HOME> 試薬> 遺伝子工学> ゲノミクス> ゲノム編集> PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System
HOME> 受託サービス・特注品> ゲノミクス・エピジェネティクス> ゲノム編集> PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System

野生型/変異型Cas9発現mRNA とgRNA 作製キット PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System

掲載日情報:2015/05/22 現在Webページ番号:8121

guide RNAによる新技術のゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

ゲノム編集(genome editing)に有用な,Cas9発現mRNAおよびguide RNA作製キットです.
Cas9をプラスミドではなく,RNAの状態で直接導入するため,ホスト内での免疫反応が生じにくく,また速やかに標的配列の切断を起こすことができます。
従来のCas9に加え,ゲノム編集の効率をさらに高めることが可能なCas9変異体(D10A)をそろえています。

Cas9およびguide RNAをひとつのプラスミドに組み込み,細胞に導入するAll-in-Oneベクター製品については,こちらをご覧下さい。

■Cas9 Nuclease(D10A)とは
Cas9の変異体D10Aは,Nickaseとして機能することが報告されています*1。 Cas9(D10A)は,野生型Cas9のようにDNA二本鎖を切断せず,一本鎖のみを切断しニックを入れます。 そのため,二本鎖切断により引き起こされるDNA修復機構NHEJ(非相同末端再結合)が起こらず,望ましくない領域での遺伝子欠失・挿入やオフターゲット効果を抑制することができます*2。 また,最近ではペアのニックにより,細胞株におけるオフターゲット効果を50~1,500倍まで減少できた例が報告されています*3
*1Jinek, M., et al., Science, 17, 337(6096), 816~821 (2012).
*2Cong, L., et al., Science, 15, 339(6121), 819~823 (2013).
*3Ran, F. A., et al., Cell, 12, 154(6), 1380~1389 (2013).

[CRISPR-Cas9] RNAを細胞に導入するCas9-CRISPRシステム PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System

図:標的部位のアンチセンス鎖に対するguide RNA 1とセンス鎖に対するguide RNA 2を作製し,Cas9(D10A)を用いてペアでニックを入れ,ゲノム編集の効率を向上させる。


特長

  • Cas9のmRNA,guide RNAの構築キットなどを取りそろえています。
  • Cas9のmRNA,guide RNAをそのまま細胞にトランスフェクションするシステムのため,免疫原性が低く,ES細胞での使用にも適します。
  • 任意のguide RNA(crRNA-tracrRNA キメラ転写産物)を組み込ませたT7 gRNA Cloning Vectorにより,PCR用またはin vitro転写用のテンプレートとして,高効率にguide RNAを作製できます。
  • ゲノム編集の効率を高めるためには,Cas9 (D10A) SmartNickase mRNA (#CAS504A-1)が最適です。
  • トランスフェクション効率のチェックに最適なタグ付きCas9 mRNA もあります(Cas9-T2A-GFP/RFP mRNA)。

CRISPR-Cas9システムやTALE-Nucleaseと併用した相同組換えに有用なベクターも数多く取りそろえています。PiggyBacシステムを利用したベクターはこちらを,ノックイン・ノックアウト・タギング用ベクターはこちらをご覧下さい。

目次に戻る

製品ラインナップ

Cas9 mRNA 製品

用途 Cas9 タグ 商品コード 包装
真核生物用 野生型hspCas9 なし CAS500A-1 20μg
GFP CAS530G-1 10μg
RFP CAS531R-1 10μg
真核生物用 変異型hCas9-nickase なし CAS504A-1 20μg
GFP CAS534G-1 10μg
RFP CAS535R-1 10μg

guide RNA作製キット

任意のgRNA(crRNA-tracrRNA キメラ転写産物)を組み込んだT7 gRNA Cloning Vector により,PCR 用またはin vitro 転写用のテンプレートとして,高効率にgRNA を作製できます。

用途 商品コード
guide RNAクローニングベクター作製キット CAS510A-1
gRNA クローニングベクター作製キット(#CAS510A-1)にin vitro 転写を行うための試薬が付属したキット。 CAS510A-KIT
gRNA クローニングベクター作製キット(#CAS510A-1) に組換えCas9 タンパク質(#CAS400A-1)が付属したキット CAS400A-KIT
gRNA Vector Kit

コントロール用 guide RNA

用途 商品コード
AAVS1に対するguide RNA CAS520A-1
gRNA Vector Kit

目次に戻る

使用例

[CRISPR-Cas9] RNAを細胞に導入するCas9-CRISPRシステム PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System使用例1

染色像 上図:Cas9 mRNAとAAVS1に対するguide RNA,さらにGFPを組み込むためのドナーベクターを,細胞に導入した。
染色像 下図:Cas9およびAAVS1に対するguide RNAを発現するAll-in-Oneベクターと,GFPを組み込むためのドナーベクターを,細胞に導入した。
mRNAの直接導入により,All-in-Oneベクター使用時と同等の組換えが生じた。

[CRISPR-Cas9] RNAを細胞に導入するCas9-CRISPRシステム PrecisionX Cas9 SmartNuclease RNA System使用例2

