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バイサルファイト処理後のWGBSライブラリー調製を1本のチューブで行えます Zymo-Seq WGBS Library Kit

掲載日情報:2021/11/15 現在Webページ番号:68348

DNAメチル化解析に用いるWGBS(Whole Genome Bisulfite Sequencing)ライブラリーを調製するキットです。キットにはバイサルファイト処理試薬も含まれ、またバイサルファイト処理後のライブラリー調製のステップを1本のチューブで行えます。わずか4時間で再現性が高く、バイアスがないライブラリーを調製できます。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


わずか10 ngのDNAでもメチル化部位をカバーでき一貫した結果が得られる

わずか10 ngのDNAでもメチル化部位をカバーでき、一貫した結果が得られる
100 ngと10 ngのシロイヌナズナのゲノムDNAから、本キットでWGBSライブラリーを調製し、解読をしたところ、93%以上のCpG部位が重複していた(10× depth cutoff)。
また、2つのライブラリー間で重複するCpG部位のうち、90%以上の部位において、メチル化の度合いの差が10%以内であり、異なる試料間での結果に一貫性があることが示された。

あらゆるメチル化のレベルにおいてメチル化の度合いを正確に検出できる

あらゆるメチル化のレベルにおいて、メチル化の度合いを正確に検出できる
100 ngのゲノムDNAに、それぞれのメチル化比率(0%、10%、25%、50%、75%、100%)のDNAを添加した後に、本キットまたは従来の方法でWGBSライブラリーを調製し、解読をした。その結果、本キットで検出されたメチル化率は、理論上のメチル化率(Theoretical)とほぼ一致した(R2 = 0.997)。


特長

  • わずか4時間で、再現性高く、バイアスがないライブラリーを調製できます。
  • わずか10 ngのDNA試料から、90%以上のCpG、CHG、CHH部位(H=A / C / T)のメチル化の度合いを正確に検出できます。
  • あらゆるメチル化のレベルにおいて、メチル化の度合いを正確に検出できます。
  • 酵素反応のステップを1本のチューブで行えるため、多数試料の取り扱い時に特に有用です。
  • バイサルファイト処理に用いているEZ DNA Methylation-Lightning Kit(#D5030T、#D5030、#D5031)は、多くの使用文献があり、信頼性が高い製品です。
  • 調製したライブラリーは、すべてのIllumina社プラットフォーム(MiSeq、MiniSeq、HiSeq、NextSeq、NovaSeq)に対応しています。

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操作方法概略

操作方法概略

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Zymo Research社のDNAメチル化解析用ライブラリー調製キットの一覧

製品名をクリックすると各製品の詳細を、商品コードをクリックすると価格表をご覧になれます。

製品名
(商品コード)
Zymo-Seq Cell Free DNA WGBS Library Kit
(#D5462 / #D5463
Zymo-Seq WGBS Library Kit
(#D5465
Pico Methyl-Seq Library Prep Kit
(#D5455 / #D5456
Zymo-Seq RRBS Library Kit
(#D5460 / #D5461
カバーされる領域 ゲノム全体 ゲノム全体 ゲノム全体 ゲノム中のCpG領域
試料DNAの
必要量
5~10 ng 10~100 ng 10 pg~100 ng 10~500 ng
試料DNAの品質 cfDNAなど小さくて損傷したDNA 損傷のないDNA
(>10 kb)
損傷のないDNA、FFPE試料から抽出したDNA、cfDNA、分解されたDNA 損傷のないDNAが望ましい
FFPE試料から抽出したDNA、およびcfDNAに適合することを確認済み
対応生物種 全生物種 全生物種 全生物種 哺乳動物(ヒト、マウス、ラットなど)
他の生物種については、事前にゲノムのカバー率の評価が必要
推奨するリード数
(ヒトゲノムの場合)
5億リード 6億リード 6億リード 4千万リード
特長 cfDNAの断片末端のメチル化状態を正確に保持 簡便な操作で、わずか4時間で調製可能 少量のDNA試料や劣化したDNA試料にも適用可能 CpG領域を高い割合、かつ高い再現性でカバーできる

