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guideRNA とCas9 を1 つのベクターで発現できます PrecisionX Cas9 SmartNuclease All-in-one Vectors

掲載日情報:2020/04/10 現在Webページ番号:46070

ゲノム編集に有用な,Cas9のAll-in-Oneベクターです。線状化されているため,ライゲーションが容易です。タグ付きの製品もあり,ドナーベクターによる蛍光色素遺伝子のノックイン無しでトランスフェクションのトラッキングが行えます。

guide RNAによる新技術のゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

GFPまたはRFP配列が挿入されていないRNAの状態でホストに直接導入するシステムについては,こちらをご覧下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

使用例

HEK293T細胞にCAG-hspCas9ベクターをトランスフェクションした例

GFPもしくはRFP配列が挿入されているタイプのベクターを用いた導入例

HEK293T細胞に CAG-hspCas9ベクター(上:#CAS720G-1,下:#CAS721R-1)をトランスフェクションした。GFPおよびRFPにより導入されたことが分かる。




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特長

  • guide RNA (crRNA:tracrRNA) およびCas9タンパク質は1つのCRISPRベクターから発現できるため,細胞への導入が必要となるCRISPRベクターは1種類のみです。
  • CRISPRベクターは線状化されているため,ライゲーションが容易に行えます。
  • プロモーターの異なる3種類のCRISPRベクターがあります。
  • タイゲーション10反応分の量が含まれています。
  • 変異型Cas9(D10A)はニッカーゼとして機能し,オフターゲット効果を低減した相同組換えによるゲノム編集が行えます。

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MEMO Cas9 Nuclease(D10A)とは

Cas9 Nuclease(D10A)とは (クリックで開閉します)

Cas9の変異体D10Aは,Nickaseとして機能することが報告されています*1。 Cas9(D10A)は,野生型Cas9のようにDNA二本鎖を切断せず,一本鎖のみを切断しニックを入れます。 そのため,二本鎖切断により引き起こされるDNA修復機構NHEJ(非相同末端再結合)が起こらず,望ましくない領域での遺伝子欠失・挿入やオフターゲット効果を抑制することができます*2。 また,最近ではペアのニックにより,細胞株におけるオフターゲット効果を50~1,500倍まで減少できた例が報告されています*3
*1 Jinek, M., et al., Science, 17, 337(6096), 816~821 (2012).
*2 Cong, L., et al., Science, 15, 339(6121), 819~823 (2013).
*3 Ran, F. A., et al., Cell, 12, 154(6), 1380~1389 (2013).

Cas9 Nuclease(D10A)を用いたゲノム編集

Cas9 Nuclease(D10A)を用いたゲノム編集

標的部位のアンチセンス鎖に対するguide RNA 1とセンス鎖に対するguide RNA 2を作製し,Cas9 (D10A)を用いてペアでニックを入れ,ゲノム編集の効率を向上させる。

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると,各製品の価格表をご覧いただけます。

プロモーター 商品コード レポーター
発現
野生型 hspCas9 変異型(D10A) hspCas9,Nickase
EF1 CAS700A-1 CAS750A-1 なし
CAS700G-1 CAS750G-1 GFP
CAS701R-1 CAS751R-1 RFP
CAG CAS720A-1 CAS770A-1 なし
CAS720G-1 CAS770G-1 GFP
CAS721R-1 CAS771R-1 RFP
CMV CAS740A-1 CAS790A-1 なし
CAS740G-1 CAS790G-1 GFP
CAS741R-1 CAS791R-1 RFP

GFPまたはRFP配列が挿入されていないAll-in-Oneベクター製品については,こちらをご覧下さい。

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ベクターマップ

guideRNA とCas9 を同時に発現するベクターPrecisionX Cas9 SmartNuclease Systemのベクターマップ

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ガイドRNA配列のデザイン方法

標的配列は,末端に「GG」が配置されている領域を選択していただき,NGGの上流20塩基で設計します。切断したい標的配列を含むgRNAおよびその相補鎖をオリゴ合成などで作製していただきます。

標的領域 5’ NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG 3’
デザインする配列 5’ATCCNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 3’
3’NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCAAA 5’

GFPまたはRFP配列が挿入されていないAll-in-Oneベクター製品の配列デザイン時に付加するアダプター配列とは異なりますのでご注意下さい。

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価格

野生型(hspCas9)

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

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EF1-T7-hspCas9-H1-gRNA linearized SmartNuclease vector(10tests)
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Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA Targeting vector, EF1a Promoter
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。