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ミトコンドリア電子伝達系酵素複合体(Complex Ⅰ~Ⅴ)の活性測定キット MitoCheck Complex Activity Assay Kit

掲載日情報:2017/06/05 現在Webページ番号:46059

試験化合物とキットに含まれるウシ心臓ミトコンドリアをインキュベートし,電子伝達系酵素複合体に対する阻害活性を評価するキットです。96ウェルフォーマットのため,ハイスループットスクリーニングに最適です。

本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
Cayman社のMitoCheck Mitochondrial (Tissue) Isolation Kitで単離したミトコンドリアを用いて測定することも可能です。

電子伝達系,アポトーシス,ミトコンドリア病の研究に ミトコンドリア(Mitochondria)研究用製品特集バナー

MEMO

ミトコンドリア電子伝達系複合体(Complex Ⅰ~Ⅴ)の役割について


Complex Ⅰ (NADHオキシダーゼ/Co-enzyme Qレダクターゼ)
Complex Ⅰは NADHの酸化に続きユビキノン(Q)の還元によるユビキノール(QH2)の産生,電子受容体のO2の還元を触媒します。ComplexⅠの長期間に渡る阻害はパーキンソン病,ダウン症候群,リー症候群に関与しているため,ミトコンドリアの毒性評価は神経学的異常の指標として有用と考えられています。

Complex Ⅱ (コハク酸/Co-enzyme Qレダクターゼ)
Complex Ⅱはコハク酸からフマル酸への酸化,同時にユビキノン(Q)の還元によるユビキノール(QH2)の産生,電子受容体のO2の還元を触媒します。Complex Ⅱの阻害は腫瘍形成にも関与しています。

Complex Ⅲ (CoQ シトクロムc オキシドレダクターゼ)
Complex Ⅲはミトコンドリアの酸化的リン酸化に関わる主要タンパク質です。ミトコンドリアの呼吸を調節する,活性酸素の供給源として機能しています。Complex ⅢはQH2産生中にユビキノールComplex ⅠとⅡから電子を受け取り,QH2はQサイクルとして知られる一連の酸化還元反応に入ります。

Complex Ⅳ (シトクロムc オキシダーゼ)
Complex Ⅳはミトコンドリア電子伝達系内の最終的な電子受容体です。シトクロムcの酸化と酸素原子(O2)の4電子を還元することで水(H2O)を産生します。

Complex Ⅴ (F1FoATPシンターゼ)
電子伝達鎖(ETC)と複合体を形成していないミトコンドリアのF1F0ATPシンターゼは、一般にComplex Ⅴと呼ばれます。Complex Ⅴは,電子伝達鎖によって生成されたプロトン勾配の形成エネルギーを利用するマルチサブユニットタンパク質で,Piの存在下でADPのリン酸化によってATPを形成します。このメカニズムは酸化的リン酸化として知られており,哺乳動物細胞におけるATP生成の約90%に関与しています。代表的な阻害物質に,oligomycinやaurovertinなどがあります。また,ComplexⅤはATPアーゼとしての機能も有し,ATPを加水分解することでプロトン勾配を形成する。

ミトコンドリア電子伝達系のイメージ図

測定原理

■ ComplexⅠ Assay Kit (#700930)

Complex ⅠによりNADHの酸化に続きQH2が産生されます。この際のNADHの酸化に伴う340 nmの吸光度の減少を測定することでComplex Ⅰの活性を測定します。

■ ComplexⅡ Assay Kit (#700940)

ComplexⅡにより産生されたQH2とDCPIPを反応させることで,DCPIPが還元されDCPIPH2が生じます。DCPIPの還元による600 nmの吸光度の減少を測定することでComplexⅡの活性を測定します。

ミトコンドリア電子伝達系のイメージ図

■ ComplexⅡ/Ⅲ Assay Kit (#700950)

Complex ⅢはComplex Ⅱにより産生されたQH2から電子を受け取り,シトクロムcを還元します。生成した還元型シトクロムcによる550 nmの吸光度を測定することでComplex Ⅱ/Ⅲ活性を測定します。

■ ComplexⅣ Assay Kit (#700990)

Complex Ⅳにより還元型シトクロムcが酸化されます。還元型シトクロムcによる550 nmの吸光度の変化を測定することでComplex Ⅳの活性を測定します。

■ ComplexⅤ Assay Kit (#701000)

Complex ⅤのATPaseとしての働きによりATPがADPに変換される際の共役反応として,下図のような反応でNADHが酸化されます。この際のNADHによる340 nmの吸光度の減少を測定することでComplex Ⅴ活性を測定します。

ミトコンドリア電子伝達系のイメージ図

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使用例

MitoCheck Complex I Activity Assay Kit(#700930)を用いてロテノン(IC50=131) のComplex Ⅰ活性阻害を測定した。

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キット内容

キットコンポーネント 700930 700940 700950 700990 701000
Mitochondrial complex activity assay buffer
Bovine heart mitochondria assay reagent
HalfVolume 96-well clear plate
Ubiquinone assay reagent - - -
NADH assay reagent - - -
BSA assay reagent - - - -
DCPIP assay reagent - - - -
Succinate assay reagent - - -
Cytochrome c assay reagent - - - -
Reduced cytochrome c assay reagent - - - -
ATP reagent - - - -
Mitochondrial complexⅤ enzyme mix - - - -

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価格

[在庫・価格 :2019年07月16日 11時51分現在]

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MitoCheck Complex I Activity Assay Kit

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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