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4種類の活性酸素種（ROS）それぞれの抗酸化能を評価できます Antioxidant Capacity Assay Kit シリーズ

掲載日情報：2021/08/11 現在Webページ番号：69759

サクラボサイエンス /
株式会社サクラボサイエンス
[メーカー略称：SKL]

「一重項酸素」「スーパーオキシド」「過酸化水素」「ヒドロキシラジカル」の4種類の活性酸素種をそれぞれ検出するキットです。
試料の抗酸化能の測定や抗酸化作用物質のスクリーニングに有用です。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Antioxidant Capacity Assay Kitのキットコンポーネント

図1. Antioxidant Capacity Assay Kitの
キットコンポーネント例

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特長

  • 化学発光による測定のため、試料の色や蛍光の影響を受けにくくなっています。
  • 試薬は着色されており、試薬添加の有無を目視で確認できます。
  • 測定試料：化合物、血清、血漿、細胞抽出物、組織抽出物（動植物）
  • 測定時間：0.5～1時間

＊ 測定には化学発光を検出できるマイクロプレートリーダーが必要です。

着色試薬による添加ミス防止

図2. 着色試薬による添加ミスの防止（#SL-2020を使用した例）
化学発光測定用のホワイトプレートでは試薬が無色透明の場合、添加ミスが生じる可能性がある。本キットではミスを防ぐために試薬を着色しているために操作ミスを防ぐことができる。

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活性酸素とは

(クリックで開閉します)

活性酸素は狭義的に「一重項酸素」「スーパーオキシド」「過酸化水素」「ヒドロキシラジカル」の4種類からなる酸化力の強い活性酸素種（Reactive Oxygen Species：ROS）で生体内において能動的および受動的に産生されています（図3）。その特性から免疫系において細菌やウイルスなどの外敵を破壊するために能動的に産生されます。また、シグナル因子としても機能することが知られています。一方、紫外線暴露や酸素呼吸の場であるミトコンドリアでは副産物として活性酸素が発生します。しかし、能動的・受動的問わず過剰な活性酸素は生命体自身に損傷を与え、がんや生活習慣病、老化の原因となることから抗酸化酵素や抗酸化物質により速やかに消去されバランスを保つ必要があります。

生体における活性酸素の発生過程

図3. 生体における活性酸素の発生過程



各活性酸素種の性質はそれぞれ異なり「一重項酸素」および「ヒドロキシラジカル」は不安定なものの反応性が高く細胞内では酸化損傷の主要因です。一方、「スーパーオキシド」および「過酸化水素」は反応性は低いものの安定性は高いことから生体内では長時間留まり、金属イオンや紫外線刺激により「ヒドロキシラジカル」生成の原因となっています（表1）。生体での発生組織はさまざまで「一重項酸素」は主に光の関与する皮膚で、他の活性酸素種は呼吸や代謝、炎症過程で発生します。
サクラボサイエンス社では、試料の活性酸素種に対する特異的消去能を評価するために4種の活性酸素種を検出するキットをご用意しています。


表1. 各活性酸素種の特徴

活性酵素種安定性反応性生体での主な発生源
一重項酸素不安定高い光／紫外線（皮膚）
スーパーオキシド安定低い酸素呼吸、炎症、代謝
過酸化水素非常に安定低い炎症、代謝
ヒドロキシラジカル非常に不安定極めて高い光／紫外線、酸素呼吸、炎症、代謝

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測定原理

Antioxidant Capacity Assay Kitの測定原理

図4. Antioxidant Capacity Assay Kitの測定原理



反応系中で対象とする活性酸素を発生させます。発生した活性酸素は検証する試料の抗酸化能によって消去されます。その後、対象とする活性酸素を特異的に検出する化学発光プローブと反応させることで短時間で高感度に活性酸素残量を測定することができます。


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操作方法概略

4ステップ（一重項酸素測定キットは5ステップ）で測定できます。試料と活性酸素溶液（ROS solution）を反応後にそれぞれの活性酸素種特異的に反応する化学発光プローブ（Detection solution）を用いて残存する活性酸素を検出することで抗酸化能を評価します。



Antioxidant Capacity Assay Kitの測定方法概略

図5. Antioxidant Capacity Assay Kitの測定方法概略

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使用例

抗酸化能の評価

抗酸化能の評価として試料の活性酸素消去率やIC50値（50%阻害（消去）濃度）を算出する方法、抗酸化標準物質である没食子酸（Gallic acid）を用いた没食子酸等価活性値（Gallic acid equivalent antioxidant capacity: GAEAC）、Troloxを用いたトロロックス等価活性値（Trolox equivalent antioxidant capacity: TEAC ）を算出する方法があります（詳細はデータシートをご覧下さい）。

表2. 各キットを用いて測定した代表的抗酸化物質の活性酵素に対するIC50値

抗酸化酵素・物質一重項酸素スーパーオキシド過酸化水素ヒドロキシラジカル
Catalase（過酸化水素特異的）N.D.N.D.30 ng/mLN.D.
SOD（・O2-特異的）N.D.100 ng/mLN.D.N.D.
Trolox600μM130μM3μM5μM
Glutathione50μM10 mM1μM10μM
N-Acetyl-L-Cysteine220μMN.D.2μM150μM
Ascorbic acid200μM170μM5μM5μM
α-Lipoic acid2μMN.D.100μM300μM
Gallic acid950μM30μM1μM3μM
Chlorogenic acid650μM1.5 mM1μM1μM

表3. 各キットを用いて測定した代表的抗酸化物質の活性酵素に対するIC50値

GAEAC（μmol GAE / mg protein）
一重項酸素スーパーオキシド過酸化水素ヒドロキシラジカル
ミカン抽出液6.251.20.10.75
ニンジン抽出液1.970.860.010.01
緑茶抽出液3.951.50.130.1
サケ抽出液10.7130.030.004
トマト抽出液0.630.10.010.01
TEAC（μmol TE / mg protein）
一重項酸素スーパーオキシド過酸化水素ヒドロキシラジカル
ミカン抽出液55.20.31.25
ニンジン抽出液1.583.710.030.01
緑茶抽出液3.166.50.380.17
サケ抽出液8.57130.10.01
トマト抽出液0.50.430.030.02


表2および表3に示すように同じ抗酸化物質や抽出物であっても活性酸素種によって消去能は異なる。


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従来法との比較

本キットは従来の活性酸素測定法と比較してESR装置のような高価な機器を必要とせず、マイクロプレートリーダーで抗酸化能が検証ができます。また、危険物質を使用していないため安全に測定することができます。さらに化学発光による測定のため、試料の色や蛍光の影響を受けにくいのが特長です（表4）。

表4. 従来法と本キットの比較

従来法難点本キット
活性酵素種全般スピントラップ法ESR装置が必要発光測定機器
一重項酸素SOAC法溶媒としてクロロホルム使用クロロホルム未使用
スーパーオキシド発色法試料色が影響試料色の影響を受けにくい
過酸化水素発色法
ヒドロキシラジカルHORAC法

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