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メーカー：	Horizon社Dharmacon製品 OriGene Technologies
	Horizon社Dharmacon製品(メーカー略称：DHA)のRNAiコレクション，cDNAコレクション，Yeastコレクションなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら OriGene Technologies社(メーカー略称：ORI)のTrueClone / TrueORF / TrueORF Gold cDNAクローンなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら
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Dox＋Shield1でCRISPR活性を低バックグラウンドに時間制御 Strict-R Inducible Lentiviral System

掲載日情報：2026/03/06 現在Webページ番号：72147

ホライゾンディスカバリー /
Horizon Discovery Ltd.
[メーカー略称：DHA]

ドキシサイクリン（Doxycycline、Dox）とShield1の2種類の低分子による二重制御で、CRISPR活性のON／OFFとタイミングを厳密に制御できる誘導発現用レンチウイルスシステムです。Tet-On 3Gによる転写制御に加え、FKBP12由来の不安定化ドメイン（Destabilizing Domain、DD）による翻訳後制御を組み合わせることで、バックグラウンド活性を抑えた時間制御実験を可能にします。Strict-R Inducible Lentiviral SystemはCRISPRko（ノックアウト）だけでなく、CRISPRa（活性化）やCRISPRi（転写抑制）にも対応し、用途に応じて選択できます。

※ dCas9-VPRと、プロモーター領域や転写開始部位付近の配列を標的としたガイドRNA（sgRNA）を同時発現できるレンチウイルスベクターについてはCRISPRmod CRISPRa All-in-one Lentiviral sgRNAをご覧下さい。
※ Dharmacon製品（メーカー略称：DHA）につきまして、2023年4月1日より製品ご注文時にHandling Fee（手数料）を本体価格とは別にご請求させていただきます。詳細は「Handling Feeについてのご案内」をご確認下さい。
※ Horizon｜Dharmacon製品をご注文いただくには、事前にユーザー登録が必要です。ご注文方法の詳細はこちらをご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

特長
製品ラインナップ
Strict-R Inducible CRISPR制御の原理
操作方法概略
使用例
ご注文方法
価格
関連製品

特長

標的遺伝子の制御を2種類の低分子化合物で誘導することにより、遺伝子機能（活性）を制御できます。
CRISPRエフェクター（CRISPRko／CRISPRa／CRISPRi）により、目的に応じた遺伝子機能の操作が可能です。
Tet-On 3GシステムとFKBP12由来デグロンシステムを統合することで、ドキシサイクリンおよびShield1の添加に応答しCRISPRエフェクター発現を迅速誘導でき、動的で時間制御された実験が可能です。
単一のレンチウイルスベクターから発現するため、既存の実験ワークフローへの統合が容易です。
遺伝子発現研究、機能ゲノミクス解析、将来的な治療応用の検討など、幅広い研究用途に適用できます。
直接形質導入可能な高品質の精製レンチウイルス粒子として提供され、細胞毒性は最小限です（Titer：≥1×10⁷ TU/ml）。
Hygromycin、Blasticidin、EGFPなどの選択マーカー（またはレポーター）から選択可能です。

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

Strict-R Inducible CRISPRko Lentiviral System

標的遺伝子のノックアウトをする。

品名	商品コード
Strict-R Inducible CRISPRko Lentiviral EGFP-Cas9 Lentiviral Particles	VCAS13524
Strict-R Inducible CRISPRko Lentiviral Blasticidin-Cas9 Lentiviral Particles	VCAS13523
Strict-R Inducible CRISPRko Lentiviral Hygromycin-Cas9 Lentiviral Particles	VCAS13525

Strict-R Inducible CRISPRa Lentiviral System

標的遺伝子の転写活性化をする。

品名	商品コード
Strict-R Inducible EGFP-dCas9-VPR Lentiviral Particles	VCAS12870
Strict-R Inducible Blast-dCas9-VPR Lentiviral Particles	VCAS12871

Strict-R Inducible CRISPRi Lentiviral System

標的遺伝子の転写抑制をする。

品名	商品コード
Strict-R Inducible CRISPRi EGFP-dCas9-SALL1-SDS3 Lentiviral Particles	VCAS13517
Strict-R Inducible CRISPRi Hygromycin-dCas9-SALL1-SDS3 Lentiviral Particles	VCAS13518

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Strict-R Inducible CRISPR制御の原理

System OFF：ドキシサイクリンおよびShield1が非存在下では、OFF状態（不活性）に保たれます。TRE3Gプロモーターから生じるごくわずかなリーキー転写によりデグロンタグ付きCRISPRエフェクター（dCas9系／Cas9系）が生成しますが、このタンパク質はプロテアソームにより速やかに分解されるため、意図しないバックグラウンド活性化は最小限に抑えられます。

