洗浄不要のイムノアッセイ構築キット ONEPot Immunoassay Kit ＜OpenGUS Method＞
掲載日情報：2023/10/10 現在Webページ番号：71518
タンパク質の測定系を構築するためのキットです。変異体β-glucuronidase（GUS）を用いたOpenGUS Immunoassayの原理で測定を行います。
現在幅広く用いられているELISA法と比べて、操作が簡便、必要抗体量が少量で済むなどの利点があります。また、ウエスタンブロッティングと比べて短時間で反応が完了し、より高い定量性を得られます。
※ 本製品は上田宏博士、北口哲也博士および朱博博士 他 (国立大学法人 東京工業大学 科学技術創成研究院 (当時)) の研究成果をもとに、BDLが開発、製品化しました。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
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- 特長
- 本製品とサンドイッチELISAとの比較
- 原理
- 操作方法概略
- 使用例：唾液／涙中のラクトフェリン濃度の測定
- 原著文献
- キット内容（100 well / kit）
- 別途ご用意いただく試薬／器具
- ご注意
- 価格
特長
- 2種類の抗体（Mouse IgG1）で標的抗原をサンドイッチして、検出します＊。
- プレートへの抗体の固相化やウェルの洗浄は不要です。
- 抗体と検出用酵素は混合するだけでアフィニティ結合します。
- 抗体の使用量を節約できます（96 wellあたり、約7 μg×2種類）。
- 蛍光測定用キット（#DS850）と吸光度測定用キット（#DS860）があります。
＊ 多量体を安定に形成するタンパク質では、1種類の抗体のみで検出できる場合もあります。
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本製品とサンドイッチELISAとの比較
| 本製品 | サンドイッチELISA | |
|---|---|---|
| 抗体の固相化 | 不要 | 必要（一晩～） |
| ウェル洗浄 | 不要 | 必要（2～3回） |
| 反応時間 | 2時間10分 | 3時間程度 （プレートに抗体の固相化を 行う場合は＋1日） |
| 使用抗体量 （96 wellあたり） |
約7 μg×2種類 | 捕捉抗体：約100 μg 検出抗体：～数 μg |
| 検出用抗体 | 未標識 | 標識が必要 |
| 検出感度 | ○ | ◎ |
| 抗原の種類 | 任意のものを測定可能 | |
| 検出方法 | 蛍光または吸光度 | |
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原理
大腸菌のβ-glucuronidase（GUS）は四量体を形成することで活性を示します。本製品に用いられている変異体GUSは、二量体は形成するものの、四量体はほとんど形成しません。
本製品は、抗体結合ドメインを融合させた変異体GUSです。抗原抗体反応を介して変異体GUSの二量体同士が連結し、強制的に四量体が形成されます。このGUS四量体の酵素活性によって、抗原濃度依存的なシグナルが得られます。
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操作方法概略
- 測定試料（または検量線作製用の精製抗原）と、2種類の抗体、キット付属の酵素を混合する。
- 60分間静置する。
- キット付属の基質を添加する。
- 60分間静置する。
- 蛍光または吸光度で測定する。
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使用例：唾液／涙中のラクトフェリン濃度の測定
唾液および涙中のLactoferrin濃度を本製品を使用して測定し、市販のLactoferrin ELISA Kitを用いて得られた結果と比較した。
- 市販ELISA Kitおよび本製品で得られた測定値が近似する値となった。
- 本製品での測定には1種類の抗体のみを用いた。Lactoferrinは多量体を形成しているため、1種類の抗体のみでの検出が行えたと考える。
- 検量線の縦軸（Absorbance）は、［Singal－Background］の値で表示。
使用した抗体：Anti-Lactoferrin, Human, Mouse-Mono（1A1）（ HyTest, #4L2-1A1）
その他の使用例として、C-Reactive Protein（CRP）、Calf-Intestinal Alkaline Phosphatase（CIAP）、Cry j 1、AAV2（empty capsids）で作製した検量線を製品マニュアルに掲載しています。製品マニュアルについては価格表部分からダウンロードいただけます。
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原著文献
- Su, J., et al., "Noncompetitive homogeneous immunodetection of small molecules based on beta-glucuronidase complementation.", Analyst, 143 (9), 2096～2101 (2018). [PMID:29634056]
- Su, J., et al., "Creation of stable and strictly regulated enzyme switch for signal-on immunodetection of various small antigens.", J. Biosci. Bioeng., 128 (6), 677～682 (2019). [PMID:31235413]
- Su, J., et al., "Transmembrane signaling on a protocell: Creation of receptor-enzyme chimeras for immunodetection of specific antibodies and antigens.", Sci. Rep., 9 (1), 18189 (2019). [PMID:31796769]
- Zhu, B., et al., "Creating a thermostable beta-glucuronidase switch for homogeneous immunoassay by disruption of conserved salt bridges at diagonal interfaces.", Biochemistry, 62 (2), 309～317 (2023). [PMID:35849118]
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キット内容（100 well / kit）
- Recombinant GUS mixture
- Reaction buffer
- Fluorescent substrate（#DS850のみ）
- Colorimetric substrate（#DS860のみ）
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別途ご用意いただく試薬／器具
- 標的抗原をサンドイッチ可能な抗体（Mouse IgG1）のペア（2種類）
- 精製抗原（検量線作製用）
- 96 wellプレート（測定法に対応したもの）
- 蛍光プレートリーダーまたはマイクロプレートリーダー
蛍光測定（#DS850）：励起：340 nm ／蛍光：450 nm
吸光度測定（#DS860）：主波長：405 nm（補正波長：660 nm）
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ご注意
- 標的抗原がタンパク質の場合、3 μg/ml以上含まれる試料のご使用を推奨します。
- サンドイッチELISAが適用可能な2種類の抗体の組合せであっても、本製品に適さない場合があります。
- 試料溶液の組成によっては、シグナル強度に大きく影響する場合があります。
- 検出感度は、標的抗原および用いる抗体によって異なります。
- ヒト血清／血漿／血液などのイムノグロブリンが多く含まれる試料は、バックグラウンドが高くなるため使用できません。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月29日 20時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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ONEPot Immunoassay Kit, Fluorescent <OpenGUS Method> |
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ONEPot Immunoassay Kit, Colorimetric <OpenGUS Method> |
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[在庫・価格 ：2024年04月29日 20時55分現在]
ONEPot Immunoassay Kit, Fluorescent <OpenGUS Method>
文献数： 0
- 商品コード：DS850
- メーカー：BDL
- 包装：1kit
- 価格：¥63,000
- 在庫：1個
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
タンパク質の測定系を構築するためのキット。変異体β-glucuronidase（GUS）を用いたOpenGUS Immunoassayの原理で測定を行う。標的抗原に対する2種類の抗体（Mouse IgG1）をご用意いただき，測定試料，キット付属の酵素を混合，インキュベートするだけで検出が行える。蛍光測定用。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
ONEPot Immunoassay Kit, Colorimetric <OpenGUS Method>
文献数： 0
- 商品コード：DS860
- メーカー：BDL
- 包装：1kit
- 価格：¥63,000
- 在庫：1個
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
タンパク質の測定系を構築するためのキット。変異体β-glucuronidase（GUS）を用いたOpenGUS Immunoassayの原理で測定を行う。標的抗原に対する2種類の抗体（Mouse IgG1）をご用意いただき，測定試料，キット付属の酵素を混合，インキュベートするだけで検出が行える。吸光度測定用。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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