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糖鎖-タンパク質間相互作用の解析に Glysite Explorer in situ PLA Glycan Detection Kit

掲載日情報:2025/11/14 現在Webページ番号:72788

in situ近接ライゲーションアッセイ(in situ Proximity Ligation Assay:isPLA)によって、目的のタンパク質に近接した糖鎖を高感度に検出できるキットです。
Vector Laboratories社の高品質なレクチンと、Navinci Diagnostics社の独自技術に基づいたin situ近接リガーゼアッセイ(isPLA)法を組み合わせることで、糖鎖-タンパク質間の相互作用を空間的に解析することができます。
なお、本製品(#GEK-1000)と併せて、Glysite Explorer Lectinをご購入いただく必要があります。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


Glysite Kitヒト扁桃腺CD20_SNAレクチン染色

本製品(#GEK-1000)、SNA Lectin(#GEK-1309)、抗CD20抗体を用いて染色したホルマリン固定パラフィン包埋ヒト扁桃腺組織。
対比染色:Hematoxylin QS(キット構成品。単品の商品コード#H-3404

Glysite Kit_BT474細胞_HER2_SNAレクチン染色

本製品(#GEK-1000)、SNA Lectin(#GEK-1309)、抗HER2抗体を用いて染色したホルマリン固定パラフィン包埋BT474細胞ペレット。
対比染色:Hematoxylin QS(キット構成品。単品の商品コード#H-3404


特長

  • 40 nm以内の距離で近接する糖鎖とタンパク質を可視化します。
  • 標準的なIHCおよびisPLAのワークフローに適合するよう設計されています。
  • 使いやすく、信頼性・再現性の高い手法です。
  • 疾患生物学、バイオマーカー探索、トランスレーショナル研究におけるタンパク質糖鎖修飾の理解に有用です。
  • それぞれの試薬を50~100 μl使用する場合、1キットで50~100試料を処理できます。
  • 適応試料:FFPE組織、FFPE細胞ペレット、固定細胞

別途、マウスまたはウサギ由来の一次抗体、およびGlysite Explorer Lectinをご用意下さい。


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測定原理

Glysite Explorer Kit測定原理

本画像はBioRender.comにて作成


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本キットで検出できる糖鎖-タンパク質間相互作用

標的タンパク質と同一分子内にある糖鎖修飾

標的タンパク質と同一分子内
にある糖鎖修飾

標的タンパク質と異なるタンパク質上の糖鎖修飾

標的タンパク質と異なる
タンパク質上の糖鎖修飾

標的タンパク質と隣接した細胞表面にある糖鎖修飾

標的タンパク質と隣接した細胞表面にある糖鎖修飾

本画像はBioRender.comにて作成


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製品紹介動画



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Glysite Explorer Lectinとその特異性

本製品に併せて、別売のGlysite Explorer Lectinを1種類以上ご購入いただく必要があります。商品コードをクリックすると、それぞれのGlysite Explorer Lectinの価格表をご覧になれます。

レクチンの種類糖鎖結合特異性糖鎖のカテゴリー商品コード
AAL Lectinα-FucoseFucose GEK-1399
ECL LectinTerminal type 2 LacNAc、Terminal type 2 LacdiNAcLacNAc GEK-1149
GNL LectinTerminal α1-3 or α1-6 MannoseMannose GEK-1249
Jacalin LectinCore 1 and 3 O-Glycans、3-Substituted GalNAcαCore O-Glycan GEK-1159
LCA Lectinα1-6 FucoseFucose GEK-1049
MALⅡ Lectinα2-3-Sialylated Galβ1-3GalNAc in O-Glycans、3' Sulfated GalβSialic Acid and Sulfation GEK-1269
PHA-L Lectinβ1-6 branched N-Glycans、Binds tri- and tetraantennaryComplex N-Glycan GEK-1119
SNA Lectinα2-6 Sialylated LacNAc、α2-6 Sialylated LacdiNAcSialic Acid GEK-1309
WFA LectinTerminal GalNAcβ、Terminal GalNAcα、Terminal multiantennary LacNAcGalNAc GEK-1359
WGA LectinTerminal GlcNAcβ、Terminal GlcNAcα、Terminal N-Acetyl-containing GlycansGlcNAc GEK-1029

参考文献:Bojar, D., et al. "A Useful Guide to Lectin Binding: Machine-Learning Directed Annotation of 57 Unique Lectin Specificities.", ACS Chem. Biol., 17(11), 2993-3012(2022). [PMID:35084820]


