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リン酸化チロシン、SUMO化1, 2/3 やユビキチン化タンパク質の濃縮用キット Signal-Seeker Phosphotyrosine / SUMOylation /Ubiquitination Detection Kit

掲載日情報:2019/08/30 現在Webページ番号:64654

アフィニティービーズを用いて、細胞や組織中のチロシンリン酸化タンパク質、SUMOylation1、2/3タンパク質 またはユビキチン化タンパク質を濃縮できるキットです。濃縮したタンパク質は、抗リン酸化チロシン抗体または抗ユビキチン抗体を用いたウエスタンブロットにより分析できます。


操作方法概略

Signal-Seeker操作法概略

Signal-Seeker Kitの操作フロー


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Signal-Seeker Detectionについて

Signal-Seeker Detectionについて (クリックで開閉します)

シグナル伝達および細胞内で起こるその他の現象において、タンパク質の迅速かつ動的な調節が必要です。ほとんどの場合においてこれらの機構は、標的タンパク質の非常に小さな部分修飾が関与しており、タンパク質調節プロセスの把握は科学者にとって困難なものでした。リン酸化、ユビキチン化、SUMO化またはアセチル化が関与する重要な調節機構の解析は、歴史的に時間と労力を必要としていました。Cytoskeleton社はシグナル伝達機構に関与するタンパク質修飾の簡便かつ迅速な解析を可能とするため、キット内容の最適化を行い、わずか1日でタンパク質の内因性修飾の解析が行えるようになりました。

タンパク質の内因性修飾


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特長

  • キットに含まれる各試薬を最適化することにより、きわめて高い感度を実現しました。
  • 測定回数:30 assays
  • 適用:
    • 一過性の調節機構の研究
    • 複数経路のタンパク質シグナル伝達の測定
    • 標的タンパク質の新しい修飾の発見
    • 内因性または一過性発現タンパク質のシグナル伝達の測定

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使用例

Signal-Seeker Phosphotyrosine Detection Kit(#BK160

特異性の検証例

Phosphotyrosine Beadsのチロシンリン酸化タンパク質に対する特異性の検証例

  • pY-BSA:Phosphotyrosine-BSA conjugate
  • pS-BSA:Phosphoserine-BSA conjugate
  • pThr-BSA:Phosphothreonine-BSA conjugate

ウエスタンブロットを用いた抗pY抗体(#APY03)のpY修飾タンパク質に対する特異性(左)の検証例

対象として抗pS抗体(中央)および抗pThr抗体(右)を用いた。
細胞ライセート20 μgを以下の条件で処理し、各抗体でウエスタンブロットを実施した。

  • pV:100 mMのH2O2活性化過バナジン酸(pervabadate:チロシンホスファターゼ阻害物質)を10分間未処理(-)/処理(+)。
  • Cal A:50 mMのカリキュリンA(calyculin A:セリン/スレオニン阻害物質)を1時間未処理(-)/処理(+)。

チロシンリン酸化タンパク質に対するAPY03-beadsの特異性のウエスタンブロットによる検証例

細胞ライセートは、Single-Seeker Phosphotyrosine Detection Kitを用いて免疫沈降を行った。

  • 左図:HeLa細胞を30分間、100 μMのH2O2により活性化したオルトバナジウム酸ナトリウムで未処理(-)/処理(+)。
  • 右図:A431細胞を24時間無血清で飢餓状態とし、50 ng/mlのEGFで5分間未処理(-)/処理(+)。


Signal-Seeker Ubiquitination Detection Kit(#BK161

ユビキチン ウエスタンブロット

ユビキチン化Rac1の検出例

Swiss 3T3細胞を10 μMのプロテアーゼ阻害物質MG132で3時間処理し、Signal-Seeker Ubiquitination Detection Kitマニュアルに従ってBLASTバッファーで細胞ライセートを調製した。細胞ライセートの各300 μgを、細菌毒素CNF1で未処理(Lane 3)または3時間処理(Lane 4)し、抗Rac1抗体を用いてウエスタンブロットを行った結果、既報*1の通りCNF1処理によるRac1のモノおよびポリユビキチン化物を検出した。

  • Lane 1:3%細胞ライセート
  • Lane 2:コントロールビーズ+細胞ライセート
  • Lane 3:CNF1未処理
  • Lane 4:CNF1処理

*1 : Torrino, S., et al., Developmental Cell, 21, 959~965 (2011).


ユビキチン ウエスタンブロット

ユビキチン化p53/全タンパクの検出例

HeLa細胞を70%コンフルエントまで培養および採取し、BLASTバッファーを用いて溶解後、各アッセイ細胞ライセート500μgをSignal-Seeker Ubiquitin Detection Kitのマニュアルに従って処理した。ウエスタンブロットAは抗p53抗体でプローブしたものを示し、ウエスタンブロットBはブロットAをHRP標識抗ユビキチン抗体によりリプローブしたものを示す。ウエスタンブロットAでは、ユビキチン化p53が既報*2の通り明瞭に視認された。

  • Lane A1:2%細胞ライセート
  • Lane A2:ubiquitin affinity beadsを用いて濃縮したHeLa細胞ライセート500μgの免疫沈降物
  • Lane B1&2:ウエスタンブロットAをHRP標識抗ユビキチン抗体によりリプローブした結果

*2 : Jin, L., et al., Onc. Rep., , 29, 1983~1990 (2013).

