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PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System
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PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System
野生型／変異型Cas9発現mRNA とgRNA 作製キット PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System
掲載日情報：2015/05/22 現在Webページ番号：8121
ゲノム編集(genome editing)に有用な、Cas9発現mRNAおよびguide RNA作製キットです.
Cas9をプラスミドではなく、RNAの状態で直接導入するため、ホスト内での免疫反応が生じにくく、また速やかに標的配列の切断を起こすことができます。
従来のCas9に加え、ゲノム編集の効率をさらに高めることが可能なCas9変異体(D10A）をそろえています。
※Cas9およびguide RNAをひとつのプラスミドに組み込み、細胞に導入するAll-in-Oneベクター製品については、こちらをご覧下さい。
■Cas9 Nuclease（D10A）とは
Cas9の変異体D10Aは、Nickaseとして機能することが報告されています＊1。
Cas9（D10A）は、野生型Cas9のようにDNA二本鎖を切断せず、一本鎖のみを切断しニックを入れます。
そのため、二本鎖切断により引き起こされるDNA修復機構NHEJ（非相同末端再結合）が起こらず、望ましくない領域での遺伝子欠失・挿入やオフターゲット効果を抑制することができます＊2。
また、最近ではペアのニックにより、細胞株におけるオフターゲット効果を50～1,500倍まで減少できた例が報告されています＊3。
＊1Jinek, M., et al., Science, 17, 337(6096), 816～821 (2012).
＊2Cong, L., et al., Science, 15, 339(6121), 819～823 (2013).
＊3Ran, F. A., et al., Cell, 12, 154(6), 1380～1389 (2013).
![[CRISPR-Cas9] RNAを細胞に導入するCas9-CRISPRシステム PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System](/domestic/f-img/ds/SBI_8121_2.jpg)
図：標的部位のアンチセンス鎖に対するguide RNA 1とセンス鎖に対するguide RNA 2を作製し、Cas9(D10A)を用いてペアでニックを入れ、ゲノム編集の効率を向上させる。
追加しました。
特長
- Cas9のmRNA、guide RNAの構築キットなどを取りそろえています。
- Cas9のmRNA、guide RNAをそのまま細胞にトランスフェクションするシステムのため、免疫原性が低く、ES細胞での使用にも適します。
- 任意のguide RNA（crRNA-tracrRNA キメラ転写産物）を組み込ませたT7 gRNA Cloning Vectorにより、PCR用またはin vitro転写用のテンプレートとして、高効率にguide RNAを作製できます。
- ゲノム編集の効率を高めるためには、Cas9 (D10A) SmartNickase mRNA (#CAS504A-1)が最適です。
- トランスフェクション効率のチェックに最適なタグ付きCas9 mRNA もあります（Cas9-T2A-GFP/RFP mRNA）。
※CRISPR-Cas9システムやTALE-Nucleaseと併用した相同組換えに有用なベクターも数多く取りそろえています。PiggyBacシステムを利用したベクターはこちらを、ノックイン・ノックアウト・タギング用ベクターはこちらをご覧下さい。
追加しました。
製品ラインナップ
Cas9 mRNA 製品
| 用途 | Cas9 | タグ | 商品コード | 包装 |
|---|---|---|---|---|
| 真核生物用 | 野生型hspCas9 | なし | CAS500A-1 | 20μg |
| GFP | CAS530G-1 | 10μg | ||
| RFP | CAS531R-1 | 10μg | ||
| 真核生物用 | 変異型hCas9-nickase | なし | CAS504A-1 | 20μg |
| GFP | CAS534G-1 | 10μg | ||
| RFP | CAS535R-1 | 10μg |
guide RNA作製キット
任意のgRNA（crRNA-tracrRNA キメラ転写産物）を組み込んだT7 gRNA Cloning Vector により、PCR 用またはin vitro 転写用のテンプレートとして、高効率にgRNA を作製できます。
| 用途 | 商品コード |
|---|---|
| guide RNAクローニングベクター作製キット | CAS510A-1 |
| gRNA クローニングベクター作製キット（#CAS510A-1）にin vitro 転写を行うための試薬が付属したキット。 | CAS510A-KIT |
| gRNA クローニングベクター作製キット（#CAS510A-1） に組換えCas9 タンパク質（#CAS400A-1）が付属したキット | CAS400A-KIT |
コントロール用 guide RNA
| 用途 | 商品コード |
|---|---|
| AAVS1に対するguide RNA | CAS520A-1 |
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使用例
![[CRISPR-Cas9] RNAを細胞に導入するCas9-CRISPRシステム PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System使用例1](/domestic/f-img/ds/SBI_8121_1v1.jpg)
染色像 上図：Cas9 mRNAとAAVS1に対するguide RNA、さらにGFPを組み込むためのドナーベクターを、細胞に導入した。
染色像 下図：Cas9およびAAVS1に対するguide RNAを発現するAll-in-Oneベクターと、GFPを組み込むためのドナーベクターを、細胞に導入した。
mRNAの直接導入により、All-in-Oneベクター使用時と同等の組換えが生じた。
![[CRISPR-Cas9] RNAを細胞に導入するCas9-CRISPRシステム PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System使用例2](/domestic/f-img/ds/SBI_8121_2v1.jpg)
HEK293T 細胞にhspCas9-T2A-GFP mRNA（上：#CAS530G-1）また、hspCas9-T2ARFP mRNA（下：#CAS531R-1）をトランスフェクションした。GFPおよびRFPの発現が確認でき、mRNA が導入されたことがわかる。
追加しました。
操作方法概略
Cas9 mRNAおよびguide RNAの導入方法
- 12ウェルプレートに、細胞を1×105～2×105 cells/well になるよう播種する。
- 細胞が50～60％コンフルエントになった後、Casp mRNAとguide RNAをトランスフェクションする（必要に応じてHDR（Homology Dependent Repair）用のドナーベクターも導入する）。
- トランスフェクション後48～72時間に、Cas9-guide RNAによるホストゲノムにおける切断活性を、Surveyorアッセイやジェノタイピングにより確認する。
in vitro 転写（IVT）によるガイドRNA の作製ワークフロー（#CAS510A-KIT）