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使用例

Glysite Kitヒト退形成性星細胞腫_GFAP_SNAレクチン染色

ホルマリン固定パラフィン包埋の健常ヒト脳組織(上段)およびヒト悪性脳腫瘍組織(退形成性星細胞腫、下段)について、それぞれ下記のアッセイを行った。
右:本製品(#GEK-1000)、SNA Lectin(#GEK-1309)、抗GFAP抗体を用いたin situ近接ライゲーションアッセイ
中:SNA Lectinを用いた免疫組織染色
左:抗GFAP抗体を用いた免疫組織染色


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FAQ

Q1. このキットはどのような製品ですか?

A1. DNA標識プローブとDNA増幅技術を用いてタンパク質と糖鎖の近接性を同定する、高感度の空間検出法のキットです。

Q2. キットで検出可能な糖鎖とタンパク質間の最小・最大距離はどれくらいですか?

A2. 糖鎖とタンパク質が40 nm以内に存在する場合に可視化が可能です。

Q3. キットのほかに試薬を購入する必要がありますか?

A3. Glysite Explorer Lectinをご購入いただく必要があります。そのほかの試薬類についてはユーザーガイド(価格表の「データシート」に貼付)をご確認下さい。

Q4. どの動物種の組織切片に使用できますか?

A4. 本製品はヒト組織で検証を行っています。他の動物種でも使用できる可能性はありますが、内在性IgGが問題とならないような一次抗体をご選択下さい。

Q5. どのような試料に使用できますか?

A5. ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織、FFPE細胞、および固定細胞での使用が検証されています。現時点では凍結組織試料への使用は推奨されていません。

Q6. 厚みのある切片(>10 μm)や遊離浮遊切片に使用できますか?

A6. 本製品の試薬濃度やインキュベーション時間などのプロトコルは、4~6 μmの切片用に最適化されています。厚みのある切片や遊離浮遊切片は未検証です。これらの染色を希望される方は、ご自身でプロトコルを最適化する必要があります。

Q7. キットに対応した一次抗体の免疫動物種は何ですか?

A7. キットには、それぞれプローブが標識された抗マウス抗体および抗ウサギ抗体の2種類の二次抗体が含まれています。そのため、実験の必要性に応じてマウスまたはウサギ由来の一次抗体を、選択したGlysite Explorer Lectinと組み合わせることができます。
なお、試料組織と同種を免疫動物種とした抗体(例:マウス組織にマウス由来の一次抗体)の使用は推奨しません。これにより非特異的結合を最小限に抑え、内在性IgGによる疑陽性シグナルのリスクを低減できます。

Q8. 同一試料でIHCとisPLAの両方を実施できますか?

A8. 本キットを用いたマルチプレックス解析は、一般的に推奨されません。本キットはマルチプレックス解析を行うための検証を行っていません。検出試薬が交差反応せず、適切なコントロールが含まれている場合、一部の状況では可能となる場合があります。

Q9. 推奨するコントロールは何ですか?

A9.
■ ポジティブコントロール
試料中の対象タンパク質の発現を、標準的な免疫組織染色(IHC)、免疫蛍光染色(IF)またはその他のワークフローを用いて確認して下さい。標準的なIHCアッセイにおける一次抗体の最適希釈率を決定し、これをisPLAアッセイの推奨開始希釈率として下さい。
標本中の対象糖鎖の発現を、標準的な免疫組織染色(IHC)、免疫蛍光染色(IF)またはその他のワークフローを用いて確認して下さい。

■ ネガティブコントロール
反応系からGlysite Explorer Lectinおよび/または一次抗体を除外し、非特異的結合またはバックグラウンド染色が存在するかどうかを確認して下さい。

Q10. 試料に添加する試薬量はどのくらいですか?

A10. 試料の大きさに合わせて決定して下さい。試料を十分に覆う量の試薬を添加し、インキュベーション中に試料が乾燥しないようにして下さい。

Q11. 1キットあたり染色可能な試料数はいくつですか?

A11. 染色可能な試料数は試料サイズによって異なります。キットに含まれる試薬で5 mlのWorking solutionが調製でき、スライド1枚あたり50~100 μlの試薬を使用する場合、50~100試料の染色に十分な量です。

Q12. どの封入剤を使うべきでしょうか?

