ヒト組織切片をヒト抗体で免疫染色できます！ Human on Human（H.O.H.）Immunodetection Kit

※ タンパク質のブロッキング（PART 2. 免疫組織染色法の#4）が完了後に使用できるように準備を行って下さい。ヒト抗体溶液の準備が間に合わない場合、ブロッキング時間を延長することができます。

※ S/N比は、以下のいずれかの方法で最適化を行うことができます。

要訳

ヒト抗体またはヒト化抗体は、がんや自己免疫疾患などの治療に広く使用されています。このような抗体医薬品の開発においては、免疫染色による組織交差反応性の評価（抗体が標的組織に結合し、目的以外の組織には結合しないことの確認） が欠かせません。
しかし、抗ヒト抗体を用いて検出する標準的な免疫組織染色（IHC）では、高濃度の内在性ヒト抗体が存在し、二次抗体は内在性Ig とヒト型またはヒト化された抗体医薬品を区別できません。そのためバックグラウンドが高くなってしまい、抗体の評価を行うのに実用的ではありませんでした。
その問題の解決のため、一次抗体の使用量の削減、インキュベーション時間の短縮する方法がありますが、この場合では高感度が得られなくなります。また、一次抗体をハプテンタグ（通常はビオチン、またはFITC）との結合によってもこの問題の解決することが可能ですが、薬剤特性が変化する懸念を生じます。さらにヒト抗体を抗ヒトIgG二次抗体と事前に複合化し、ヒト血清で未結合の二次抗体をブロックする方法もありますが、二次抗体とヒト抗体の比率の最適化し、かつバックグラウンドを効果的に排除することが難しいという問題がありました。

本製品はヒト抗体／ヒト化抗体を用いてヒト組織を染色できるキットです。ヒト、ヒト化、またはキメラのヒト一次抗体による、内在性ヒトIg の非特異的染色を減少させ、目的の抗原を特異的に染色できます。さらに標識効率や試薬調製における煩雑な条件検討が不要のため、手間と時間やコストも節約することができます。

Q-1. H.O.H Kitは自動染色装置で使用できますか？

A-1. 一次抗体の調製後、自動染色装置を使用した検出が可能です。しかし、インキュベーション時間が短いため、自動染色装置を使用しても、手動染色より操作時間を節約できない場合がございます。

Q-2. H.O.H Kitはキメラ抗体の検出に使用できますか？

A-2. 本キットはキメラ抗体を検出します。本キットはヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体などのヒトIgGを幅広く確実に検出するよう開発されました。

Q-3. H.O.H Kitを免疫蛍光染色法で使用できますか？

A-3. 免疫蛍光染色法での使用は推奨しておらず、サポートできません。本キット構成品には、HRP標識二次抗体と組み合わせて使用することで高感度の検出が可能なDAB試薬が含まれています。構成品を変更して免疫蛍光染色を行う場合、特異性または感度が低下する可能性があります。

Q-4. バックグラウンド染色が見られた場合、どのようにプロトコールを最適化すれば良いですか？

A-4. 特定の組織でバックグラウンドの染色が見られた場合、一次抗体の量を変更するか、一次抗体のインキュベーション時間を変更することをおすすめします。加えて、HRP標識検出抗体の濃度やそのインキュベーション時間を調整することでS/N比の改善につながる場合があります。