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DNAメチル化/脱メチル化関連酵素TETの活性を測定するキット Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kit

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:6680

5-メチル化シトシン(5-mC)の水酸化酵素であるTETの活性を、比色または蛍光により測定するキットです。核抽出物中の酵素活性および精製酵素の活性を測定できます。

Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kitの操作方法概略 Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kitの標準曲線

左:Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kitの操作方法概略
右:Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kitの標準曲線


TETとは

水酸化酵素であるTET(ten-eleven translocation)は、TET1~3からなるファミリーを構成しています。TETは5-メチル化シトシン(5-mC)を5-ヒドロキシメチル化シトシン(5-hmC)、5-ホルミル化シトシン(5-fC)、5-カルボキシル化シトシン(5-caC)へと酸化するすべてのステップを触媒し、5-mCの脱メチル化を促すと考えられています。さらに、5-mCからエピジェネティックな作用が異なる3つの誘導体(5-hmC、5-fC、5-caC)を産生することにより、遺伝子発現の制御に重要な役割を果たしていると考えられています。

TET(ten-eleven translocation)

参考文献

Wu, H., et al., Genes Dev., 25, 2436~2452 (2011).


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特長

  • メチル化基質を結合させたプレートにTETを含む試料を添加し、産生したヒドロキシメチル化産物に特異的な抗体を用いて、酵素活性を測定します。
  • 培養細胞や、哺乳動物、植物、真菌、細菌など幅広い生物種の新鮮/凍結組織由来の核抽出物中の酵素活性および精製酵素の活性を測定できます。
  • 少量の試料でも活性を測定できます。
  • TET阻害物質の評価にも適しています。
  • 測定に要する時間は約5時間です。

核抽出物の調製にはEpiQuik Nuclear Extraction Kit I(#OP-0002-1)のご使用をお勧めします。詳細はフナコシホームページをご覧下さい。
TET1関連製品についてはこちらをご覧下さい。

キット名Colorimetric KitFluorometric Kit
核抽出物の使用量2~20μg(至適範囲:5~10μg)
精製酵素の使用量20 ng~1μg10~500 ng
測定波長450 nm励起530 nm/蛍光590 nm

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使用例

Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kit使用例

本製品(#P-3086)を用い、TET1活性を測定した

Epigenase 5mC Hydroxylase TET Activity / Inhibition Assay Kitの使用例2

EpiQuik Nuclear Extraction Kitを用いてマウスES細胞から核抽出物を調製し、本製品を用いてTET1活性を測定した

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操作方法概略

1. プレートにTET substrateとBinding solutionを入れてインキュベートする。
2. 洗浄後、核抽出物または精製酵素を加えてインキュベートする(インキュベート時間は通常、核抽出物で90分、精製酵素で60分)。
3. 洗浄後、Capture antibodyを加える。
4. 洗浄後、Detection antibodyを加える。
5. 洗浄後、Enhancer solutionを加える。
6. 洗浄後、Developer solutionを加え、比色または蛍光により酵素活性を測定する。

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キット内容

  • Wash buffer
  • TET assay buffer
  • TET substrate
  • Binding solution
  • TET assay standard
  • Capture antibody
  • Detection antibody
  • Enhancer solution
  • Co-factor 1~3
  • 8 well assay strip with frame
  • Developer solution (Colorimetric Kit)
  • Stop solution (Colorimetric Kit)
  • Fluoro-developer (Fluorometric Kit)
  • Fluoro-enhancer (Fluorometric Kit)
  • Dilution buffer (Fluorometric Kit)

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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 15時15分現在]

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詳細 商品名
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納期 文献数
Epigenase 5mC-Hydroxylase TET Activity/Inhibition Assay Kit, Colorimetric (48assays)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 35
説明文
5-メチル化シトシン(5-mC)の水酸化酵素TETの活性を,比色法により測定するキット。核抽出物中の酵素活性および精製酵素の活性を測定可能。測定試料:核抽出物,測定範囲:0.05-2.0 ng/μl,感度:20 ng,検出方法:呈色,測定波長:450 nm,アッセイ法:Assay,アッセイ数:48 assays
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 室温,4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
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Niu Y et. al. (February 2015). Oxidative stress alters global histone modification and DNA methylation. Free Radic Biol Med.
He XB et. al. (December 2014). Vitamin C Facilitates Dopamine Neuron Differentiation in Fetal Midbrain Through Tet1- aND Jmjd3-Dependent Epigenetic Control Manner. Stem Cells.
Dubois-Chevalier J et. al. (September 2014). A dynamic CTCF chromatin binding landscape promotes DNA hydroxymethylation and transcriptional induction of adipocyte differentiation. Nucleic Acids Res.
Scola G et. al. (April 2014). Lithium reduces the effects of rotenone-induced complex I dysfunction on DNA methylation and hydroxymethylation in rat cortical primary neurons. Psychopharmacology (Berl).
Haseeb A et. al. (March 2014). Modulation of ten-eleven translocation 1 (TET1), Isocitrate Dehydrogenase (IDH) expression, α-Ketoglutarate (α-KG), and DNA hydroxymethylation levels by interleukin-1β in primary human chondrocytes. J Biol Chem. 289(10):6877-85.
Nettersheim D et. al. (December 2013). Analysis of TET expression/activity and 5mC oxidation during normal and malignant germ cell development. PLoS One. 8(12):e82881.
Coulter JB et. al. (October 2013). Hydroquinone increases 5-hydroxymethylcytosine formation through ten eleven translocation 1 (TET1) 5-methylcytosine dioxygenase. J Biol Chem. 288(40):28792-800.
Haseeb et. al. (November 2012). IL-1 And TNF- Regulate The Global And Locus-Specific Hydroxymethylation Of Genomic DNA By Modulating The Expression And Activity Of Tet-1 In Human OA Chondrocytes. Arthritis Rheum. Abstract
Epigenase 5mC-Hydroxylase TET Activity/Inhibition Assay Kit (Fluorometric)
Schanberg LE et. al. (January 2012). Use of atorvastatin in systemic lupus erythematosus in children and adolescents. Arthritis Rheum. 64(1):285-96.


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(テクニカルサポート 試薬担当)

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