small RNA解析、成功の分岐点 NGSによるmiRNA発現解析を成功させるための5つのポイント

• 解析結果を左右するワークフロー設計
• NGSを用いたmiRNA解析の流れ
• NGSによるmiRNA解析で押さえておきたい5つのポイント
• miRNA解析に適したRNA抽出・試料安定化関連製品
• 関連受託サービス

解析結果を左右するワークフロー設計

目次に戻る

NGSを用いたmiRNA解析の流れ

工程	ポイント
1. 試料採取	採取後のRNAプロファイルの変化を抑えるため、試料を適切に保存・安定化する。
2. RNA抽出	夾雑物を十分に除去し、miRNAなどのsmall RNAを効率よく回収できる抽出法を選択する。
3. ライブラリー調製	工程由来のバイアスを抑え、再現性の高いライブラリーを作製する。
4. QC・シークエンシング	ライブラリーのサイズや濃度を確認・定量し、シークエンシングに適した品質であることを確認する。
5. データ解析	トリミングなどにより低品質塩基を除去し、信頼性の高い解析結果につなげる。

目次に戻る

NGSによるmiRNA解析で押さえておきたい5つのポイント

1. 試料採取：RNAプロファイルの変化を抑える

   試料採取後、RNAプロファイルは短時間で変化する可能性があります。正確なmiRNA発現解析を行うためには、採取直後からRNAを安定化し、small RNAプロファイルの変化を抑えることが重要です。

2. RNA抽出：small RNAを十分に回収できる方法を選ぶ

   RNA抽出法によっては、miRNAなどのsmall RNAが十分に回収されない場合があります。信頼性の高い解析結果を得るためには、夾雑物を十分に除去しつつ、small RNAを効率よく回収できる抽出法を選択することが重要です。

3. ライブラリー調製：工程由来のバイアスを抑える

   miRNAライブラリー調製は複数の工程から構成されるため、各工程でバイアスが生じ、解析結果に影響する可能性があります。再現性の高いデータを得るためには、最適化されたプロトコルを用いることが重要です。

4. QC・シークエンシング：ライブラリー品質を確認する

   シークエンシング前には、miRNAライブラリーが適切に調製されていることを確認し、そのサイズと濃度を評価します。自動電気泳動システムによるサイズ確認や、qPCRによるライブラリー量の定量などを行い、シークエンシングに適した品質であることを確認することが重要です。

5. データ解析：トリミングなどにより低品質塩基を除去する

   NGSでは大量の配列データが得られるため、解析前の品質管理が重要です。低品質塩基をトリミングなどによって除去することで、技術的要因に由来するエラーを抑え、より信頼性の高いmiRNA発現解析につなげることができます。

目次に戻る

miRNA解析に適したRNA抽出・試料安定化関連製品

分類	品名	概要
試料安定化	DNA / RNA Shield	DNA/RNAを含む各種試料の保存に適したAll-in-one保存試薬です。試料採取後の核酸分解やRNAプロファイルの変化を抑え、RNA解析用試料の保存・輸送に有用です。
RNA抽出	Direct-zol RNA Kit	TRI Reagent、TRIzolなどで溶解した試料から、small RNAを含むtotal RNAを抽出・精製できるキットです。
RNA抽出	Quick-RNA Kit	細胞や軟組織試料などから、small RNAを含む高品質なtotal RNAを迅速に抽出するキットです。

目次に戻る

関連受託サービス

• RNAシークエンシング解析受託サービス（Zymo Research社）
  microRNA-Seqを含むRNA-Seq解析受託サービスです。Basic ServiceとFull Serviceから目的に応じて選択できます。
  ※ RNA抽出はサービスパッケージには含まれていません。

目次に戻る