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使用文献

本製品の使用文献については、こちらをご覧下さい。

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キット内容

商品コードをクリックすると、直接価格表がご覧いただけます。キット内容の●にリンクがあるものは、単品でご購入いただけます。残りのキット内容物は、原則として単品でご購入いただけません。

品名 Signal-Seeker Phosphotyrosine
Detection Kit
Signal-Seeker Ubiquitination
Detection Kit
Signal-Seeker SUMOylation
1 Detection Kit
Signal-Seeker SUMOylation
2/3 Detection Kit
商品コード BK160 BK162 BK165 BK161
BLAST lysis buffer
BLAST dilution buffer
BLASTR-2 wash buffer
Protease inhibitor cocktail
Tyrosine phosphatase inhibitor
(Pre-activated sodium orhtovanadate)
De-ubiquitination SUMOylation
inhibitor(N-ethylmaleimide & TPEN)
Phosphotyrosine affinity beads
Ubiquitin affinity beads 1
SUMO 1 affinity beads 1
SUMO-2/3 affinity beads 1
Control beads
Anti-phosphotyrosine HRP antibody
Anti-ubiquitin HRP antibody
Anti-SUMO-1 antibody
Anti-SUMO-2/3- HRP antibody
Precision Red advanced protein assay reagent
Bead elution buffer
DMSO
Chemiluminescent detection reagent A / B
Spin column/Collection tube
BlastR filters

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[在庫・価格 :2024年04月20日 18時15分現在]

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Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads
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抗原種 免疫動物 クラス 標識 Unlabeled
交差性 適用
クロナリティ フォーマット 性状 吸収処理
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Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

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法規制等
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抗原種 免疫動物 Mouse クラス IgG 標識 Unlabeled
交差性 適用 IF,IP
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抗原種 免疫動物
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抗原種 免疫動物 Mouse
交差性 適用 IF,IP,Western Blot
標識 Unlabeled 性状 Protein A/G Affinity Purified
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抗原種 免疫動物
交差性 適用
標識 Unlabeled 性状
吸収処理 クラス
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抗原種 免疫動物 Mouse
交差性 適用 IF,IP
標識 Unlabeled 性状 Protein A/G Affinity Purified
吸収処理 クラス IgG
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納期 文献数
Ubiquitin Affinity Beads 1
1週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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法規制等
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Ubiquitin Affinity Beads 1

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法規制等
保存条件 4℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
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別包装品 別包装品あり
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保存条件 4℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
抗原種 免疫動物 Mouse
交差性 Wide range of species 適用 IF,Western Blot
標識 Unlabeled 性状 Protein A/G Affinity Purified
吸収処理 クラス IgG
クロナリティ フォーマット
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[在庫・価格 :2024年04月20日 18時15分現在]

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保存条件 4℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年7月1日号 p.24
ニュース2021年7月1日号 p.14

製品記事 Signal-Seekerシリーズ
ユビキチン・プロテアソーム特集
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Signal-Seeker SUMOylation-1 Detection Kit (10 assays)
1週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年7月1日号 p.24
ニュース2021年7月1日号 p.14

製品記事 Signal-Seeker SUMOylation 1 Detection Kit
Signal-Seekerシリーズ
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Signal-Seeker SUMOylation-1 Detection Kit (30 assays)
1週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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保存条件 4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年7月1日号 p.24
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製品記事 Signal-Seeker SUMOylation 1 Detection Kit
Signal-Seekerシリーズ
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Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit (10 assays)
1週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 1
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保存条件 4℃ 法規備考
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Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit (30 assays)
1週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 2
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[在庫・価格 :2024年04月20日 18時15分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

Signal-Seeker Phosphotyrosine Detection Kit (10 assays)

文献数: 2

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Signal-Seeker Phosphotyrosine Detection Kit (30 assays)

文献数: 2

説明文 アフィニティービーズを用いて,細胞や組織中のリン酸化チロシンを濃縮できるキットです。濃縮したタンパク質は,抗リン酸化チロシン抗体を用いたウエスタンブロッティングにより分析できる。測定回数:30 Assays。
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Signal-Seeker SUMOylation Detection Kit (10 assays)

文献数: 2

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Signal-Seeker SUMOylation Detection Kit (30 assays)

文献数: 2

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Signal-Seeker Ubiquitination Detection Kit (10assays)

文献数: 2

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ニュース2021年7月1日号 p.14

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Signal-Seeker Ubiquitination Detection Kit

文献数: 4

説明文 アフィニティービーズを用いて,細胞や組織中のユビキチン化タンパク質を濃縮できるキットです。濃縮したタンパク質は,抗ユビキチン抗体を用いたウエスタンブロッティングにより分析できる。測定回数:30 Assays。
法規制等
保存条件 4℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年7月1日号 p.24
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Signal-Seeker SUMOylation-1 Detection Kit (10 assays)

文献数: 0

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法規制等
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Signal-Seeker SUMOylation-1 Detection Kit (30 assays)

文献数: 0

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法規制等
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Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit (10 assays)

文献数: 1

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Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit (30 assays)

文献数: 2

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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