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伸長速度が速く、各種PCR阻害物質への耐性があるマスターミックス repliQa HiFi ToughMix
掲載日情報：2023/07/10 現在Webページ番号：68199
速い伸長速度、高いFidelity、高感度、高収量で、各種PCR阻害物質への耐性を有し、長鎖および幅広いGC含量のテンプレートに対応した2×PCRマスターミックスです。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
図1：幅広いGC含量の試料からの増幅例
ゲノムDNA試料からの様々なGC含量および長さの標的物の増幅を、各社PCRマスターミックスのそれぞれの推奨プロトコルに従って各2回ずつ行った。
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特長
- 野生型Taqより90倍以上高いFidelityです。
- 幅広いGC含量（32～70％）のテンプレートから増幅が行えます（図1参照）。またGCエンハンサーの併用により、GCリッチなテンプレートの増幅も可能です（図7参照）。
- 従来品よりも2～3倍の速さでPCR産物が得られます（図2参照）。
- エタノール、ヘモグロビン、キシレンなど幅広いPCR阻害物質に耐性があり、粗精製およびPCRが困難な試料からの増幅が可能となります（図3参照）。
- 高感度かつ高収量でPCR産物が得られます（図4参照）。
- ゲノムDNAで≧24 kb（図5参照）、λDNAで≧40 kb（図6参照）の長鎖DNA増幅が行えます。
- 遺伝子組換えDNAポリメラーゼとホットスタート抗体を配合しています。
- 5'→3'ポリメラーゼ活性、および3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を有しており、平滑末端産物を生成します。
- ウラシルの増幅および、イノシンやウラシルを含有するプライマーの使用が可能です。
マスターミックスの組成
2× reaction buffer containing optimized concentrations of MgCl2, dNTPs, proprietarily formulated HiFi polymerase, hot start antibodies and ToughMix chemistry
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適用
- 通常のPCR
- クローニング
- 増幅物のシークエンシング
- 部位特異的変異導入 など
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使用例
図2：増幅速度の比較
各社のPCRマスターミックスを用い、反応液量50 μlで、それぞれの推奨プロトコルに従って、2 kbの産物の増幅を行った。
図3：PCR阻害物質混在下での増幅
様々なPCR阻害物質を図中に記載の量混在させた条件下で、2 kbのλDNAをテンプレートとして、各社PCRマスターミックスを用い、それぞれの推奨プロトコルに従って増幅を各2回ずつ行った。
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図4：増幅効率および収量の比較
ゲノムDNA試料からの様々なGC含量および長さの8種類の標的物の増幅を、各社PCRマスターミックスのそれぞれの推奨プロトコルに従って各2回ずつ行った。
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図5：ゲノムDNA試料からの長鎖産物の増幅例
ゲノムDNA試料からの様々なGC含量および長さ（3.6、8.5、17.5、24 kb）の標的物の増幅を、各社PCRマスターミックスのそれぞれの推奨プロトコルに従って各2回ずつ行った。
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図6：λDNA試料からの長鎖産物の増幅例
λDNA試料からの様々なGC含量および長さ（10、20、30、40 kb）の標的物の増幅を、各社PCRマスターミックスのそれぞれの推奨プロトコルに従って各2回ずつ行った。
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図7：GCエンハンサーを添加した場合の増幅困難なGCリッチのテンプレートについての特異性と収率の向上
GCエンハンサーであるDMSO（5%、GCE2）とBetaine（1M、GCE1）を添加した場合のrepliQa HiFi ToughMixのGC含量の高いテンプレート（>70%）における増幅能力について検証を行った。どちらのエンハンサーも、ポリメラーゼ活性を阻害することなくPCR増幅中の標的産物の特異性と収量を大幅に向上することが示された。しかし、両方を追加した場合（GCE3）では、増幅効果は見られなかった。
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GCエンハンサーの添加を行わず、本製品単独でのGC含量の高いテンプレートの増幅
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A：GC含量77.1%のFCXテンプレートの増幅 | B：L29074:13738（GC含量：82.5%）およびL29074:13712（GC含量：79.8%）の増幅 |
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※ 使用したプライマーの配列情報（Forword/Reverse）
- AF064849：ATCCCCCACCCCCGCACC/GGGCGCGAGATGGGCTGC（ターゲットのGC含量：78.5%、長さ：149 bp）
- IGFBP-3：GCCCCGGTTGCAGGCGTCATG/GCACGGCTGGCCCTCGCTCAG（ターゲットのGC含量：78.2%、長さ：261 bp）
- L29074:13738：CGGTGGAGGGCCGCCTCTGA/GCCATTGGAGCCCCGCACTTC（ターゲットのGC含量：82.5%、長さ：263 bp）
- L29074:13712：GCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCCGGT/AGCGCCATTGGAGCCCCGCACTTCCA（ターゲットのGC含量：79.8%、長さ：292 bp）
- FCX：GCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCCGGT/AGCCCCGCACTTCCACCACCAGCTCCTCCA（ターゲットのGC含量：77.1%、長さ：281 bp）
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技術情報
ウェビナー：Accelerating Genomic Discoveries Through Innovation: New repliQa HiFi ToughMix（2020年5月実施）
ポスター／アプリケーションノート
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使用文献
