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ヒドロキシプロリンおよびコラーゲン定量キット QuantiChrom Hydroxyproline Assay Kit

掲載日情報:2021/07/01 現在Webページ番号:70063

試料中のヒドロキシプロリン(Hydroxyproline)およびコラーゲン(Collagen)含量を、比色法により安全、簡便かつ高感度で定量するキットです。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

検量線例

ヒドロキシプロリン検量線例

ヒドロキシプロリン検量線例

コラーゲン検量線例

コラーゲン検量線例

キット品バナー

BioAssay Systems社 アッセイキット Metabolism Research Kitシリーズ Obesity Diabete Research Kits
GoGreen画像

BioAssay Systems社では、2018年1月1日より緑化推進のために製品へのプロトコルの添付を廃止しました。各製品のプロトコルについては、BioAssay Systems社ホームページよりダウンロードしてご利用下さい。

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ヒドロキシプロリンとは

ヒドロキシプロリン(Hydroxyproline)は、コラーゲン(Collagen)などのいくつかの動物性タンパク質にのみ見られるユニークな修飾アミノ酸です。コラーゲンは、細胞外マトリックスの重要な構造タンパク質であり、驚異的な強度を有するために結合組織において一般的に見られます。また、コラーゲンは、動物の重要な構造タンパク質としての役割を有しており、組織移植や複雑な細胞培養の足場などの多くの医療用途にとって非常に重要です。コラーゲンは、組織の剛性の増強を目的として補充できるために美容業界でも使用され、注目されています。

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測定原理

本アッセイでは、試料中のヒドロキシプロリンが酸化されてピロール環になります。この化合物は、キットに含まれるDye reagentと反応してピンク色に発色します。560 nmにおける吸光度は、試料中のヒドロキシプロリン濃度に比例します。また、ヒドロキシプロリンは、ほぼコラーゲンにのみ見られるため、ヒドロキシプロリン含有量は、コラーゲン含有量としても代用できます。

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特長

  • 過塩素酸塩を使用していないため、安全です。
  • アッセイフォーマット:96 wellプレート
  • 測定動物種:全動物種
  • 測定試料:生物試料および化粧品試料
  • 必要試料量:20μl
  • 測定方法:比色
  • 測定波長:560 nm
  • インキュベーション時間(温度):90分(37℃)
  • 測定範囲:0.5~50μg/ml(ヒドロキシプロリン)
  • 検出限界:0.5μg/ml
  • アッセイ数:100 tests

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操作方法概略

  1. 製品データシートを参照し、標準物質(0、15、30、50μg/ml ヒドロキシプロリン)を調製する。
  2. 標準物質と試料の各20μlを透明平底96 wellマイクロプレートの別々のウェルに入れる。
  3. 1ウェル当たり、Reagent A 8μlとOxidation buffer 90μlを混合したものを用意する。この混合液90μlを各ウェルに加える。プレートをタップして混合し、室温下で10分間インキュベートする。
  4. Reagebt B 90μlをすべてのウェルに加える。この際に濁りを生じるために、ピペッティングにより濁りを均一にする。
  5. 37℃で90分間インキュベートし、その時点の560 nmの吸光度を測定する。

コラーゲン含有試料の加水分解方法

本製品は遊離のヒドロキシプロリンを測定するため、コラーゲン含有試料は測定前に加水分解を行う必要があります。試料を加水分解するには、試料50μlを入れたエッペンドルフチューブに、まず10N NaOHを50μl加え、その後チューブを100℃で1時間加熱します(固形試料の場合には、より長い時間の加熱が必要な場合があります)。チューブを冷却後、10N HClを50μl加えて中和します。次に、試料と同量の脱イオン水150μlを加え希釈し、2分間遠心分離して残留物を沈殿させ、可溶分全量を回収します。


コラーゲン含有量への換算方法

50μg/mlのヒドロキシプロリンは、5 mg/dl、または50 ppmに相当します。ヒドロキシプロリンはコラーゲン中に重量比で平均13%含まれています。1μg/mlのヒドロキシプロリンは、7.69μg/mlのコラーゲン(1/0.13量)に相当します。


換算例

Bovine Skin Collagen Solution(Sigma-Aldrich、#C4243-20 ml)を上記の操作方法にしたがって消化し、コラーゲン含量を3.3±0.2 mg/mlと決定した。

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キット内容

  • Reagent A/B
  • Oxidation buffer
  • Hydroxyproline standard

キットには、透明平底96 wellマイクロプレートは含まれていません。別途ご用意下さい。比色法による測定にはマイクロプレートリーダーが必要です。

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FAQ

Q-1. 固体のコラーゲン試料(軟骨、腱など)を加水分解する方法を教えて下さい。

A-1. 水がすべて除去されるまで、乾燥オーブンで試料を乾燥させます(湿重量を測定できますが、乾式の方が正確です)。エッペンドルフチューブに加水分解する試料 150 mg当たり6N NaOH 50μlを加えます。ヒートブロックで100℃で1~2時間加熱します。チューブを冷却後、 等量の10N HClを加えて中和します。加えたNaOHとHClの量と等量の脱イオン水を加えます。(加水分解手順は操作方法概略をご参照下さい)。


Q-2. Hydroxyproline standardを加水分解する必要がありますか?

A-2. Hydroxyproline standardとブランクは、加水分解を受けるかどうかに関係なく非常に類似していることが分かっています。したがって、本製品では、Hydroxyproline standardの加水分解処理は不要です。


Q-3. 別の温度で最後のインキュベーションを行うことができますか?

A-3. インキュベーションは45℃で50分間に設定できます。プロトコルでは、37℃を使用するようにしています。これは、プレートリーダーまたは組織培養用のインキュベーターで行えるようにするためです。一部のプレートリーダーは45℃に加熱できない場合があります。


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関連製品

品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 商品コード 測定試料 測定方法 測定波長 製品概要
EnzyFluo Collagen Assay Kit ECOL-100 生物試料(血清、血漿、細胞)、化粧品試料 蛍光 励起 375 nm
/蛍光 465 nm
試料中のコラーゲンを先ず酵素分解し、得られたペプチドを蛍光発色試薬と反応させ、蛍光法により簡便、迅速かつ高精度で定量するキット。


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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 20時15分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
QuantiChrom Hydroxyproline Assay Kit
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説明文
ヒドロキシプロリン(Hydroxyproline)およびコラーゲン(Collagen)の定量キット。種交差性:全動物種,測定試料:生物試料および化粧品試料,測定範囲:0.5~50μg/ml,感度:0.5μg/ml,検出方法:呈色,測定波長:560 nm,アッセイ数:100 tests
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 4℃ 法規備考
掲載カタログ

製品記事 ヒドロキシプロリン測定キット
BioAssay Systems社 アッセイキット選択ガイド/製品リスト
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[在庫・価格 :2024年03月29日 20時15分現在]

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QuantiChrom Hydroxyproline Assay Kit

文献数: 0

説明文 ヒドロキシプロリン(Hydroxyproline)およびコラーゲン(Collagen)の定量キット。種交差性:全動物種,測定試料:生物試料および化粧品試料,測定範囲:0.5~50μg/ml,感度:0.5μg/ml,検出方法:呈色,測定波長:560 nm,アッセイ数:100 tests
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 4℃ 法規備考
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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