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コンベンショナルノックアウトマウス作製受託サービス

掲載日情報:2016/11/01 現在Webページ番号:7813

コンベンショナルノックアウトマウスのイメージ

コンベンショナル・ノックアウトマウス(完全ノックアウトマウス 、単純ノックアウトマウスともいいます)の作製サービスをご提供いたします。
標的となる遺伝子のエキソンを薬剤耐性遺伝子で置き換えることにより、全身の細胞で標的遺伝子を破壊いたします。標的遺伝子名をお知らせ下さい。遺伝子情報に基づき、最適なベクター設計をご提案させていただきます。


作業概要・価格

工程作業内容期間価格
相同組換え
ベクターの構築
1. 標的遺伝子に関する情報をデータベースにより取得し、デザイン案を作製
2. 相同組換え領域のクローニング
3. クローニング産物と薬剤耐性遺伝子の組み合わせにより、相同組換えベクターを構築
4. スクリーニング条件設定のためのコントロール・ベクターを作製
2~3か月 88万円
組換え
ES細胞株の樹立
5. ES細胞株へのエレクトロポレーション
6. 薬剤耐性ESクローンのピックアップ
7. PCRによるスクリーニング
8. PCR解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えESクローンを樹立
3~4か月 140万円
キメラマウス作製 9. 最大3クローンのES細胞を用いて、キメラマウス作製(すべてのキメラマウスがES細胞寄与率80%を下回る場合、再作業) 約3か月 70万円
ヘテロマウス作製 10. 自然交配による生殖系列キメラマウスの同定(ES細胞寄与率上位4匹のキメラマウスを、野生型マウスと交配)
11. F1ヘテロマウスの取得
約3か月 70万円
以上合計 納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。 368万円

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作業詳細

(1)遺伝子改変ベクターの設計

まずお客様がご希望される遺伝子をデータベースで調べます。予想されるタンパク質の機能を完全に破壊するために、最適のエキソンを選びます。またお客様でエキソンにご指定がある場合や複数のエキソンの欠失にも対応可能です。周辺領域のクローニングも株式会社安評センターから提案します。

(2)遺伝子改変用ベクターの構築

より具体的な案を提示して、ベクター構築に取り掛かります。通常、標的遺伝子の周辺領域はPCRにて増幅し、クローニングします。

(3)遺伝子導入から組換えES 細胞を樹立

構築した遺伝子改変用ベクターをエレクトロポレーションによりES細胞に導入します。PCRによる1次スクリーニング、詳細解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えES細胞を樹立します。

遺伝子導入から組換えES細胞を樹立

(4)樹立した組換えES細胞からマウス作製

樹立した組換えES細胞よりマウスを作製します。計画通り遺伝子改変用ベクターが挿入されたES細胞(最大3クローン)からキメラマウスを作製します。形質転換したES細胞が生殖系列へ移行しているかを確認後、ヘテロマウス作製へと進みます。

樹立した組換えES細胞からマウス作製

(5)納品

お客様のご都合に合わせて、株式会社安評センターからマウスを納品します。通常はヘテロマウス2ペアを納品しますが、キメラマウス・ホモ遺伝子改変マウスの納品でも対応可能です。納品前に遺伝子型検出のための解析条件を決定します。


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ご注文方法

詳細はお気軽にお問い合わせ下さい。

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