System ON：ドキシサイクリンの添加によりTet-On 3Gトランスアクチベーターが活性化され、強力なCRISPRエフェクター発現が誘導されます。さらにShield1を添加することで、発現したデグロンタグ付きCRISPRエフェクタータンパク質が安定化し、細胞内での蓄積が促進されるため、用途に応じて標的遺伝子の活性化（CRISPRa）／抑制（CRISPRi）／ノックアウト（CRISPRko）が可能となります。

Strict-R Inducible CRISPRの二重制御メカニズム

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操作方法概略

Strict-R誘導性レンチウイルスシステムを使用した遺伝子過剰発現実験のワークフロー

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使用例

Strict-R Inducible CRISPRko Lentiviral Hygromycin-Cas9 Lentiviral Systemを用いたCD71ノックアウト解析

Jurkat細胞、U2OS細胞、A549細胞、それぞれにStrict-R Inducible CRISPRko Lentiviral Hygromycin-Cas9 Lentiviral Systemを導入して、発現細胞を樹立した。次いで、CD71を標的とするEdit-R Predesigned Human Lentiviral sgRNA（#VSGH12605）、またはEdit-R Lentiviral sgRNA Non-targeting Control #2（#VSGC12626）をMOI 0.3で導入し、導入後に薬剤選択した。得られた細胞において、ドキシサイクリンおよびShield1で誘導する条件、または非誘導条件で培養し、所定の日数後に細胞を回収した。細胞を抗ヒトCD71抗体で染色し、フローサイトメトリーによりレセプターのノックアウトを評価した。非標的コントロール導入細胞を用いて、ポジティブコントロールおよびアイソタイプコントロールからゲートを設定した。

Strict-R Inducible CRISPRa Lentiviral Systemを用いたPOU5F1遺伝子活性化の評価

K562細胞に、各dCas9-VPRコンストラクトを有するレンチウイルスをMOI 0.3以下で導入し、ブラストサイジン存在下で2週間培養して、耐性細胞集団を確立した。次に、POU5F1を標的とするCRISPRmod CRISPRa Lentiviral sgRNAまたは非標的対照（NTC）をMOI 0.3で導入し、48時間後にピューロマイシンで選択し、5日間培養して非耐性細胞を除去した。
96ウェルプレートに20,000細胞/wellで播種し、ドキシサイクリンおよびShield1を24時間添加した後、細胞を回収した。総RNAを抽出し、RT-qPCRで発現量を測定した。POU5F1発現量はACTBを内因性対照とするΔΔCq法で算出し、NTCで正規化した。TRE3GとFKBP12由来不安定化ドメイン（DD）を組み合わせた本製品は、非刺激時のバックグラウンド発現活性化を抑えつつ、2種類の低分子添加による強力な標的遺伝子活性化が可能であることが示された。

Strict-R Inducible CRISPRa Lentiviral Systemを用いたさまざまな細胞種における遺伝子活性化性能の評価

U2OS細胞、HeLa細胞、ヒトiPS細胞（hiPSC）それぞれについて、hEF1αプロモーター制御下で本製品または通常のdCas9-VPR（図中黒）を発現する細胞に、EGFRまたはASCL1を標的とするCRISPRmod CRISPRa lentiviral sgRNA、または非標的対照（NTC）をMOI 0.3で導入した。ピューロマイシンで選択した後、ドキシサイクリンおよびShield1を添加し、48時間刺激した。
総RNAを抽出し、RT-qPCRで発現量を測定した。各遺伝子の発現量はACTBを内因性対照とするΔΔCq法で算出し、NTCで正規化した。その結果、本製品は、48時間の添加により標的遺伝子を通常のdCas9-VPRと同程度まで強力に活性化し、非刺激条件ではバックグラウンド発現活性化を最小限に抑えられることが示された。

Strict-R CRISPRi Lentiviral Systemの細胞株間再現性

U2OS細胞、K562細胞、Jurkat細胞それぞれについて、Strict-R CRISPRi Lentiviral System（緑色）を発現する細胞、または構成的プロモーター（紫色：hEF1α、mCMV、hCMV。各細胞株で最適な活性が得られるものを選択）制御下でdCas9-SALL1-SDS3を発現する細胞を用いた。PPIBまたはSEL1Lを標的とするCRISPRmod CRISPRi lentiviral sgRNA（Targeting sgRNA＋）、または非標的コントロール（NTC＋）を導入し、薬剤選択後にドキシサイクリンおよびShield1で誘導した。
回収した細胞から全RNAを抽出し、RT-qPCRで相対的な遺伝子発現量を測定した。各遺伝子の相対発現量は、ACTBをハウスキーピング遺伝子としてΔΔCq法で算出し、NTCに正規化した。

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ご注文方法

Horizon | Dharmacon製品をご注文いただくには、事前にユーザー登録が必要です。
初めてご注文いただくお客様はユーザー登録・ご注文方法の詳細をHorizon | Dharmacon製品ご注文方法でご覧下さい。
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