Ribo-Seqに適した活性型リボソームを分離・ライブラリー調製するキット RiboLace
掲載日情報：2019/09/30 現在Webページ番号：68814
リボソームの機能解析法であるリボソームプロファイリング（Ribo-Seq）用の試料分離・ライブラリー調製キットです。リボソームに結合して翻訳を阻害する独自のピューロマイシン含有分子が結合した磁性ビーズによるプルダウン法を用いて，抗体やタグ配列を用いずに活性型リボソームのみを分離できます*1。
RPF(Ribosome protected fragment)分離用のRiboLace Ribo-Seq - Module 1（#RL001_mod1）と，分離したRPFからのIlluminaライブラリー調製用のRiboLace Ribo-Seq -Module 2（#RL001_mod2）があります。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
※ チューブ用マグネットスタンドや各種酵素類は，キットに含まれていません。製品マニュアルをご確認の上，別途ご用意下さい。
*1 参考文献：Clamer, et al., "Active Ribosome Profiling with RiboLace.", Cell Rep., 25(4):1097～1108.e5(2018). [PMID:30355487]
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特長
- in vitro，in vivoのいずれでも少量の試料から迅速かつ確実に調製できます。
- 活性型リボソーム中でのmRNAの位置情報をヌクレオチドレベルの解像度で得られます。
- 正確に翻訳レベルを推定し，それによりタンパク質量を予測できます。
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操作方法概略
RiboLace Ribo-Seq - Module 1（#RL001_mod1）
- RiboLaceを結合させる際に，mRNA上のリボソームをブロックし，またリボソームの分離を弱めるためにcycloheximide*2で処理した後，Lysis bufferで細胞を溶解する。
- RiboLace magnetic beadsを準備する（Beads Functionalization）。
- RNaseⅠ（Nux solution）でmRNAのリボソーム未結合部分を分解する。
- RNase阻害物質*2を加えて分解反応を停止後，2で用意したRiboLaceを加えて穏やかに撹拌しながらインキュベートする。
- 1.5 mlチューブ用マグネットスタンド *2でビーズを分離し，洗浄する。
- SDS 10％とProteinase Kを加えてインキュベートする。
- 酸性フェノール：クロロホルムによりRNA（RPF）を抽出する。
*2 キットに含まれていません。別途ご用意下さい。
RiboLace Ribo-Seq - Module 2（#RL001_mod2）
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1. RPFのPAGE精製を行う。 |
| 2. T4 PNKによりRPF脱リン酸化を行う。 | |
| 3. アダプターのライゲーションを行う。 | |
4. ライゲーション産物のPAGE精製を行う。 |
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| 5. 逆転写を行う。 | |
6. 合成したcDNAのPAGE精製を行う。 |
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| 7. cDNAの環状化を行う。 | |
| 8. PCRライブラリー増幅を行う。 | |
9. 構築したライブラリーのPAGE精製を行う。 |
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Memo：Immagina BioTechnology社のリボソーム解析用製品群について
※ AHARIBO RNA Kit / AHARIBO Protein KitおよびCircAID-p-seq Kitの詳細については，それぞれ該当のページをご覧下さい。
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関連した特集記事
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キット内容
■RiboLace Ribo-Seq - Module 1（#RL001_mod1）
- SDS 10％
- B-buffer (BB)
- W-buffer (WB)
- RiboLace magnetic beads (RmB) v2.0
- OH-buffer (OH)
- Proteinase K (K)
- Lysis buffer (LB)
- RiboLace smart probe (RsP)
- Nuclease (Nux)
- mPEG
- Stabilizing Nux solution (SS)
■RiboLace Ribo-Seq - Module 2（#RL001_mod2）
- filter and vial
- Sodium acetate (NaAc)
- TR buffer (TR)
- HI-solution (HI)
- Buffer I (BI)
- Buffer II (BII)
- Marker M1 (20～100 nt)
- Marker M2
- PR oligo (PR)
- RT oligo (RT)
- FR oligo (FR)
- RiboLace RNA control
※ チューブ用マグネットスタンドや各種酵素類は，キットに含まれていません。製品マニュアルをご確認の上，別途ご用意下さい。
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価格
[在庫・価格 ：2021年03月02日 23時08分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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RiboLace Ribo-Seq - Module 1 |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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RiboLace Ribo-Seq - Module 2 |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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[在庫・価格 ：2021年03月02日 23時08分現在]
RiboLace Ribo-Seq - Module 1
文献数：0
- 商品コード：RL001_mod1
- メーカー：IBT
- 包装：1kit
- 価格：¥333,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
リボソームの機能解析法であるリボソームプロファイリング（Ribo-Seq）用の試料分離・ライブラリー調製キット。磁性ビーズによるプルダウン法により，抗体やタグ配列を用いずにRPF(Ribosome protected fragment)分離を行える。Module 2とセットで用いる。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃,-20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2020年2月15日号 p.19 ニュース2020年2月1日号 p.27
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| 製品記事 |
次世代シークエンス(NGS)関連製品特集 |
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| 関連記事 | |||
RiboLace Ribo-Seq - Module 2
文献数：0
- 商品コード：RL001_mod2
- メーカー：IBT
- 包装：1kit
- 価格：¥299,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
リボソームの機能解析法であるリボソームプロファイリング（Ribo-Seq）用の試料分離・ライブラリー調製キット。Module 1で分離したRPFからのIlluminaライブラリー調製用。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃,-20℃,-80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2020年2月15日号 p.19 ニュース2020年2月1日号 p.27
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| 製品記事 |
次世代シークエンス(NGS)関連製品特集 |
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| 関連記事 | |||
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