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長鎖DNAの高感度増幅およびマルチプレックス増幅に適したPCRマスターミックス AccuStart Long Range SuperMix

掲載日情報:2020/02/03 現在Webページ番号:68159

長鎖標的DNAの増幅に適した4×のPCRマスターミックスです。2種類のホットスタート熱安定性DNAポリメラーゼ(うち1種類は強力なプルーフリーディング活性を有する)と最適化されたバッファーをブレンドしました。幅広いサイズの標的について、高い効率、感度、および特異性で増幅が行えます(図1参照)。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


AccuStart-Long-フラグメント長と収量の比較

図1:増幅断片長に対する収量の比較
各社の長鎖DNA用酵素を用い、反応液量50μlで、それぞれの推奨プロトコルに従って、β-グロビン(8.5 kb)およびtPA(24 kb)の増幅を行った。ゲノムDNAは、それぞれ5 ng(8.5 kb)および25 ng(24 kb)を用いた。
本製品は、8.5 kb、24 kbいずれの標的においても高い収量で増幅が行われた。
PCR条件:95°C(3分)で活性化
     92°C(30秒)、65°C(6分:8.5 kb/12分:24 kb)、72°C(10分)を27サイクル
電気泳動条件:0.5%アガロースゲル

AccuStart-Long-感度と収量の比較

図2:感度と収量の比較
各社の長鎖DNA用酵素を用い、反応液量50μl、試料DNA量100 pg~10 ngで、それぞれの推奨プロトコルに従って、β-グロビン(8.5 kb)の増幅を行った。
本製品は、わずか100 pgの試料からも増幅が行われた。
PCR条件:95°C(3分)で活性化
     92°C(30秒)、65°C(6分)、72°C(10分)を30サイクル
電気泳動条件:0.5%アガロースゲル


特長

  • ゲノムDNAから最大24 kb、λDNAから最大40 kbの標的DNAを簡単に増幅できます。
  • 精度はTaqの10倍以上のfidelityです。
  • 少量(100 pg)試料からも高感度増幅が可能です(図2参照)。
  • 幅広いGC含有量の標的に対応しており、個別のGCバッファーは不要です。
  • 最大6 kbの長さで、6種類までの標的をマルチプレックス増幅することが可能です(図3参照)。
  • 1液組成の安定なマスターミックスにより、ピペッティング時のエラーや操作時間を最小限に抑えます。
  • ISO 13485認証取得の設備にて製造されており、ロット間の再現性が高く、一貫した結果が得られます(図4参照)。
  • エンドポイントPCR、Sanger法シークエンシングのテンプレート調製、NGS、クローニング、HLAタイピングなどに使用できます。

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使用例

AccuStart-Long-マルチプレックス増幅の例

図3:6種類の標的でのマルチプレックス増幅の例
10 ngのヒトゲノムDNAをテンプレートにして、BRCA 1(2 kb、3 kb、4 kb、5 kb)およびBRCA 2(1 kb、6 kb)の6種類の標的をマルチプレックス増幅した。
本製品は6種類のサイズが異なる標的のマルチプレックス増幅が可能であった。
PCR条件:95°C(2分)で活性化
     92°C(30秒)、65°C(8分)、72°C(10分)を27サイクル
電気泳動条件:0.7%アガロースゲル


AccuStart-Long-ロット間の一貫性

図4:ロット間の一貫性について
本製品3ロット(1~3)を用い、反応液量50μlで、推奨プロトコルに従って、β-グロビン(8.5 kbおよび17.5 kb)とtPA(24 kb)の増幅を各2回ずつ行った。試料DNAは、それぞれ5 ng(8.5 kb)、10 ng(17.5 kb)、25 ng(24 kb)を用いた。
各ロットとも一貫性のある増幅結果が得られた。
PCR条件:95°C(3分)で活性化
     92°C(30秒)、65°C(6分:8.5 kb/8分:17.5 kb/12分:24 kb)、72°C(10分)を27サイクル
電気泳動条件:0.5%アガロースゲル


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技術情報

Application Note:Targeted Long Range Sequencing using AccuStart Long Range SuperMix
(A4版6ページ、英語、クリックするとダウンロードできます)

ウェビナー:Stretching the Limits of Long Read Sequencing: New AccuStart Long Range SuperMix(2020年7月実施)
クリックすると録画版をQuanta Biosciences社Webでご覧になれます。


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Quantabio社PCRマスターミックスの一覧

品名をクリックすると各製品の詳細をご覧いただけます。

品名 AccuStartⅡ PCR SuperMix sparQ HiFi PCR Master Mix AccuStartⅡ PCR ToughMix repliQa HiFi ToughMix AccuStart Long Range SuperMix
用途 通常のPCR 高いFidelity PCR阻害物質への耐性 高いFidelity、
PCR阻害物質への耐性
長鎖PCR
マスターミックスの濃度
PCR産物のサイズ 最大4 kb 最大4 kb 最大4 kb 最大24 kb 最大24 kb
伸長速度 60 sec/kb 30 sec/kb 60 sec/kb 1~10 sec/kb 30~60 sec/kb
マルチプレックスPCR 最大6標的
Taqと比較したFidelity 80× 90× 10~12×
dUの利用 × × ×
5'→3'エキソヌクレアーゼ活性 N/A N/A N/A
3'→5'エキソヌクレアーゼ活性 N/A N/A
PCR産物の末端形状 3' dAオーバーハング 平滑末端 3' dAオーバーハング 平滑末端 平滑末端/
Tオーバーハング

ルーチンのPCR
高いFidelityを要するPCR ★★
粗精製試料からのPCR ★★
高速PCR ★★
長鎖PCR ★★
高収量 ★★
NGSライブラリーの増幅 ★★

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価格

[在庫・価格 :2025年08月29日 15時55分現在]

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AccuStart Long Range SuperMix
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最大24 kbの長鎖DNAの増幅に適したPCRマスターミックス。100 pgという微量テンプレートからも高効率かつ高い特異性で増幅が行える。
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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