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メーカー：	Horizon社Dharmacon製品 OriGene Technologies
	Horizon社Dharmacon製品(メーカー略称：DHA)のRNAiコレクション，cDNAコレクション，Yeastコレクションなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら OriGene Technologies社(メーカー略称：ORI)のTrueClone / TrueORF / TrueORF Gold cDNAクローンなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら
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HOME > 試薬 > 遺伝子工学 > タンパク質発現システム > 哺乳動物細胞発現ベクター > Strict-R Inducible CRISPRa Lentiviral System

Dox＋Shield1で標的遺伝子活性化を低バックグラウンドに制御 Strict-R Inducible CRISPRa Lentiviral System

掲載日情報：2026/01/30 現在Webページ番号：72147

ホライゾンディスカバリー /
Horizon Discovery Ltd.
[メーカー略称：DHA]

Tet-On 3GシステムとFKBP12由来の不安定化ドメイン（Destabilizing domain、DD）を組み合わせたCRISPRa誘導発現用レンチウイルスベクターです。ドキシサイクリン（Doxycycline、Dox）およびShield1の添加・除去によりdCas9-VPR（dCas9と活性化因子の融合タンパク質）の発現量を制御し、標的遺伝子の発現をON／OFFできます。ブラストサイジン耐性遺伝子（BlastR）を選択マーカーとするベクター、またはEGFP発現レポーターベクターから選択可能です。

※ dCas9-VPRと、プロモーター領域や転写開始部位付近の配列を標的としたガイドRNA（sgRNA）を同時発現できるレンチウイルスベクターについてはCRISPRmod CRISPRa All-in-one Lentiviral sgRNAをご覧下さい。
※ Dharmacon製品（メーカー略称：DHA）につきまして、2023年4月1日より製品ご注文時にHandling Fee（手数料）を本体価格とは別にご請求させていただきます。詳細は「Handling Feeについてのご案内」をご確認下さい。
※ Horizon｜Dharmacon製品をご注文いただくには、事前にユーザー登録が必要です。ご注文方法の詳細はこちらをご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

特長
製品ラインナップ
遺伝子活性化制御の原理
操作方法概略
使用例
ご注文方法
価格
関連製品

特長

標的遺伝子の可逆的な活性化を2種類の低分子化合物で誘導することにより、遺伝子発現を制御できます。
dCas9-VPR融合タンパク質（dCas9と活性化因子の融合タンパク質）により、オフターゲット効果を最小限に抑えつつ、転写活性化を最大化します。
Tet-On 3GシステムとFKBP12由来デグロンシステムを統合することで、ドキシサイクリンおよびShield1の添加に応答してdCas9-VPR発現を迅速かつ可逆的に誘導でき、動的で時間制御された実験が可能です。
単一のレンチウイルスベクターから発現するため、既存の実験ワークフローへの統合が容易です。
遺伝子発現研究、機能ゲノミクス解析、将来的な治療応用の検討など、幅広い研究用途に適用できます。
直接形質導入可能な高品質の精製レンチウイルス粒子として提供され、細胞毒性は最小限です（Titer：≥1×10⁷ TU/ml）。
ブラストサイジン耐性遺伝子（BlastR）を選択マーカーとするベクター、またはEGFP発現レポーターベクターから選択可能です。

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名	商品コード
Strict-R Inducible Blast-dCas9-VPR Lentiviral Particles	VCAS12871
Strict-R Inducible EGFP-dCas9-VPR Lentiviral Particles	VCAS12870

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遺伝子活性化制御の原理

System OFF：ドキシサイクリンおよびShield1が非存在下では、OFF状態（不活性）に保たれます。TRE3Gプロモーターから生じるごくわずかなリーキー転写によりデグロンタグ付きdCas9-VPR融合タンパク質が生成しますが、このタンパク質はプロテアソームにより速やかに分解されるため、意図しないバックグラウンド活性化は最小限に抑えられます。

System ON：ドキシサイクリンの添加によりTet-On 3Gトランスアクチベーターが活性化され、強力なdCas9-VPR発現が誘導されます。さらにShield1を添加することで、発現したデグロンタグ付きdCas9-VPRタンパク質が安定化し、細胞内での蓄積が促進されるため、標的遺伝子の厳密な活性化が可能となります。

本製品のベクターマップ

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操作方法概略

Strict-R誘導性レンチウイルスCRISPRaシステムを使用した遺伝子過剰発現実験のワークフロー

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使用例

本製品を用いたPOU5F1遺伝子活性化の評価

K562細胞に、各dCas9-VPRコンストラクトを有するレンチウイルスをMOI 0.3以下で導入し、ブラストサイジン存在下で2週間培養して、耐性細胞集団を確立した。次に、POU5F1を標的とするCRISPRmod CRISPRa Lentiviral sgRNAまたは非標的対照（NTC）をMOI 0.3で導入し、48時間後にピューロマイシンで選択し、5日間培養して非耐性細胞を除去した。
96ウェルプレートに20,000細胞/wellで播種し、ドキシサイクリン＋Shield1を24時間添加したのち、細胞を回収した。総RNAを抽出し、RT-qPCRで発現量を測定した。POU5F1発現量はACTBを内因性対照とするΔΔCq法で算出し、NTCで正規化した。TRE3GとFKBP12由来不安定化ドメイン（DD）を組み合わせた本製品は、非刺激時のバックグラウンド発現活性化を抑えつつ、2種類の低分子添加による強力な標的遺伝子活性化が可能であることが示された。

本製品を用いたさまざまな細胞種における遺伝子活性化性能の評価

U2OS細胞、HeLa細胞、ヒトiPS細胞（hiPSC）それぞれについて、hEF1αプロモーター制御下で本製品または通常のdCas9-VPR（図中黒）を発現する細胞に、EGFRまたはASCL1を標的とするCRISPRmod CRISPRa lentiviral sgRNA、または非標的対照（NTC）をMOI 0.3で導入した。ピューロマイシンで選択した後、ドキシサイクリンおよびShield1を添加し、48時間刺激した。
総RNAを抽出し、RT-qPCRで発現量を測定した。各遺伝子の発現量はACTBを内因性対照とするΔΔCq法で算出し、NTCで正規化した。その結果、本製品は、48時間の添加により標的遺伝子を通常のdCas9-VPRと同程度まで強力に活性化し、非刺激条件ではバックグラウンド発現活性化を最小限に抑えられることが示された。

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ご注文方法

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