- Quail, M.A., et al., "Identifying the best PCR enzyme for library amplification in NGS.", Microb. Genom., 10 (4), 001228 (2024). [PMID:38578268]
上記論文で著者達は、市販の20種類以上の高fidelity PCR酵素ミックスにより増幅したDNA試料を用い、NGSライブラリーを調製した。その結果、repliQa HiFi ToughMixはIllumina（ショートリード）およびPacBio（ロングリード）ライブラリーのいずれの調製においても、高収量かつGC含量の異なるゲノムDNA試料において一貫した増幅が行え、均一なカバレッジを示した。
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Quantabio社PCRマスターミックスの一覧
品名をクリックすると各製品の詳細をご覧いただけます。
| 品名 | AccuStartⅡ PCR SuperMix | sparQ HiFi PCR Master Mix | AccuStartⅡ PCR ToughMix | repliQa HiFi ToughMix | AccuStart Long Range SuperMix | |
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| 用途 | 通常のPCR | 高いFidelity | PCR阻害物質への耐性 | 高いFidelity、 PCR阻害物質への耐性 |
長鎖PCR | |
| マスターミックスの濃度 | 2× | 2× | 2× | 2× | 4× | |
| PCR産物のサイズ | 最大4 kb | 最大4 kb | 最大4 kb | 最大24 kb | 最大24 kb | |
| 伸長速度 | 60 sec/kb | 30 sec/kb | 60 sec/kb | 1～10 sec/kb | 30～60 sec/kb | |
| マルチプレックスPCR | － | － | － | － | 最大6標的 | |
| Taqと比較したFidelity | 1× | 80× | 1× | 90× | 10～12× | |
| dUの利用 | × | × | × | ○ | ○ | |
| 5'→3'エキソヌクレアーゼ活性 | ○ | N/A | ○ | N/A | N/A | |
| 3'→5'エキソヌクレアーゼ活性 | N/A | ○ | N/A | ○ | ○ | |
| PCR産物の末端形状 | 3' dAオーバーハング | 平滑末端 | 3' dAオーバーハング | 平滑末端 | 平滑末端／ Tオーバーハング | |
| 適 用 |
ルーチンのPCR | ★ | － | ★ | ★ | ★ |
| 高いFidelityを要するPCR | － | ★ | － | ★★ | ★ | |
| 粗精製試料からのPCR | － | － | ★ | ★★ | － | |
| 高速PCR | － | － | － | ★★ | － | |
| 長鎖PCR | － | － | － | ★ | ★★ | |
| 高収量 | ★ | － | － | ★★ | ★ | |
| NGSライブラリーの増幅 | － | ★★ | － | ★ | － | |
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価格
[在庫・価格 ：2025年08月26日 00時01分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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repliQa HiFi ToughMix (25reactions) |
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repliQa HiFi ToughMix (100reactions) |
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repliQa HiFi ToughMix (500reactions) |
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[在庫・価格 ：2025年08月26日 00時01分現在]
repliQa HiFi ToughMix (25reactions)
文献数： 0
- 商品コード：95200-025
- メーカー：QTB
- 包装：1kit
- 価格：¥13,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 高いPCR阻害物質耐性を有するPCRマスターミックス。伸長速度にも優れ，最大24 kbの長鎖DNAの増幅に適している。ルーチン作業から粗精製試料のPCRまで幅広く使用可能。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2020年12月1日号 p.28
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | Quanta Biosciences社Webinarのお知らせ （高速伸長を行える新しいPCRマスターミックスのご紹介） |
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repliQa HiFi ToughMix (100reactions)
文献数： 0
- 商品コード：95200-100
- メーカー：QTB
- 包装：1kit
- 価格：¥51,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 高いPCR阻害物質耐性を有するPCRマスターミックス。伸長速度にも優れ，最大24 kbの長鎖DNAの増幅に適している。ルーチン作業から粗精製試料のPCRまで幅広く使用可能。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2024年11月15日号 p.15
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| 製品記事 | |||
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repliQa HiFi ToughMix (500reactions)
文献数： 0
- 商品コード：95200-500
- メーカー：QTB
- 包装：1kit
- 価格：¥252,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 高いPCR阻害物質耐性を有するPCRマスターミックス。伸長速度にも優れ，最大24 kbの長鎖DNAの増幅に適している。ルーチン作業から粗精製試料のPCRまで幅広く使用可能。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2020年12月1日号 p.28
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| 製品記事 | |||
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