3D培養から高解像度イメージングまで、試料を乱さず1枚で VitroPrime 3D Culture and Imaging Plate

三次元（3D）ハイドロゲル培養から高解像度イメージングまでを、1枚で効率よく完結できる培養・観察用プレートです。ゲルの浮遊や回転を抑える独自構造、試料を乱しにくい側方培地交換チャンネル、さらに#1.5（0.17 mm）の超高透明カバーガラス底面により、3D試料を守りながら、培養・処理・観察の各工程で高い再現性と作業性を実現します。試料のロスを最小限に抑え、ワークフローを簡略化し、高品質なイメージングを支えます。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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iPS細胞は、Accutaseを用いて二次元（2D）培養から回収し、推奨条件に従って96ウェルタイプの本製品に1ウェルあたり20 μl、20,000 cells/wellで播種した。5日間培養後、Keyence社製BZXイメージングシステムを用い、1.5 mm厚のハイドロゲル全層に対してZスタック撮影を行った。透過光による明視野像と反射光によるmRFP蛍光像をフルフォーカスアルゴリズムで合成し、Z軸方向に表示した結果、傾斜した保持リム下の細胞もウェル中央部と同様に良好な増殖を示した。

本製品を用いることで、肝オルガノイド培養を30日以上にわたり安定して追跡することができた。A～Eは、VitroGel ORGANOID-5中で96ウェルの本製品上に培養した肝オルガノイドの32日間の増殖を示している。32日間の観察期間を通してハイドロゲルの浮遊や回転は認められず、長期観察に適した高い安定性が確認された。

iPS細胞（100,000 cells/well）は、24ウェルタイプの本製品上で7日間培養した後、固定し、Lin28（Alexa Fluor 488）、Podocalyxin（Alexa Fluor 594）、Nanog（Alexa Fluor 647）を未分化マーカーとして直接免疫蛍光染色を行った。観察にはLeica Mica共焦点顕微鏡を使用した。その結果、RocketCell 3D iPSC Xeno-Free Complete Growth Kit（#RC02-CGK）が、多能性幹細胞の維持に適した三次元培養環境を提供すること、また直接標識抗体の使用により、ハイドロゲル培養試料の処理をより迅速かつ効率的に進められることが確認された。

96ウェルタイプの本製品内で培養・染色したiPS細胞由来腸管オルガノイド染色画像を示す。iPS細胞はVitroGel STEM中でスフェロイド形成まで培養した後、CytoGrow Growth FactorsおよびRocketCell Xeno-free Mediaを用いて腸管オルガノイドへ分化誘導し、VitroGel ORGANOID中で本製品内にて培養した。成熟後は、培養を乱すことなくプレート内で固定・染色し、Leica Mica共焦点顕微鏡で観察した。
（A）DAPIによる細胞核、（B）PhalloidinよるF-actin、（C）Villinタンパク質、（D）マージ画像。

本製品とOTO社のOpentrons Flexを組み合わせることで、培地交換や各種試薬の添加などの液体ハンドリング工程の自動化が可能です。