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リード全体に渡りライブラリー調製時のバイアスを軽減

リード全体に渡りライブラリー調製時のバイアスを軽減

マウスおよびシロイヌナズナのゲノムDNAから本キットを用いてWGBSライブラリーを調製し(左図)、従来法で調製したWGBSライブラリーの公開データ(右図)と比較した。すべてのシークエンスリードはトリミングをした後、Bismarkを用いてアライメントを行った。
従来法では追加のトリミングが必要なのに対して、本キットではリード全体に渡りバイアスのないデータが得られていることが示された。


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本キットで調製したライブラリーの解析例

本キットで調製したライブラリーの解析例

100 ngのシロイヌナズナのゲノムDNAから本キットを用いてWGBSライブラリーを調製し、TapeStation 2200(Agilent社)で解析した。
約200?700 bpのフラグメントが生成されている。
左:D1000 ScreenTape gelの泳動図、右:エレクトログラム、A1:分子量マーカー、B1:調製したWGBSライブラリー


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他社製品との比較

キットの種類 本製品A社製品B社製品
バイサルファイト処理試薬を含む
ゲノムDNAの断片化が不要 ××
ユニークなDual Indexプライマーが付属 ××
Illumina社の標準的なシークエンシングに対応 ×
ビーズを用いた精製を行う回数 1 54
操作時間の合計 4時間 7.1時間9.25時間

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Zymo-Seq WGBS Library KitのFAQ

Zymo-Seq WGBS Library KitのFAQ(クリックで展開します)

Q-1. Zymo-Seq WGBS Library Kitには、シークエンシング用ライブラリーを調製する際に必要な試薬がすべて含まれていますか?

A-1. Illumina DNA Prep Kit(#20018704または#20018705)が必要です。別途、Illumina社からご購入下さい。



Q-2. インデックス用のプライマーを別途購入する必要がありますか?

A-2. 本キットには、12種類のユニークなDual index primer setが含まれています。追加のIndex primer setが必要な場合は、フナコシのテクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。



Q-3. Zymo-Seq WGBS Library Kitを用いてWGBSライブラリーを調製する際に、FFPE試料から抽出したDNAやセルフリーDNAなどの劣化した試料を使用できますか?

A-3. 高品質で高収量のライブラリーを得るためには、用いるゲノムDNAのサイズが重要です。FFPE試料から得られたDNAは劣化が激しく、ライブラリーの品質に影響を与えます。セルフリーDNA(cfDNA)は、断片サイズが短すぎて効率的なタグ付加ができないため、本キットでは使用できません。
劣化したDNA試料からWGBSライブラリーを調製される場合は、Pico Methyl-Seq Library Prep Kitのご使用をお勧めします。



Q-4. Zymo-Seq WGBS Library Kitは、どんな生物種由来の試料に対応していますか?

A-4. 本キットは、哺乳類、バクテリア、植物など、あらゆる生物種から抽出したゲノムDNAに対応しています。RNAを含んでおらず、損傷のない高品質なゲノムDNAを使用するのがベストです。



Q-5. WGBSライブラリーに必要な推奨リード長と読み取り深度はどのくらいですか?

A-5. ライブラリーは、どのようなサイクリング回数にも適していますが、サイクリング回数が増えると、より多くのアダプタートリミングが必要になります。ほとんどの場合、100 bpのペアエンドリードが適しています。読み取り深度(リード数)は、ゲノムサイズと希望するカバー率に依存します。一般的には、CpG部位あたりのカバー率を10倍にすることをお勧めします。

リード数(N)は、以下の式を用いて算出することができます。
N = (Coverage)×(Diploid Genome Length) / Read Length.