- 標的配列に対する2 つのDNA オリゴヌクレオチド（センス鎖とアンチセンス鎖）をデザインする
- アニーリングし、Duplex を作製する
- Duplex を付属のベクターにライゲーション
- コンピテントセルに形質転換
- ダイレクトシークエンスによりポジティブクローンを選ぶ
- 付属の試薬でIVT を行う
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価格
Cas9 mRNA製品
[在庫・価格 ：2025年04月25日 19時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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Transfection-ready Cas9 SmartNuclease mRNA(Eukaryotic version) |
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Transfection-ready Cas9 SmartNickase mRNA (Eukaryotic Nickase mutant version) |
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Transfection-ready hspCas9-T2A-GFP SmartNuclease mRNA(wildtype Cas9 with GFP marker) |
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Transfection-ready hspCas9-T2A-RFP SmartNuclease mRNA(wildtype Cas9 with RFP marker) |
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Transfection-ready hspCas9-nickase-T2A-GFP SmartNickase mRNA(Cas9 Nickase mutant with GFP marker) |
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Transfection-ready hspCas9-nickase-T2A-RFP SmartNickase mRNA(Cas9 Nickase mutant with RFP marker) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 19時55分現在]
Transfection-ready Cas9 SmartNuclease mRNA(Eukaryotic version)
文献数： 0
- 商品コード：CAS500A-1
- メーカー：SBI
- 包装：20μg
- 価格：¥102,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2022年9月15日号 p.19 ニュース2021年6月15日号 p.9
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- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
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ニュース2022年9月15日号 p.19 ニュース2021年6月15日号 p.9
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- 価格：¥90,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 野生型Cas9およびGFPを発現するトランスフェクション用mRNA。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
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- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 野生型Cas9およびRFPを発現するトランスフェクション用mRNA。 |
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- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | Cas9 NickaseおよびGFPを発現するトランスフェクション用mRNA。 |
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- メーカー：SBI
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- 価格：¥158,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
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- 在庫：無(未発注)
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- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥73,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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ニュース2022年9月15日号 p.15 ニュース2021年6月15日号 p.20
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GFP, Transcript, mRNAExpress
文献数： 0
- 商品コード：MR700A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥59,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | ※受注発注品。 |
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- 価格：¥85,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | ※受注発注品。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |||||
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- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥59,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | ※受注発注品。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | ※受注発注品。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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ニュース2022年9月15日号 p.19 ニュース2021年6月15日号 p.9
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製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。