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生細胞中のリソソームを標識できる蛍光プローブ SiR/SiR700-Lysosome Kit

掲載日情報:2017/03/09 現在Webページ番号:65528

生細胞におけるリソソームを特異的かつ低バックグラウンドで蛍光標識するキットです。

使用例

SiR-Lysosome Kit(#CY-SC012)による染色
SiR-Lysosome Kit(#CY-SC012)による染色
  SiR700-Lysosome Kit(#CY-SC016)による染色
SiR700-Lysosome Kit(#CY-SC016)による染色
生きたヒト線維芽細胞を2μMのSiRリソソーム(赤色)およびHoechst(青色)を用いて,37℃で1時間染色し,広視野顕微鏡およびSTED顕微鏡で画像化した   生きたヒト線維芽細胞を1μMのSiR700リソソーム(赤色)およびHoechst(青色)を用いて,37℃で1時間染色し,広視野顕微鏡で画像化した。






SiRプローブ使用例1

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特長

■SiR-Lysosome Kit(#CY-SC012)

  • SiRリソソームは,独自のシリコンローダミン(Silicon rhodamine:SiR)フルオロフォアで標識されたペプスタチンA(Pepstatin A:カテプシンD結合ペプチド)に基づいています。
  • 明るく光安定性のローダミン様の色素ですが,より優れた特性を有します。
  • 蛍光性および細胞透過性で,リソソームに対して高い特異性を有します。
  • 遺伝子操作または過剰発現を用いずに,生細胞中のリソソームを染色します。
  • 近赤外の蛍光のため,細胞に対する光毒性や,細胞の自家蛍光による影響を最小限に抑えます。
  • GFPおよび/またはmCherry蛍光タンパク質との二重蛍光染色に適応します。
  • 標準的なCy5フィルターで画像化できます。
  • 広視野,共焦点,SIMまたはSTED顕微鏡を用いて生細胞および組織を可視化できます。

■SiR700-Lysosome Kit(#CY-SC016)

  • SiR700リソソームは,シリコンローダミン700(Silicon rhodamine 700:SiR700)と呼ばれる独自の近赤外フルオロフォアで標識されたペプスタチンA(Pepstatin A:カテプシンD結合ペプチド)に基づいています。
  • 蛍光性および細胞透過性を有し,リソソームに対して高度に特異的です。
  • 遺伝子操作または過剰発現を用いずに,生存細胞中の初期/後期エンドサイトーシス小胞およびリソソームを染色します。
  • 近赤外の蛍光は,光毒性および試料の自己蛍光を最小限に抑えます。
  • 他のSiRプローブ,GFPおよび/またはmCherry蛍光タンパク質との二重蛍光染色に適応します。
  • 標準的なCy5フィルター,または二重染色用の高解像度フィルターで画像化できます。
  • 広視野,共焦点,SIMまたはSTED顕微鏡を用いて生細胞および組織を画視化できます。
  SiR-Lysosome Kit(#CY-SC012) SiR700-Lysosome Kit(#CY-SC016)
測定波長(励起/蛍光) 652 nm / 674 nm
SiR-Lysosome Kit(#CY-SC012)波長
689 nm / 716 nm
SiR700-Lysosome Kit(#CY-SC016)波長
最大吸収波長における分子吸光係数(εmax 1.0・105 mol-1・cm-1 1.0・105 mol-1・cm-1
分子量(M.W.) 1237.7 g/mol 1262.7 g/mol
分子式(MF) C67H103N9O11Si C69H103N9O11Si
構造式 SiR-Lysosome Kit(#CY-SC012)構造式 SiR700-Lysosome Kit(#CY-SC016)構造式
使用回数 50~200回*の染色実験が可能 35~140回*の染色実験が可能

* プローブ濃度0.5~1μMで,染色液0.5~1 mlを使用した場合。

iR700の標準化された吸光度および蛍光

SiR(青色)およびSiR700(赤色)の標準化された吸光度(実線)および蛍光(点線)スペクトル
励起線(ピンク色の垂直線),SiRチャネル(青色の長方形)およびSiR700チャネル(ピンク色の長方形)をプロットした。



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操作方法概略

  1. SiR/SiR700リソソームのバイアル内容物を無水DMSOに溶解し,1 mMのストック溶液を調製する。
  2. 細胞培養培地(例えば,DMEM+10%FBS)でSiR/SiR700リソソームのストック溶液を希釈し,軽くボルテックスして染色液を調製する。
  3. カバーガラス,ガラス底皿またはガラス底マルチウェルプレート上で,細胞を通常通り増殖させる。
  4. 細胞が望む密度に達したら,培地を染色液に交換する。
  5. 5%CO2を含む加湿型の37℃インキュベーター内に細胞を静置し,細胞染色する。
  6. 標準的なCy5設定を用いて細胞イメージングを行う。

いくつかの細胞株は高レベルの流出ポンプを発現しており,SiR/SiR700リソソームによってほとんど染色されません。その場合はキットに含まれるVerapamilを染色液中に添加すると,通常大幅に染色が改善されます。Verapamilの使用方法の詳細は,こちらをご覧下さい。

SiR700リソソームは,Spirochrome SiRプローブと一緒に使用してデュアルカラーイメージングを行うことが可能です。上記の標準プロトコールに従って,SiR700リソソームおよび第2のSiRプローブ(例えば,SiR-Tubulin,SiR-DNAまたはSiR-Actin)を細胞に同時添加することができます。デュアルカラーイメージングの例については,こちらをご覧下さい。

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参考文献

  • G. Lukinavicius, et al., JACS., 138 (30), 9365~9368 (2016).
  • G. Lukinavicius, et al., Nature Methods, 11, 731~733 (2014).

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キット内容

  • SiR-lysosome(#CY-SC012のみ)
  • SiR700-lysosome(#CY-SC016のみ)
  • Verapamil


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価格

[在庫・価格 :2018年12月19日 20時03分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名 商品コード メーカー 包装 価格 在庫 納期 文献数 リスト
SiR-Lysosome Kit
データシート
CY-SC012 CYOサイトスケルトン
Cytoskeleton, Inc.
1 kit ¥106,000
(未発注)
1週間程度  0 追加

説明文
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 -20℃ 法規備考
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1 kit ¥106,000
(未発注)
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SiR-Lysosome Kit

文献数:0


  • 商品コード:CY-SC012
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格: ¥106,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 

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  • 商品コード:CY-SC016
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格: ¥106,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 

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保存条件 -20℃ 法規備考
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詳細 商品名 商品コード メーカー 包装 価格 在庫 納期 文献数 リスト
SiR-Actin Kit
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CY-SC001 CYOサイトスケルトン
Cytoskeleton, Inc.
1 kit ¥141,000 1個 - 0 追加

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  • 商品コード:CY-SC001
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格: ¥141,000
  • 在庫:1個
  • 納期:-

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説明文 生細胞内のDNAを近赤外色の蛍光プローブで標識するキット。測定波長:吸光:689 nm,蛍光:716 nm,M.V.:974.2 g/mol,化学式:C60H65N9O4Si
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