バイサルファイト処理は、DNA-seqに比べてゲノムの複雑度を軽減し、アラインメント率が低いため、リード数を25%増やすことが推奨されています。したがって、100 bpペアエンドシークエンシングを用いた10×カバー率のヒトWGBSの場合、最低でも4億リードが推奨されます。



Q-6. Zymo-Seq WGBS Library KitとPico Methyl-Seq Library Prep Kitの違いは何ですか?どちらを使用すれば良いですか?

A-6. Zymo-Seq WGBS Library Kitは、高濃度のゲノムDNA(10~100 ng)を扱う方に最適です。取り扱いや洗浄の手間が少なく、ハイスループットなライブラリー作成に適しています。
一方、Pico Methyl-Seq Library Prep Kitは、少量のDNA(10 ng以下)や、セルフリーDNA(cfDNA)やFFPEから抽出したDNAのように断片化が進んだDNAを扱う場合に適しています。




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キット内容

タグメンテーションにはIllumina DNA Prep Kit(Illumina社、#20018704または#20018705)が別途必要です。その他の必要な試薬、装置類については、製品プロトコルをご確認下さい。
各キットコンポーネント名をクリックすると、単品の価格表をご覧いただけます。
印で示したキットコンポーネントは、EZ DNA Methylation-Lightning Kit(#D5030T、#D5030、#D5031)に含まれています。


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価格

[在庫・価格 :2024年04月20日 08時55分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Zymo-Seq WGBS Library Kit
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
DNAメチル化解析に用いるWGBSライブラリーを調製するキット。キットにはバイサルファイト処理試薬も含まれ,またバイサルファイト処理後のライブラリー調製のステップを1本のチューブで行える。
法規制等 取扱注意
保存条件 室温,-20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年11月1日号 p.18

製品記事 次世代シークエンス(NGS)関連製品特集
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[在庫・価格 :2024年04月20日 08時55分現在]

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Zymo-Seq WGBS Library Kit

文献数: 0

説明文 DNAメチル化解析に用いるWGBSライブラリーを調製するキット。キットにはバイサルファイト処理試薬も含まれ,またバイサルファイト処理後のライブラリー調製のステップを1本のチューブで行える。
法規制等 取扱注意
保存条件 室温,-20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年11月1日号 p.18

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[在庫・価格 :2024年04月20日 08時55分現在]

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詳細 商品名
  • 商品コード
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納期 文献数
EZ DNA Methylation-Lightning Kit (10preps)
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
EZ DNA Methylation-Lightning Kit (50 rxns.)
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
メチル化DNA検出キット。小包装のサンプルあり。
別包装品 別包装品あり
法規制等 取扱注意
保存条件 室温 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.4
ニュース2020年5月1日号 p.6

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EZ DNA Methylation-Lightning Kit (200 rxns.)
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
メチル化DNA検出キット。
別包装品 別包装品あり
法規制等 取扱注意
保存条件 室温 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.4
ニュース2020年5月1日号 p.6

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EZ DNA Methylation-Lightning Kit
Zymo-Seq Cell Free DNA WGBS Library Kit
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[在庫・価格 :2024年04月20日 08時55分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

EZ DNA Methylation-Lightning Kit (10preps)

文献数: 0

EZ DNA Methylation-Lightning Kit (50 rxns.)

文献数: 0

説明文 メチル化DNA検出キット。小包装のサンプルあり。
別包装品 別包装品あり
法規制等 取扱注意
保存条件 室温 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.4
ニュース2020年5月1日号 p.6

製品記事 Zymo-Seq RRBS Library Kit
EZ DNA Methylation-Lightning Kit
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EZ DNA Methylation-Lightning Kit (200 rxns.)

文献数: 0

説明文 メチル化DNA検出キット。
別包装品 別包装品あり
法規制等 取扱注意
保存条件 室温 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.4
ニュース2020年5月1日号 p.6

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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