A12. 水溶性および非水溶性封入剤のいずれも使用可能です。水溶性の場合はVectaMount AQ Aqueous Mounting Medium(#H-5501)、非水溶性の場合はVectaMount PT Permanent Mounting Medium(#H-5600)やVectaMount Express Mounting Medium(#H-5700)をおすすめします。

Q13. 陽性シグナルはどんな風に見えるでしょうか?

A13. 近接部位において点状(パンクタ)と呼ばれる明瞭な円形シグナルを生成します。これらは少なくとも20倍対物レンズで観察するのが最適であり、エピトープ密度が低い場合には40倍対物レンズが必要となる場合があります。
対比染色が濃すぎると、PLAシグナルが不明瞭になる可能性があります。陽性シグナルが覆い隠されないよう、Hematoxylin QSのインキュベーション時間は試料ごとに最適化して下さい。染色を行う場合でも、1秒間程度で十分な場合が多いです。
全体的な外観は試料および近傍標的の存在量によって異なります。

Q14. アッセイに要する平均時間はどのくらいですか?

A14. 所要時間は、一次抗体のインキュベーション時間によって異なります。一次抗体のインキュベーション時間が30分の場合、総処理時間は約8時間となります。

Q15. アッセイの途中で一時停止できるステップはありますか?

A15. アッセイを1日以内に完了できない場合、ユーザーガイド(価格表の「データシート」に貼付)のステップ13のレクチン溶液インキュベーション後、組織切片をタンパク質希釈液中に4℃で一晩保存できます。試料を乾燥させないで下さい。

Q16. キットに含まれるDAB以外のペルオキシダーゼ基質を使用できますか?

A16. キットには、Vector Laboratories社で最も感度の高いペルオキシダーゼ基質であるImmPACT® DAB(単品の商品コード#SK-4105)が含まれています。他のペルオキシダーゼ基質も使用可能であり、ImmPACT® NovaRed(#SK-4805)、ImmPACT® VIP(#SK-4605)、ImmPACT® SG(#SK-4705)で検証済みです。ただし、すべてのペルオキシダーゼ基質が同等の感度と染色品質を有するのではないため、最適化が必要です。

Q17. 蛍光染色は行えますか?

A17. 現時点では蛍光染色用キットはありません。検出はDABなどの発色色素で行います(Q16. 参照)。

Q18. キットおよびレクチンの保存温度は何ですか?

A18. キットは2つのBoxで構成されており、それぞれに貼付されたラベルには適切な保存条件が記載されています。Box 1は4℃で、Box 2は-20℃で保管して下さい。
Glysite Explorer Lectinは4℃で保管して下さい。


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キット内容

キット本体に併せて、別売のGlysite Explorer Lectinを1種類以上ご購入いただく必要があります。

  • BLOXALL® blocking solution
  • Blocking buffer 1/2A/2B
  • Protein diluent
  • Lectin probe
  • Mouse probe
  • Rabbit probe
  • ImmPRESS® HRP reagent
  • ImmPRESS® HRP diluent
  • ImmPACT® DAB reagent
  • ImmPACT® DAB diluent
  • Hematoxylin QS
  • Buffer 1/2
  • Enzyme 1/2

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価格

Glysite Explorer in situ PLA Glycan Detection Kit

本製品に併せて、下記のGlysite Explorer Lectinを1種類以上ご購入いただく必要があります。

[在庫・価格 :2025年11月15日 15時35分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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納期 文献数
Glysite Explorer in situ PLA Glycan Detection Kit
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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近接ライゲーションアッセイによりタンパク質の糖鎖修飾を空間的に解析するキット。※別売のGlysite Explorer Lectinを1種類以上ご購入いただく必要があります。
法規制等 医薬用外毒物,医薬用外劇物
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[在庫・価格 :2025年11月15日 15時35分現在]

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Glysite Explorer in situ PLA Glycan Detection Kit

文献数: 0

説明文 近接ライゲーションアッセイによりタンパク質の糖鎖修飾を空間的に解析するキット。※別売のGlysite Explorer Lectinを1種類以上ご購入いただく必要があります。
法規制等 医薬用外毒物,医薬用外劇物
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Glysite Explorer Lectin

[在庫・価格 :2025年11月15日 15時35分現在]

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Glysite Explorer Lectin, AAL Lectin (50x)
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Glysite Explorer in situ PLA Glycan Detection Kit(#GEK-1000)用の高品質なレクチン。
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Glysite Explorer in situ PLA Glycan Detection Kit(#GEK-1000)用の高品質なレクチン。
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Glysite Explorer Lectin, AAL Lectin (50x)

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。