HEK293T 細胞にhspCas9-T2A-GFP mRNA(上:#CAS530G-1)また,hspCas9-T2ARFP mRNA(下:#CAS531R-1)をトランスフェクションした。GFPおよびRFPの発現が確認でき,mRNA が導入されたことがわかる。

目次に戻る

操作方法概略

Cas9 mRNAおよびguide RNAの導入方法
  1. 12ウェルプレートに,細胞を1×105~2×105 cells/well になるよう播種する。
  2. 細胞が50~60%コンフルエントになった後,Casp mRNAとguide RNAをトランスフェクションする(必要に応じてHDR(Homology Dependent Repair)用のドナーベクターも導入する)。
  3. トランスフェクション後48~72時間に,Cas9-guide RNAによるホストゲノムにおける切断活性を,Surveyorアッセイやジェノタイピングにより確認する。

目次に戻る

操作方法概略

in vitro 転写(IVT)によるガイドRNA の作製ワークフロー(#CAS510A-KIT)
  1. 標的配列に対する2 つのDNA オリゴヌクレオチド(センス鎖とアンチセンス鎖)をデザインする
  2. アニーリングし,Duplex を作製する
  3. Duplex を付属のベクターにライゲーション
  4. コンピテントセルに形質転換
  5. ダイレクトシークエンスによりポジティブクローンを選ぶ
  6. 付属の試薬でIVT を行う

目次に戻る

価格

Cas9 mRNA製品

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Transfection-ready Cas9 SmartNuclease mRNA(Eukaryotic version)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事
Transfection-ready Cas9 SmartNickase mRNA (Eukaryotic Nickase mutant version)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事
Transfection-ready hspCas9-T2A-GFP SmartNuclease mRNA(wildtype Cas9 with GFP marker)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事
Transfection-ready hspCas9-T2A-RFP SmartNuclease mRNA(wildtype Cas9 with RFP marker)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事
Transfection-ready hspCas9-nickase-T2A-GFP SmartNickase mRNA(Cas9 Nickase mutant with GFP marker)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事
Transfection-ready hspCas9-nickase-T2A-RFP SmartNickase mRNA(Cas9 Nickase mutant with RFP marker)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

Transfection-ready Cas9 SmartNuclease mRNA(Eukaryotic version)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

Transfection-ready Cas9 SmartNickase mRNA (Eukaryotic Nickase mutant version)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

Transfection-ready hspCas9-T2A-GFP SmartNuclease mRNA(wildtype Cas9 with GFP marker)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

Transfection-ready hspCas9-T2A-RFP SmartNuclease mRNA(wildtype Cas9 with RFP marker)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

Transfection-ready hspCas9-nickase-T2A-GFP SmartNickase mRNA(Cas9 Nickase mutant with GFP marker)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

Transfection-ready hspCas9-nickase-T2A-RFP SmartNickase mRNA(Cas9 Nickase mutant with RFP marker)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

guide RNA作製用キット

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Linearized T7 gRNA SmartNuclease vector Kit(10rxn)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.16

製品記事
関連記事
T7 gRNA SmartNuclease Synthesis Kit(includes CAS510A-1&T7 IVT synthesis reagents)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.16

製品記事
関連記事
Cas9 Protein and T7 gRNA SmartNuclease Synthesis Kit, 10 rxn
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事 組換えCas9タンパク質
関連記事
Cas9-EGFP Protein and T7 gRNA SmartNuclease Synthesis Kit, 10 rxn
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事 組換えCas9タンパク質
関連記事

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

Linearized T7 gRNA SmartNuclease vector Kit(10rxn)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.16

製品記事
関連記事

T7 gRNA SmartNuclease Synthesis Kit(includes CAS510A-1&T7 IVT synthesis reagents)

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.16

製品記事
関連記事

Cas9 Protein and T7 gRNA SmartNuclease Synthesis Kit, 10 rxn

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事 組換えCas9タンパク質
関連記事

Cas9-EGFP Protein and T7 gRNA SmartNuclease Synthesis Kit, 10 rxn

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 法規備考
掲載カタログ

製品記事 組換えCas9タンパク質
関連記事

Cas9 mRNAおよびAAVS1に対するguideRNA製品

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Transfection-ready Cas9 SmartNuclease AAVS1 gRNA
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.16

製品記事
関連記事

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

Transfection-ready Cas9 SmartNuclease AAVS1 gRNA

文献数:0

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.16

製品記事
関連記事

mRNA導入時に使用できるコントロールGFP / RFP mRNA

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
GFP, Transcript, mRNAExpress
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
※受注発注品
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事 mRNAExpress Transcript
iPS細胞の作製 - 幹細胞(Stem Cell)特集
関連記事
mRNAExpress RFP transcript
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
※受注発注品
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

[在庫・価格 :2021年09月25日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

GFP, Transcript, mRNAExpress

文献数:0

説明文 ※受注発注品
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事 mRNAExpress Transcript
iPS細胞の作製 - 幹細胞(Stem Cell)特集
関連記事

mRNAExpress RFP transcript

文献数:0

説明文 ※受注発注品
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2020年5月15日号 p.12

製品記事
関連記事

目次に戻る

お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。