細胞の増殖・維持に使用できる、ゼノフリーかつ化学的組成が明らかな培地です。二次元（2D）培養に加え、三次元（3D）培養系にも使用できます。RocketCell 3D iPSC Xeno-Free Complete Growth Kitを用いた3D培養ワークフローと併せて使用することで、ゼノフリー条件下でのiPS細胞培養系の構築をサポートします。

■ キット内容

■ 価格