プレインキュベーション不要！細胞質へ導入するタンパク質トランスフェクション試薬 ProteoCarry ＜Protein Transfection Reagent＞

タンパク質およびデキストランなどの生体高分子を細胞内，特に細胞質に導入する試薬です。従来のタンパク質トランスフェクション試薬は導入タンパク質がエンドソーム／リソソームで滞留することが問題視されていましたが，本製品はタンパク質を細胞質に高効率に輸送することができるため，導入タンパク質の細胞内機能の評価や，抗体導入による機能阻害誘導など幅広い実験に使用できます。また従来品と異なり，タンパク質とのプレインキュベーション不要で複合体を形成しないため，タンパク質の機能に与える影響を最小限に留められます。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

※アッセイ回数はデータシートに記載されたプロトコル例を基にした目安です。実験方法・条件によって変動します。

HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC

※導入効率は細胞種，細胞数やタンパク質の種類などさまざまな要因によって変動します。上記は目安であり，実験毎に最適化することをお勧めいたします。

HeLa細胞へ蛍光標識Dextran（Dextran-FL；平均分子量10kDa, 培地に対する終濃度200μg/ml）を導入した。Dextran-FLのみを細胞に添加した場合（―）はドット状の蛍光シグナルが観察されるものの細胞質ではほとんど蛍光シグナルが観察されなかった。一方，本製品を用いた場合は細胞質全般に蛍光シグナルが観察され，Dextran-FLが細胞質に取り込まれていることが分かる。

プロトコール概要

HeLa細胞へ蛍光標識IgG抗体（IgG-FL，培地に対する終濃度50 or 500μg/ml）を導入した。IgG-FLのみを細胞に添加した場合（―），エンドサイトーシスで取り込まれドット状の蛍光シグナルが観察され，エンドソームおよびリソソームに留まっていることが分かる。一方，本製品を用いた場合は，ドット状のエンドソーム構造も観察されるが，細胞質から蛍光シグナルが観察され，エンドソームから細胞内に拡散していることが分かる。
※ 蛍光シグナルで細胞質の拡散を観察する場合，エンドソームに比べ細胞質の体積が大きいためシグナルが希釈されます。導入する蛍光標識因子の量が少ないと，細胞質まで拡散していてもエンドソーム由来の蛍光シグナルが際立って観察される可能性があります。細胞質での蛍光シグナルの検出には，比較的高濃度の蛍光標識タンパク質を添加することを推奨しています。

プロトコール概要

HeLa細胞へ蛍光標識した抗核膜孔複合体 (Nucleus pore complex；NPC) 抗体（Anti-NPC-FL；培地に対する終濃度50μg/ml）を導入した。蛍光標識抗体のみを細胞に添加した場合（―），ドット状の蛍光シグナルが観察されるのみだが，本製品を用いた場合は，核膜構造が明瞭に観察されており，抗NPC抗体が細胞質に取り込まれたのち核膜構造に結合していることが分かる。

プロトコール概要

HeLa細胞へ核局在シグナル（NLS）配列を有するEGFP組換えタンパク質（NLS-EGFP，培地に対する終濃度10μM）を導入した。NLS-EGFPのみを細胞に添加した場合（―），エンドサイトーシスで自発的に取り込まれドット状の蛍光シグナルが観察され，エンドソームおよびリソソームに留まっていることが分かる。一方，本製品を用いた場合は，ドット状のエンドソーム構造も観察されるが，蛍光シグナルは主に核に局在しており，NLS-EGFPが細胞質に取り込まれたのち核に移行していることが分かる。

プロトコール概要

Cre recombinase非存在時にはDsRedが発現し，Cre recombinase存在時にのみ組換えが起こりGFPを発現するようにデザインされたプラスミド（loxP-DsRed-Stop-loxP-EGFP）をHeLa細胞に遺伝子導入した。プラスミド導入翌日にDsRedを発現しているHeLa細胞に対して，本製品を用いてHisタグ融合タンパク質として発現・精製したCre recombinase（培地に対する終濃度10μM）を導入した。細胞内導入されたCre recombinaseに依存してGFPが発現しており，本製品がCre recombinaseの機能を維持したまま細胞質に導入できることが分かる。

プロトコール概要

Saporinは植物由来のタンパク質で，リボソームに直接結合しRNAグリコシダーゼ活性によりリボソームを不活性化することで細胞死を誘導する毒素タンパク質である。
RAW264.7細胞へSaporin（培地に対する終濃度10μg/ml）を導入した。Saporinのみを細胞に添加した場合の細胞生存率は75％程度であったが，本製品を用いた場合は，大部分が死滅していることが分かる。本製品により，Saporinが酵素活性を維持したまま細胞質に輸送され，リボソームに作用していることを示している。

プロトコール概要

ProteoCarryの細胞内局在性を観察するため，蛍光標識したProteoCarryをHeLa細胞に添加し，蛍光シグナルを共焦点レーザー顕微鏡で観察した。蛍光シグナルは原理通りエンドソームから観察されたものの，細胞質からはほとんど観察されなかった。ProteoCarryはエンドソーム膜を傷害後もエンドソーム膜結合したまま留まっていると考えられる。