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スフェロイド・細胞塊用の透明化試薬 Visikol HISTO-M

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:68013

スフェロイド、オルガノイド、細胞塊、Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬です。スフェロイドなどについて、組織内部を蛍光プローブ検出や免疫染色により観察できるため、これらをモデル組織として用いた創薬研究に有用です。

新しい可逆性組織透明化試薬  Visikol HISTO

各種組織切片用の透明化試薬Visikol HISTOについてはこちらをご覧下さい。

組織培養試料の観察について

スフェロイド、オルガノイド、細胞塊、Microtissue(微小培養組織)などはモデル組織として、ハイスループットな創薬研究に幅広く用いられています。
しかしながらイメージングを行う際に、通常はスフェロイド全体をガラススライドに貼り付けるホールマウントを行うため、スフェロイド表面しか測定を行えません。また、スフェロイド内部の情報を得るために、スフェロイドを連続切片として切断する手法もありますが、作製が困難かつ、多くの作業時間を要します。

Visikol HISTO-Mでスフェロイドを透明化した後、ハイコンテントイメージングシステムなどを用いて測定を行うことにより、スフェロイド内部を含む3Dデータが得られます。

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特長

  • 細胞形態を損なうことなくスフェロイドなどを透明化でき、内部を含む3Dデータが得られます。
  • 蛍光プローブによる検出や免疫染色と組み合わせての測定が可能です。
  • 96ウェルプレートを用いたハイスループット解析に適しています。
  • 96ウェルプレートの1ウェルあたりの使用量は0.1 mlです(30 ml製品で、96ウェルプレート約3枚分)。
  • 免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにしたStarter Kitもあります。
  • 屈折率:1.48
  • 粘度:148 cP (Brookfield Spindle HA-02、100 rpm、22℃にて測定)
  • 組成:有機溶媒ベース

*本製品と組み合わせての使用を検証済みの核染色試薬:DAPI、Hoechst 33342、SYTOX stain(Thermo Fisher Scientific社)、TO-PRO-3(Thermo Fisher Scientific社)



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操作方法概略

操作方法概略
  1. 必要に応じて固定化・透過処理・賦活化処理を行った後、蛍光プローブ、抗体などで染色を行う。
  2. Visikol HISTO-Mで透明化する。
  3. ハイコンテントイメージングシステムなどを用いて測定後、データ解析を行い、3Dデータを得る。


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使用例

細胞生存率 アポトーシス
細胞接着 組織構造

図1:本製品で透明化した試料を用いて、各種アッセイを行った。
左上:細胞生存の観察(Calcein AM染色)、右上:アポトーシス検出(抗Caspase-3抗体)
左下:細胞接着の観察(抗E-cadherin抗体)、右下:組織構造の全体像(H&E染色)


広視野顕微鏡

図2:Microtissueをハイコンテント広視野顕微鏡で観察した例
NCI-H2170細胞(肺がん由来)から作製したMicrotissue(InSphero社)をSYTOX green(Thermo Fisher Scientific社)で核染色後、ハイコンテント広視野顕微鏡で観察した。
A:非透明化試料、B:Visikol HISTO-Mで透明化した試料
非透明化試料(A)では57個、透明化試料(B)では151個の細胞がカウントされた。


共焦点顕微鏡

図3:Microtissueをハイコンテント共焦点顕微鏡で観察した例
NCI-H2170細胞から作製したMicrotissueをSYTOX green(Thermo Fisher Scientific社)で核染色後、ハイコンテント共焦点顕微鏡(CX7、Thermo Fisher Scientific社)でZ軸位置(焦点距離)を移動させながら連続観察した。
A:非透明化試料、B:Visikol HISTO-Mで透明化した試料
非透明化試料(A)ではMicrotissue内部の細胞が光散乱により観察できないが、透明化試料(B)では観察できた。

シスプラチン処理を行ったNCI-H2170 Microtissue(InSphero 社)の透明化

細胞数のカウント

透明化処理によって散乱光の影響を受けず、正確な組織形態の観察/細胞数の計測が行える。

使用例1:Z軸位置20 μmごとの形態観察・細胞数の計測
Microtissueをシスプラチンで処理後、Z軸位置20~120 μmで連続測定し、画像解析ソフト(CellProfiler)を用いて形態観察と細胞数の計測を行った(棒グラフ)。非透明化Microtissueは、散乱光の影響によってMicrotissueの中心部に近づくにつれ少数の細胞しか検出できなかったが、本製品で透明化処理を行った場合は明瞭な観察像が得られ、より正確に細胞数の計測を行うことができた。


用量反応曲線

透明化処理によって、Microtissue の正確な細胞増殖阻害評価が行える。

使用例2:シスプラチンによる増殖阻害活性の評価
非透明化/透明化MicrotissueをZ 軸10μm ごとに観察して、Ki67陽性細胞の割合を計測した(Ki67%)。このKi67%値を元に
(A-1)シスプラチン未処理細胞(Vehicle)に対するKi67%の相対値
(A-2)シスプラチンの増殖阻害活性とIC50値
(B)Ki67%の絶対値
を測定した。
いずれの結果においても、非透明化/透明化試料の測定結果で大きな差が見られた。使用例1で示されたように、非透明化試料では正確な細胞数を計測できないため、不正確な測定結果(阻害活性の過大評価)が出たものと考えられる。


