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ELISAより簡便なイムノアッセイを構築できるキット ONEPot-G1 Immunoassay Kit

掲載日情報:2025/10/02 現在Webページ番号:72781

タンパク質の測定系を構築するためのキットです。変異体β-glucuronidase(GUS)を用いたOpenGUS Immunoassayの原理で測定を行います。
現在幅広く用いられているELISA法と比べて、操作が簡便、必要抗体量が少量で済むなどの利点があります。また、ウエスタンブロッティングと比べて短時間で反応が完了し、より高い定量性を得られます。
ONEPot-G1 Kitでは、従来品のONEPot Kitでは測定できなかったヒト血清、FBSを含む試料での測定が可能となっています。

本製品は上田宏博士、北口哲也博士および朱博博士 他 (国立大学法人 東京工業大学 科学技術創成研究院 (当時)) の研究成果をもとに、BDLが開発、製品化しました。
本製品の元となった技術が論文になりました(プレスリリースはこちら)。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

ONEPot Immunoassay Kit <OpenGUS Method>に関する技術を開発した北口哲也博士(東京科学大学)、朱博博士(東京科学大学)および山崎侑彦氏((株)バイオダイナミクス研究所)が日本生物工学会 第34回生物工学技術賞(受賞タイトル:スイッチ酵素を利用した汎用的な均一系免疫測定法の開発とその商品化)を受賞しました。


特長

  • 2種類の抗体(Mouse IgG1)で標的抗原をサンドイッチして、検出します*1
  • プレートへの抗体の固相化やウェルの洗浄は不要です。
  • 抗体と検出用酵素は混合するだけでアフィニティ結合します。
  • 抗体の使用量を節約できます(96 wellあたり、約2 μg×2種類)。
  • 自動化との相性がよく、また廃液量は少量で済みます。
  • 蛍光測定用キット(#DS852)と吸光度測定用キット(#DS862)があります。

*1 多量体を安定に形成するタンパク質では、1種類の抗体のみで検出できる場合もあります。


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本製品とサンドイッチELISAとの比較

本製品 サンドイッチELISA
抗体の固相化 不要 必要(一晩~)
ウェル洗浄 不要 必要(2~3回)
反応時間 2時間20分 3時間程度
(プレートに抗体の固相化を
行う場合は+1日)
使用抗体量
(96 wellあたり)
約2 μg×2種類 捕捉抗体:約100 μg
検出抗体:~数 μg
検出用抗体 未標識 標識が必要
検出感度
抗原の種類 任意のものを測定可能
検出方法 蛍光または吸光
自動化との相性
廃液量 30 ml程度(96 well分) 200 ml程度(96 well分)

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原理

大腸菌のβ-glucuronidase(GUS)は四量体を形成することで活性を示します。本製品に用いられている変異体GUSは、二量体は形成するものの、四量体はほとんど形成しません。
本製品は、抗体結合ドメインを融合させた変異体GUSです。抗原抗体反応を介して変異体GUSの二量体同士が連結し、強制的に四量体が形成されます。このGUS四量体の酵素活性によって、抗原濃度依存的なシグナルが得られます。

ONEPot Kit原理

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操作方法概略

  1. OpenGUS probe G1と抗体(2種類)の混合液と、希釈した測定試料を混合する。
  2. 4℃で60分間静置した後、基質反応温度*2で20分静置する。
  3. 基質を添加した後、60分間静置する。
  4. 蛍光または吸光度を測定する。

*2 蛍光測定用キットの場合は25℃、吸光測定用キットの場合は37℃で実施。


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使用例:健常ヒト血清およびリウマチ患者血清のC-Reactive Protein(CRP)濃度の測定

健常ヒト血清(8名)およびリウマチ患者血清(6名)のC-Reactive Protein(CRP)濃度を、ELISAおよび本製品で測定した。

健常ヒト血清(8名)およびリウマチ患者血清(6名)のC-Reactive Protein(CRP)濃度の測定例

リウマチ患者の血清においてCRP濃度が上昇していることを、ELISAおよび本製品で同様に確認した(バーは平均値を示す)。

ELISAとONEPot-G1による測定結果の相関性

ELISAおよび本製品で測定した血清中CRP濃度は高い相関を示した。

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原著文献

  1. Su, J., et al., "Noncompetitive homogeneous immunodetection of small molecules based on beta-glucuronidase complementation.", Analyst, 143(9), 2096-2101(2018). [PMID:29634056]
  2. Su, J., et al., "Creation of stable and strictly regulated enzyme switch for signal-on immunodetection of various small antigens.", J. Biosci. Bioeng., 128(6), 677-682(2019). [PMID:31235413]
  3. Su, J., et al., "Transmembrane signaling on a protocell: Creation of receptor-enzyme chimeras for immunodetection of specific antibodies and antigens.", Sci. Rep., 9(1), 18189(2019). [PMID:31796769]
  4. Zhu, B., et al., "Creating a thermostable beta-glucuronidase switch for homogeneous immunoassay by disruption of conserved salt bridges at diagonal interfaces.", Biochemistry, 62(2), 309-317(2023). [PMID:35849118]
  5. Zhu, B., et al., "Customizable OpenGUS immunoassay: A homogeneous detection system using β-glucuronidase switch and label-free antibody.", Biosens. Bioelectron., 267, 116796(2025). [PMID:39316870]

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キット内容(100 well / kit)

  • OpenGUS probe G1
  • Reaction buffer
  • Fluorescent substrate(#DS852のみ)
  • Colorimetric substrate(#DS862のみ)

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別途ご用意いただく試薬/器具

  • 標的抗原をサンドイッチ可能な抗体(Mouse IgG1)のペア(2種類)
  • 精製抗原(検量線作製用)
  • 96 wellプレート(測定法に対応したもの)
  • 蛍光または吸光マイクロプレートリーダー
      蛍光測定(#DS852):励起:340 nm /蛍光:450 nm
      吸光度測定(#DS862):主波長:405 nm(副波長:660 nm)

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ご注意

  • 対象とする抗原が40 nM以上含まれる試料を推奨します(200倍希釈して0.2 nMとして測定することを想定)。
  • 抗原をサンドイッチすることができる2種類のmouse IgG1が必要です。
  • 抗原が多量体を形成する場合は、1種類の抗体のみで検出できることもあります。
  • 試料溶液の組成にシグナル強度が大きく影響される場合があります。
  • 検出感度は抗原および抗体によって異なります。

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価格

[在庫・価格 :2025年10月08日 20時35分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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納期 文献数
ONEPot-G1 Immunoassay Kit, Fluorescent <OpenGUS Method>
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
タンパク質の測定系を構築するキット。ヒト血清,FBSが含まれるサンプルの測定も可能。OpenGUS Immunoassayの原理で測定を行う。標的抗原に対する2種類の抗体(Mouse IgG1)をご用意いただき,測定試料,キット付属の酵素を混合,インキュベートするだけで検出が行える。蛍光測定用。
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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