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高収率で一本鎖または二本鎖環状DNAの増幅を行えるキット TruePrime RCA Kit
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：64221
DNAプライマーゼ Tth PrimPolと高いプロセシング能および正確性を有するPhi29 DNAポリメラーゼを用いたローリングサークル増幅（RCA, Rolling circle amplification）により、簡便に一本鎖または二本鎖の環状DNAの増幅が行えます。
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TruePrime法とは
Phi29 DNA polymeraseを用いたDNA増幅方法はMultiple strand Displacement Amplification （MDA）法と呼ばれ、単一細胞からの均一なDNA増幅が可能な方法として注目されています。しかし、合成ランダムプライマーを使用することから、プライマー由来のバイアスが生じることが知られています。
4basebio社は、Phi29 DNA polymerasと新規のDNAプライマーゼTth PrimPolを組み合わせ、ランダムプライマーによるアーティファクトや、外部DNA汚染の影響を低減したキットを開発しました。
- TthPrimPol (赤四角■) が変性DNAの異なる部位に結合する。
- TthPrimPolが、短いDNAプライマーを合成する。
- Phi29 DNAポリメラーゼ (青丸●) がTthPrimPolと置き換わり、合成を開始する。
- Phi29 DNAポリメラーゼが、鎖置換を起こす。
- TthPrimPolが新生DNAに結合し、新しいDNAプライマーを合成する。
- Phi29 DNAポリメラーゼがTthPrimPolと置き換わり、DNAプライマーと結合し、合成を開始する。
参考文献
- Zafar M. K., et al, Biochemistry, 53 (41), 6584-6594 (2014).
- Helleday T., Nat. Struct. Mol. Biol., 20, 1348–1350 (2013).
- Garcia-Gomez S., et al, Mol. cell, 52 (4), 541-553 (2013).
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特長
- ランダムプライマーを用いないため、プライマーの影響も受けません。
- ゲノムカバー率において、ランダムプライマー法に比べて増幅バイアスが低くなります。
- 一晩の細胞培養や従来のDNA精製は不要です。
- 外部DNAへの汚染の影響はありません。
- アルカリ性条件下のインキュベーションによりDNA変性を行うため、断片化を抑え、サイズの大きい高精度のゲノムDNAが得られます。
- 精製DNA（プラスミド、コスミド、BAC、M13クローンなど）または、バクテリア細胞（寒天プレートから採取したコロニー、培養培地またはグリセロールストックなど）に使用できます。
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操作方法概略
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使用例
感度
TruePrime RCA Kitの感度は極めて高く、アトグラム（ag）レベルのDNAから増幅を行える。また、様々なサイズのテンプレートDNAに対応可能である。
環状DNA増幅キットによるプラスミドDNAの増幅
TruePrime RCA Kitの収量は、プラスミドDNA (3～10 kb) 1 ngから開始して、3時間の反応で通常25μl当たり2.5μgが得られる。BACなどのより大きいテンプレート分子 (150～200 kb)の場合、10 ngから開始して、3時間の反応で25μl当たり約2μgとなる。より高い増幅収量が必要な場合には、6時間までインキュベーション時間を延長することができる。
バクテリア細胞からの増幅
TruePrime RCA Kitは、寒天培地から採取したコロニー、バクテリア培養液、グリセロールストックを出発試料として用いることができる。
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環状DNA増幅キットと他社競合品との比較
TruePrime RCA Kit は、現在のMDA技術による環状分子増幅に対し、以下のような利点がある。
- 他社製品と比較して、より高い収率が見込める。
- テンプレートDNA非存在下でのバックグラウンドが低い。
- 目的以外のDNAの増幅が少なく、多くの目的DNAを得ることができる（1カットとなる制限酵素BamHIにて処理）。
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TruePrimeキットシリーズ
※各製品の詳細は品名をクリックして下さい。
| 品名 | 用途 |
|---|---|
| TruePrime Necrotic Cell-free / Exosomal DNA Amplification Kit | ネクローシス細胞やエクソソーム由来の少量の精製cfDNAを増幅するキット |
| TruePrime Apoptic Amplification Kit | アポトーシス由来の長さ160～170 bpの断片化されたcfDNAを増幅するするキット |
| TruePrime WGA Kit | 少量の精製DNAから全ゲノム増幅するキット |
| TruePrime Single Cell WGA Kit | シングルセルから全ゲノム増幅するキット |
| TruePrime RCA Kit | 一本鎖または二本鎖環状DNAの増幅を行えるキット |
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キット内容
- Buffer D / N
- Reaction buffer
- dNTPs
- H2O
- Enzyme 1 / 2
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4basebio社製品ご購入のご注意
本製品は、ご注文時に専用のMTA（Material Transfer Agreement）が必要です。必要事項をご記入の上、販売店担当者にお渡し下さい。
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価格
[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
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RCA Kit, TruePrime (100reactions) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
RCA Kit, TruePrime (100reactions)
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- 商品コード：390100
- メーカー：SYN
- 包装：1kit
- 価格：¥154,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | ※MTAが必要です。※輸入諸費用(120,000円)を別途いただく製品です。 ローリングサークル増幅（RCA, Rolling circle amplification）により，簡便に一本鎖または二本鎖の環状DNAの増幅が行えるキット。一本鎖／二本鎖環状DNAの増幅を行えるキット。ランダムプライマーを用いないため，ランダムプライマーによるアーティファクトや外部DNA汚染の影響を低減できる。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年5月1日号 p.19
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| 製品記事 | |||
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