Microtissueの部位

透明化処理によって、Microtissueの部位・深度ごとに薬剤評価を行える。

使用例3: Microtissueの中心部/中間部/外周部それぞれにおけるシスプラチンによる増殖阻害活性の評価
透明化Microtissueを中心部(Inner)、中間部(Middle)、外周部(Outer)の3 部位ごとに分けて増殖阻害活性を評価した。中心部の細胞増殖率が、中間部や外周部とは異なっていることが分かる。

神経スフェロイドにおける神経毒性の評価

本製品を用いてヒト神経スフェロイド(microBrain® 3D、StemoniX社)の透明化を行い、Domoic Acid(DA)の神経毒性を評価した。DAはグルタミン酸アナログで、脳において興奮毒性効果を示すアゴニストとして使われている。

神経スフェロイドにおける神経毒性の評価1

上段:Anti-Glutamine Synthetase
下段: 生細胞/死細胞の染色(ThermoFisher Scientific 社、LIVE/DEAD® Fixable Red Dead Cell Stain)
青色:DAPI(対比染色)

神経スフェロイドにおける神経毒性の評価2
神経スフェロイドにおける神経毒性の評価3

緑色:Anti-MAP2 青色:DAPI a:Control b:DA(10 μM)

スフェロイドをDAで24時間処理したところ、濃度依存的にグルタミン合成酵素(GS)陽性細胞の割合は減少し、死細胞の割合が増加してスフェロイドの平均直径が縮小した(図A、B)。死細胞はスフェロイド中で特定の領域に偏る傾向にあったが、これは培養プレート(384ウェル)内でDAの濃度勾配が生じたことによる影響と考えられる。また、DA(10 μM)で処理した神経スフェロイドではMAP2の発現が減少した(図C)。これらの結果から、長時間興奮毒性状態にさらされたニューロンは、構造的に不安定となる可能性が示された。



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プロトコル

下の画像をクリックすると、Visikol HISTO-Mのプロトコルがダウンロードできます。

スフェロイド・細胞塊用の透明化試薬 Visikol HISTO-M

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価格

■ Visikol HISTO-Mスターターキット
Visikol HISTO-Mに免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにした製品です。各試薬・バッファーは、96ウェルプレート約3枚分となります。
【キット内容】

品名Visikol HISTO-M
Starter Kit
商品コードHMSK-1
包装1 kit
キット
内容
Visikol HISTO-M●(30 ml)
Penetration buffer
Washing buffer
Blocking buffer
Antibody buffer

[在庫・価格 :2024年03月28日 19時15分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
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納期 文献数
Visikol HISTO-M Starter Kit
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬に,免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにした製品。キット内容:Visikol HISTO-M(30ml),Penetration buffer,Washing buffer,Blocking buffer,Antibody buffer
法規制等
保存条件 室温,4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年3月15日号 p.9
ニュース2021年9月15日号 p.17

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[在庫・価格 :2024年03月28日 19時15分現在]

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Visikol HISTO-M Starter Kit

文献数: 0

説明文 スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬に,免疫染色の前処理に用いる各種バッファーをセットにした製品。キット内容:Visikol HISTO-M(30ml),Penetration buffer,Washing buffer,Blocking buffer,Antibody buffer
法規制等
保存条件 室温,4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年3月15日号 p.9
ニュース2021年9月15日号 p.17

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■ Visikol HISTO-M

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Visikol HISTO-M
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スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬。
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掲載カタログ ニュース2022年3月15日号 p.9
ニュース2021年9月15日号 p.17

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スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬。
法規制等
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掲載カタログ ニュース2022年3月15日号 p.9
ニュース2021年9月15日号 p.17

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[在庫・価格 :2024年03月28日 19時15分現在]

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Visikol HISTO-M

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説明文 スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬。
法規制等
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ニュース2021年9月15日号 p.17

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Visikol HISTO-M

文献数: 0

説明文 スフェロイド,オルガノイド,細胞塊,Microtissue(微小培養組織)など組織培養試料用の透明化試薬。
法規制等
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掲載カタログ ニュース2022年3月15日号 p.9
ニュース2021年9月15日号 p.17

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■ バッファー別売品

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Visikol HISTO Antibody Buffer
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,一次抗体・二次抗体の希釈に使用する。
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Visikol HISTO Antibody Buffer
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,一次抗体・二次抗体の希釈に使用する。
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Visikol HISTO Blocking Buffer
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に非特異的な染色を抑えるため使用する。
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に非特異的な染色を抑えるため使用する。
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Visikol HISTO Penetration Buffer
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,抗体が組織に浸透しやすくする。
法規制等
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Visikol HISTO Penetration Buffer
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,抗体が組織に浸透しやすくする。
法規制等
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Visikol HISTO Washing Buffer 10X
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に使用する。
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免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に使用する。
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Visikol HISTO Permeabilization Buffer
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Visikol HISTO Antibody Buffer

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説明文 免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,一次抗体・二次抗体の希釈に使用する。
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Visikol HISTO Antibody Buffer

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説明文 免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,一次抗体・二次抗体の希釈に使用する。
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Visikol HISTO Blocking Buffer

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Visikol HISTO Blocking Buffer

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Visikol HISTO Penetration Buffer

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説明文 免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,抗体が組織に浸透しやすくする。
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説明文 免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際,抗体が組織に浸透しやすくする。
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Visikol HISTO Washing Buffer 10X

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説明文 免疫染色に適用可能な組織透明化試薬 Visikol HISTO Starter Kit (#HSK-1) のキット構成品。免疫染色の際に使用する。
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Visikol HISTO Permeabilization Buffer

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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